Какво показва серологичният кръвен тест? Диагностичните мерки са най-важният етап в лечението на всяко заболяване. Успехът на лечението зависи не само от предписаните лекарства, но и до голяма степен от това колко правилно е поставена диагнозата.
В допълнение, диагностиката може да предотврати усложнения и съпътстващи заболявания. С помощта на серологичен анализ на кръвта на пациента се открива наличието на антитела и антигени. Проучването помага да се открият много заболявания, да се определи тяхната фаза и да се контролира хода на лечението.
Какво е серология?
Серологията е клон на имунологията, който изучава реакциите на антигени към антитела. Този раздел на медицината се занимава с изследване на кръвната плазма и нейните имунологични характеристики.
Днес серологичният кръвен тест за антитела е надежден начин за откриване на човешки имунодефицитен вирус, хепатит, бруцелоза, полово предавани болести и други животозастрашаващи заболявания. Нека да разберем в какви случаи се предписва.
Индикации за назначаване
Необходим е серологичен кръвен тест за идентифициране на причинителя на заболяването в случай на трудност при поставяне на диагноза.
За да се извърши тази реакция, антигените на патогените се инжектират в плазмата и след това лаборантът изучава протичащия процес. Или извършват обратна реакция: антитела се инжектират в заразената кръв, за да се определи специфичната принадлежност на патогена.
Обхват на приложение, обхват на прилагане
Това изследване се използва в различни отрасли на медицината. С помощта на тази реакция се откриват специфични клетки и антитела, произведени от тялото, за да се борят с инфекциите и вирусите.
Освен това, използвайки серологичен метод, се определя кръвