Какво показва серологичният кръвен тест? Диагностични мерки- Това най-важният етаппри лечението на всяка болест. Успехът на лечението зависи не само от предписаните лекарства, но и до голяма степен от това колко правилно е поставена диагнозата.
В допълнение, диагнозата помага за предотвратяване на усложнения и съпътстващи заболявания. С помощта на серологичен тест на кръвта на пациента се открива наличието на антитела и антигени. Проучването помага да се открият много заболявания, да се определи тяхната фаза и да се следи напредъкът на лечението.
Какво е серология?
Серологията е клон на имунологията, който изучава реакциите на антигени към антитела. Този раздел на медицината се занимава с изследване на кръвната плазма и нейните имунологични характеристики.
Днес има серологичен кръвен тест за антитела надежден начиноткриване на човешки имунодефицитен вирус, хепатит, бруцелоза, полово предавани болести и други животозастрашаващи заболявания. Нека да разберем в какви случаи се предписва.
Показания за употреба
Необходим е серологичен кръвен тест за идентифициране на причинителя на заболяването, ако е трудно да се постави диагноза.
За да се извърши тази реакция, антигените на патогените се въвеждат в плазмата и след това протичащият процес се изследва от лаборант. Или извършват обратната реакция: в заразената кръв се инжектират антитела, за да се определи специфичната идентичност на патогена.
Обхват на приложение
Това изследване се използва в различни отрасли на медицината. Тази реакция идентифицира специфични клетки и антитела, произведени от тялото за борба с инфекциите и вирусите.
В допълнение, кръвната група на човек се определя чрез серологичен метод.
Подобен серологичен кръвен тест се използва в гинекологията за диагностициране на полово предавани болести. Този метод се използва и за изчерпателни проучваниябременни жени (откриване на токсоплазмоза, ХИВ, сифилис и др.). Преминаването на този тест е задължително при регистрация в предродилна клиника.
При деца се използва серологична реакция за потвърждаване на диагнозата на така наречените „детски“ заболявания (варицела, морбили, рубеола и др.), Ако симптомите нямат изразени прояви и е невъзможно да се идентифицира заболяването чрез анализ на клинични показания. .
Откриване на полово предавани болести
За венеролозите това изследване е наистина незаменимо и ви позволява да поставите диагноза много точно.
При замъглена клинична картина, серологичен кръвен тест за сифилис, лямблиоза, уреаплазмоза, хламидия, херпес и други заболявания може бързо да открие наличието на антитела.
Вирусни и инфекциозни заболявания
Серологичният анализ се използва активно от гастроентеролози, хепатолози и специалисти по инфекциозни заболявания за диагностициране на вирусен хепатит.
Дешифрирането на серологичен кръвен тест позволява да се определи стадият на заболяването и да се отговори на въпроса колко е необходима хоспитализация. в момента. Как да се подготвим правилно?
Подготовка за теста
Серологичните кръвни тестове се правят както в обществени, така и в търговски клиники. Предпочитание трябва да се даде на лаборатория с модерно оборудване и квалифициран персонал.
Биологичните проби за изследване могат да бъдат слюнка и изпражнения, но в повечето случаи се използва венозна кръв на пациента. Кръв за серологичен тест се взема от кубиталната вена в лаборатория. Преди да вземете теста, трябва да се консултирате с Вашия лекар относно подготовката за тази процедура.
За да се подготвите за серологичен тест, трябва да следвате няколко прости правила.
Кръвта се дарява в спокойно състояние преди хранене, тоест на празен стомах. Преди това не трябва да се подлагате на други изследвания, като рентгенови лъчи, ултразвук и др.
Необходимо е да се избягва приема на антибактериални и някои други лекарства няколко седмици преди кръводаряване. Определени препоръки в този случай зависят от заболяването, за което се прави изследването. Например, изследването за хепатит включва изключване мазни хрании алкохол 48 часа преди процедурата.
Реакция на флуоресценция
Сред видовете серологични реакции има флуоресцентна реакция. Тази техника използва реагент, който осветява антителата в кръвния серум.
Създаването на директна серологична реакция включва маркиране на специфични антитела с флуоресцентно вещество. Тази реакция е най-бързата и се извършва на един етап.
Друг вариант за провеждане на такъв анализ се нарича индиректен или RNIF. Провежда се на два етапа. В първия етап антителата не се маркират с флуоресцентни етикети, а във втория се използват подходящо белязани антитела за идентифициране на антигени и антитела. Сиянието се появява само след свързване със специфично антитяло.
Какво показва серологичният кръвен тест? Резултатът от цялата процедура се оценява от специално устройство, което анализира силата на излъчването и разкрива формата и размера на обекта, който се изследва. Патогени инфекциозни заболяваниясе откриват с резултат, чиято достоверност е 90-95%, в зависимост от вида и стадия на патологията.
Ензимен имуноанализ
Тези типове серологично изследване използват уникални, стабилни реагенти. Маркираните вещества изглежда се придържат към желаните антитела. В резултат на това получаваме качествен или количествен резултат.
Ако не се открият изразени маркери, резултатът ще се счита за отрицателен. Ако по време на качествено изследване се открие наличие на антитела в биологични проби, резултатът от теста се счита за положителен. Чрез количествено определяне на клетките анализът дава по-точен резултат.
Анализирайки показателите на анализа (например сумата от открити клетки), специалистът определя дали заболяването е на начален етап, В остър стадий, или е ескалирал хронична формапатология. За да постави диагноза, лекарят взема предвид не само данните от серологично изследване, но и клинична картиназаболявания.
Характеристики на този тест
Извършването на този анализ не винаги е в състояние да осигури 100% увереност, че определено заболяване е открито. Случва се резултатите да са двусмислени и да са необходими други процедури.
Например, по време на тест за бруцелоза, кръвният серум се контролира за самозадържане без антиген. Това значително повишава надеждността на тестването. Тестът за бруцелоза може да бъде положителен или отрицателен и може също да предизвика съмнения.
Ако получите съмнителни резултати, които нямат недвусмислено тълкуване, препоръчително е да направите теста отново. В допълнение, бруцелозата може да бъде открита чрез кръвни култури, тестове костен мозъки цереброспинална течност.
Предимства на серологичния кръвен тест
Диагностичните техники, използващи серологични реакции, се използват широко в съвременната медицинска практика. Това особено често се прави при определяне на вирусни и инфекциозни патологии.
Същите тестове се използват при извършване на географски скрининг и медицински прегледза да се предотврати епидемиологичното разпространение на инфекцията.
Предимствата на метода включват:
- Високо ниво на увереност.
- Бърза реакция и резултати. Резултатите от RSC са известни до 24 часа. В специална ситуация, в болнична обстановка, анализът ще бъде готов след няколко часа.
- Проследяване на развитието на заболяването и ефективността на терапията.
- Ниска цена и достъпност за пациентите.
Недостатъци на метода
Въпреки това, серологичните изследвания също имат своите недостатъци.
Те включват факта, че анализът трябва да вземе предвид инкубационен периодзаболявания, за да се получи по-достоверна картина.
Например определението херпес симплекспървият или вторият тип е възможен само след 14 дни от момента на заразяването. Анализът за наличие на вируса на имунната недостатъчност се извършва 30 дни, 90 дни и шест месеца след контакт със заразен човек.
Разбира се, надеждността на резултатите може да бъде повлияна и от човешкия фактор: пренебрегване на правилата за подготовка за вземане на кръв или грешка, допусната от лабораторния асистент при провеждане на реакцията.
Според статистиката в 5% от случаите може да се получи грешен резултат. Опитен лекар, когато преглежда пациент, след като е проучил клиничната картина, в повечето случаи може да изчисли допуснатата грешка.
Съдържание на темата "Методи за откриване на вируси. Методи за диагностика на микози (гъбични заболявания). Методи за откриване на протозои.":Откриване на антивирусни антитела (AT) в кръвния серум. RTGA. RSK. РИФ. Имуносорбционни методи за откриване на антивирусни антитела.
По-прост и по-достъпен подход - откриване на антивирусни антитела (AT) в серума. Кръвните проби трябва да се вземат два пъти: веднага след появата на клинични признации след 2-3 седмици. Изключително важно е да се изследват точно две серумни проби. Резултатите от едно проучване не могат да се считат за убедителни поради невъзможността да се свърже появата на АТ с настоящия случай. Възможно е тези АТ да циркулират след предишна инфекция. IN подобна ситуацияролята на изследването на серума, получен по време на периода на възстановяване, не може да бъде надценена. Наличието на заболяването по време на периода на събиране на първата проба се показва от не по-малко от четирикратно увеличение на AT титъра, открито по време на изследването на втората проба.
Методи, изброени по-долу не позволяват диференциране на антитела(AT), образуван по време на заболяване и циркулиращ след възстановяване (продължителността на този период варира за различни инфекции). Тъй като за адекватна диагноза е необходимо да се потвърди значително увеличение на AT титрите в две проби, първата проба се изследва в остра фаза, а вторият - по време на възстановителния период (след 2-3 седмици). Получените резултати имат ретроспективен характер и са по-подходящи за провеждане на епидемиологични проучвания.
RTGAоткрива AT, синтезиран срещу хемаглутинини на вируси (например грипен вирус). Методът позволява лесно откриване на такива антитела (AT) в серума на пациента.
RSK- основен серодиагностичен метод вирусни инфекции (сред наличните). Реакцията открива комплемент-фиксиращи IgM и IgG, но не ги диференцира; За да се оптимизират получените резултати, организирането на реакцията изисква определени умения на персонала.
РИФ. Ако е възможно да се получи биопсия на заразена тъкан и наличието на търговски маркирани с флуоресцеин AT комплекти, диагнозата може да бъде потвърдена чрез директна имунофлуоресценция. Реакцията включва инкубиране на изследваната тъкан с АТ, последващото им отстраняване и флуоресцентна микроскопия на пробата.
Имуносорбционни методи за откриване на антивирусни антитела
Имуносорбционни методи(например ELISA и RIA) са по-информативни, тъй като откриват отделно IgM и IgG, което позволява да се направят определени заключения за динамиката инфекциозен процесили състояние на възстановяване. За откриване на AT известно Ag се сорбира върху твърд субстрат (например върху стените на епруветки, пластмасови микроплаки, петриеви панички) и се добавят различни разреждания на серума на пациента. След подходяща инкубация несвързаният AT се отстранява, добавя се антисерум към човешки Ig, белязан с ензим, процедурата на инкубиране и промиване на несвързания AT се повтаря и се добавя малко хромогенен субстрат (чувствителен към действието на ензима). Тъй като промяната на цвета е пропорционална на съдържанието на специфични АТ, е напълно възможно техният титър да се определи спектрофотометрично. При диагностицирането на ХИВ инфекцията методът на имуноблотинг е намерил най-широко приложение.
Реакцията на свързване на комплемента (FFR) се провежда в две фази: в първата фаза антигенът се комбинира с тестовия серум, в който се предполага наличието на антитела, добавя се комплемент и се инкубира в термостат за 30 минути.
Втора фаза: доп хемолитична система(овчи червени кръвни клетки + хемолитичен серум). След инкубация в термостат за 30 минути, резултатът се взема предвид.
При положителен RSC, серумните антитела, комбинирайки се с антигена, образуват имунен комплекс, който прикрепя комплемента, и няма да настъпи хемолиза. Ако реакцията е отрицателна (няма антитела в тестовия серум), комплементът ще остане свободен и ще настъпи хемолиза.
RSC се използва за серологична диагностика на сифилис, гонорея, петнист тифи други заболявания.
Имунните реакции, използващи маркирани антигени и антитела, се основават на факта, че една от съставките, участващи в реакцията (антигени или антитела), се комбинира с някакъв вид етикет, който може лесно да бъде открит. Като етикети се използват флуорохроми (RIF), ензими (ELISA), радиоизотопи (RIA) и електронно-плътни съединения (IEM).
Ензимен имуноанализ(ELISA), подобно на други имунни реакции, се използва: 1) за откриване на неизвестен антиген с помощта на известни антитела или 2) за откриване на антитела в кръвния серум с помощта на известен антиген. Особеността на реакцията е, че известна реакционна съставка се комбинира с ензим (например пероксидаза). Наличието на ензима се определя с помощта на субстрат, който се оцветява, когато ензимът действа. Най-широко използваният е твърдофазният ELISA.
1) Откриване на антиген. Първият етап е адсорбцията на специфични антитела върху твърдата фаза, която се използва като повърхности от полистирен или поливинилхлорид на ямките на пластмасови панели. Вторият етап е добавянето на тестовия материал, в който се предполага наличието на антиген. Антигенът се свързва с антитела. След това ямките се измиват. Третият етап е добавянето на специфичен серум, съдържащ антитела срещу даден антиген, белязани с ензим. Маркираните антитела се прикрепват към антигени и излишъкът се отстранява чрез промиване. По този начин, ако тестовият материал съдържа антигени, върху повърхността на твърдата фаза се образува комплекс антитяло-антиген-антитяло, белязан с ензим. За откриване на ензима се добавя субстрат. За пероксидазата субстратът е ортофенилендиамин, смесен с H 2 O 2 в буферен разтвор. Под действието на ензима се образуват продукти с кафяв цвят.
2) Откриване на антитела. Първият етап е адсорбцията на специфични антигени по стените на ямките. Обикновено в търговските системи за тестване антигените вече са адсорбирани на повърхността на ямките. Вторият етап е добавянето на тест серум. При наличие на антитела се образува комплекс антиген-антитяло. Третият етап - след промиване в ямките се добавят антиглобулинови антитела (антитела срещу човешки глобулини), маркирани с ензим. Резултатите от реакцията се оценяват, както е описано по-горе.
Очевидно положителните и очевидно отрицателните проби, които се предлагат в търговските системи, се използват като контроли.
ELISA се използва за диагностициране на много инфекциозни заболявания, по-специално HIV инфекция и вирусен хепатит.
Имуноблотингът е вид ELISA (комбинация от електрофореза и ELISA). Биополимерите, като антигените на човешкия имунодефицитен вирус, се разделят с помощта на гел електрофореза. След това отделените молекули се пренасят върху повърхността на нитроцелулозата в същия ред, в който са били в гела. Процесът на прехвърляне се нарича петно, а полученият отпечатък е петно. Този отпечатък се влияе от тестовия серум. След това се добавя античовешки глобулинов серум, белязан с пероксидаза, след това субстратът, който под действието на ензима придобива кафяво. Кафяви ивици се образуват на места, където антителата са се комбинирали с антигени. Методът ви позволява да откривате антитела към отделни вирусни антигени.
Радиоимуноанализ (RIA). Методът ви позволява да определите количеството антиген в тестовата проба. Първо към имунния серум се добавя материал, за който се предполага, че съдържа антиген, след което се добавя известен антиген, маркиран с радиоизотоп, например I 125. В резултат на това откриваемият (небелязан) и известен белязан антиген се свързва с ограничено количество антитела. Тъй като белязаният антиген се добавя в определена доза, е възможно да се определи коя част от него е свързана с антитела и коя част е останала свободна поради конкуренция с небелязания антиген и е била отстранена. Количеството белязан антиген, свързан с антителата, се определя с помощта на брояч. Тя е обратно пропорционална на количеството открит антиген.
Имуноелектронна микроскопия (IEM). Антиген, например грипен вирус, е прикрепен към специфичен антисерум, белязан с електронно плътно вещество. Като етикети се използват металосъдържащи протеини (феритин, хемоцианин) или колоидно злато. При микроскопия в електронен микроскопнаправете снимки, показващи вириони на грип с прикачени тъмни точки- молекули на белязани антитела.
Придобит имунитет, неговата разлика от наследствен (специфичен, вроден). Видове придобит имунитет.
Задача.Детето на семейството Валери се разболя от дифтерия. три години. Други членове на семейството не са се разболявали, а майката е имала дифтерия в детството, а бащата е ваксиниран с дифтериен токсоид. По-голямата сестра Наташа, на пет години, не е била ваксинирана с дифтериен токсоид по едно време поради медицински противопоказания, така че трябваше да й дам предотвратяване на извънредни ситуацииизползване на антитоксичен серум против дифтерия. по-малък брат, Виталий, на три месеца, не се разболя, въпреки че не беше ваксиниран с нищо. В къщата има котка и куче, не са болни. За всеки член на семейството и за животни посочете типа имунитет, който ги е предпазил от заболяване.
Какво е антиген? Какви вещества могат да бъдат антигени? Пълноценни антигени и хаптени, как се различават един от друг? Структура на антигена. Как се нарича частта от молекулата на антигена, която определя неговата специфичност? Назовете антигените, които познавате. Какво представляват автоантигените? Антигенна структура на микробна клетка. Флагеларни и соматични антигени; локализация, буквено обозначение, химическа природа, връзка с температурата, метод на приготвяне, практическо приложение. Анатоксин, неговите свойства, приложение, производство. Каква тъкан изгражда имунната система на тялото? Посочете централната и периферни органи имунната системачовек. Опишете процеса на формиране на хуморален и клетъчен имунен отговор. Посочете клетките, които улавят и усвояват антигена; клетки, които взаимодействат при формирането на хуморален имунитет, клетъчен имунитет; клетки, които се трансформират и стават плазмени клетки, които произвеждат антитела; клетки, които стимулират този процес; клетки, които потискат имунния отговор; клетки, които убиват туморни клетки и инфектирани с вируси клетки. Какво представляват антителата? Как да получите имунен серум? Как да получите серум, който да неутрализира тетаничния токсин? Срещу какви антигени се образуват антитоксини, аглутинини и хемолизини? Какви антитела се образуват при въвеждане на дифтериен токсоид в тялото? дифтерийни бактерии? Химическа природа и структура на антителата. Какво е активното място на имуноглобулина? Избройте класовете имуноглобулини и техните свойства. Посочете класа имуноглобулини, които могат да проникнат през плацентата. Към кой клас принадлежат секреторните имуноглобулини? Динамика на натрупване на антитела. Как се различава вторичният имунен отговор от първичния? Както в практическа медицинасе използват знания за динамиката на имунния отговор? Какво представляват имунните реакции, какъв е техният механизъм, фази на реакцията. В кои 2 посоки се използват имунните реакции? Избройте имунните реакции.
Задача.Заменете липсващите думи с „анатоксин“ или „антитоксин“: _________ е антиген, _________ е антитяло, __________ създава, когато се въведе в тялото активен имунитет, __________ създава при въвеждане в тялото пасивен имунитет, __________ се получава чрез имунизиране на животни, ___________ се получава от токсин при излагане на формалин и топлина, ___________ неутрализира токсините, __________ предизвиква образуването на антитела в тялото.
Реакция на аглутинация: какво е аглутинация, какво е антиген, какво е антитяло; методи за настройка, какви контроли се задават и защо; как трябва да изглеждат контролите. Аглутиниращи серуми, какво съдържат, как се получават, за какво се използват; Какъв е титърът на аглутиниращия серум? Индиректна (пасивна) реакция на хемаглутинация: какво служи като антиген в тази реакция, как се получава, механизмът на реакцията. Какво представлява еритроцитният диагностикум? Какво представлява еритроцитният диагностикум с антитела? Реакции на утаяване: какво е утаяване, какво служи като антиген; Как да получите утаяващ серум? Какъв е титърът на преципитиращия серумен? Методи на настройка, практическо приложение.
Реакция на свързване на комплемента (CFR): принцип на CFR; какво се образува, когато имунният серум взаимодейства със специфичен антиген; какво се случва с комплемента, ако той присъства по време на това взаимодействие? Каква е съдбата на комплемента, ако няма специфичен афинитет между антигена и антителата? Ако крайният резултат от RSC е хемолиза, това означава ли положителен или отрицателен резултат? Методика за създаване на RSC. Защо тест серумът трябва да бъде инактивиран? Хемолитичен серум: какво съдържа, как се получава, какъв е титърът и как се определя? Допълнение: химическа природа, връзка с висока температура, къде се съдържа? Как комплементът може да бъде унищожен? Какво на практика се използва като допълнение?
Задача.Петно от кръв е открито по дрехите на обвинения в убийство. По каква реакция може да се определи дали е човешка кръв; какво в тази реакция ще бъде антиген и какво ще бъдат антитела; Какъв диагностичен препарат трябва да има в лабораторията за тази реакция, как се приготвя?
Задача.Как да използвате реакцията на утаяване, за да определите дали проба от месо, доставена за анализ, е голяма едър рогат добитъкили конско месо; какви диагностични лекарства са необходими?
Реакция на утаяване в агар гел, методи за формулиране, практическо приложение.
Серологични изследвания (тестове) — лабораторни методиизследвания, основани на откриване на антитела или антигени в биологичния материал на пациента. Най-често за анализ се използва кръв, по-рядко - урина, слюнка, гноен секрет или тъканни проби, взети по време на биопсия.
Обхват на приложение
- Определяне на кръвна група.
- Идентифициране на специфични туморни протеини - туморни маркери (например при съмнение за рак на яйчниците, простатната жлеза, пикочен мехур, стомах и др.).
- Диагностика на вирусни, бактериални, гъбични, протозойни инфекции (ХИВ, сифилис, токсоплазмоза, хламидия, рубеола, херпес, хелминтози, енцефалит, пренасян от кърлежии т.н.).
- Определяне на хормони, ензими и лекарства, съдържащи се в изследвания биоматериал в незначителни концентрации (под 10−10 g/l).
Същността на метода е серологични тестове
Серологичните тестове се различават по използваната техника, но всички те са резултат от взаимодействието на антигени (чужди съединения) със съответните антитела. Проучването се състои от две последователни фази. Първата фаза се характеризира с взаимодействие между антигени и антитела с образуването имунни комплекси(положителна реакция). Във втората фаза се появяват външни признаци, потвърждавайки наличието на същите тези комплекси (в зависимост от вида на реакцията, това може да бъде мътност на тестовия разтвор, промяна в цвета му, загуба на люспи и др.). Липсата на видими физически явления се счита за отрицателен резултат от теста.
Подготовка за серологични изследвания
Зависи от вида на изследването. За характеристиките на доставката специфичен анализтрябва да бъде казано от медицински специалист при записване за процедурата.
Можете да направите необходимия серологичен тест в клиника Spectra. Поръчваме анализи от най-добрите лаборатории в столицата, работещи по европейски стандарти, което гарантира бързи и надеждни резултати. Нашите лекари ще ви помогнат да дешифрирате заключението и да дадете препоръки за по-нататъшна диагностика.
Сайтът предоставя основна информациясамо за информационни цели. Диагностиката и лечението на заболяванията трябва да се извършват под наблюдението на специалист. Всички лекарства имат противопоказания. Необходима е консултация със специалист!
Серологични кръвен тесте начин лабораторни изследванияопределени антигени или антитела ( специфични протеини) в кръвния серум на пациента, въз основа на имунни реакциитяло. Този методизползвани когато диагностикаинфекциозни заболявания, за да се открие наличието на антитела в кръвта на пациента към определен тип вирус или бактерия, както и да се определи групова принадлежносткръв.Проучван материал
На първо място, за серологичен анализ се използва биологичен материал, събран от пациента:- кръвен серум
- слюнка
- фекална материя
- почва
Метод за извършване на анализ или вземане на кръв
Този анализ не изисква специална подготовка на пациента. Вземането на кръв се извършва сутрин на празен стомах и се извършва в лечебните зали лечебни заведения, съгласно общоприетите хематологични техники. За серологично изследване кръвта се събира по два метода: венозна кръвсе взема от лакътната вена на пациента, а капилярна кръв се взема от безименния пръст. Кръвта се поставя в стерилни запечатани епруветки.Характеристики на транспортирането на кръвта и съхранението на серума
Веднага след вземането на кръвта тя се транспортира в специална лаборатория, където на същия ден се приготвя серум. Суроватката може да се съхранява не повече от 4-6 дни в хладилник при температура 2-4 градуса. При необходимост от по-продължително съхранение суроватката се замразява. За да се избегне влошаване на качеството на суроватката, се допуска еднократно замразяване и съответно размразяване. При дългосрочно съхранениеантителата губят свойствата си и стават частично неактивни; имуноглобулините от този клас са най-чувствителни към замразяване М. След размразяване на серума е необходимо да го разбъркате старателно до гладкост, което спомага за възстановяване на концентрацията на антитела, съдържащи се в този серум.
За какво се използват серологичните тестове?
Серологични методи лабораторна диагностикаизползвани за откриване на заболявания като ехинококоза, трихинелоза, токсокароза, описторхоза, цистицеркоза, токсоплазмоза, амебиаза, лямблиоза, за да се определи ефективността на курса на лечение и накрая да се открие рецидив на заболяването след пълно възстановяване на пациента.Основни методи за серологична диагностика
Имунофлуоресцентна реакция (RIF)
Тази реакция е индиректна версия на серологичен тест, т.е. провежда се на два етапа. На първия етап необходимото антитяло се идентифицира в циркулиращия комплекс антиген-антитяло с помощта на антиглобулин, който е подобен по структура на имунните серумни протеини. Идентифицирането на желаното антитяло е възможно и чрез изследване на предварително приготвен антигенен препарат под флуоресцентен микроскоп, без използването на антиглобулини.Имунофлуоресцентната реакция е много трудоемък процес, който изисква много време и отговорност от специалист. Реакцията започва с приготвянето на разтвори, след което серумите и техните контролни проби се титруват ( процес, който ви позволява да определите съдържанието на определено вещество чрез постепенно смесване на тестовия разтвор с контролирано количество от реагента). Предварително приготвените разреждания и техните контролни проби се нанасят внимателно върху предметни стъкла с антигена. След това препаратите се инкубират, последвано от промиване и сушене на въздух. Върху предметните стъкла с антигена се нанася тънък слой антисерум, след което се извършва вторична инкубация на препаратите и се повтаря цялата предходна верига от действия, завършваща със изсушаване на препарата. В резултат препаратът върху предметно стъкло се третира с глицерол и се изследва под флуоресцентен микроскоп.
Резултатите от реакцията се оценяват по четиристепенна скала, която се характеризира с интензитета на повърхностния жълто-зелен блясък на антигенните клетки:
+
много слаб блясък на клетката, забележим само в нейната периферия
++
слабо сияние на клетъчната периферия, но с ясно забележим зелен оттенък
+++/++++
ярък блясък зеленоклетъчна периферия
Реакционният титър се счита за серумно разреждане, при което най-малко 50% от антигенните клетки показват ясен повърхностен блясък, тоест резултатът от реакцията +++
или ++++
. Стойността на реакционния диапазон е от 1/80 до 1/100.
Интензивността на реакцията зависи от броя на утаените червени кръвни клетки на дъното на образуваните дупки:
–
отрицателна реакция, която се характеризира с отлагане на червени кръвни клетки на дъното на ямките под формата на малък пръстен с гладки ръбове или „копче“
+
ниска интензивност, тази реакция се характеризира с малки единични отлагания на дъното на отвора. Неаглутинираните червени кръвни клетки образуват "малък пръстен" в центъра на ямката
++
средна интензивност, характеризира се с образуването на дъното на дупката на „широк плътен пръстен“ от неаглутинирани еритроцити
+++
интензивна реакция, аглутинираните еритроцити образуват така наречените "чадъри", в центъра на които ясно се виждат пръстени, образувани от утаени неаглутинирани еритроцити
++++
рязко интензивна реакция, при която всички червени кръвни клетки аглутинират и, образувайки "чадъри", очертават дъното на ямките.
Титърът на тази реакция се счита за последното серумно разреждане, при което се открива най-малко очевидна аглутинация на еритроцитите +++
, тоест с интензивна или рязко интензивна реакция.
Надеждността и качеството на серологичните диагностични методи зависят от организацията на вътрешния и външния лабораторен контрол, състоящ се от няколко независими процедури, предназначени да оценят качеството на резултатите от анализа.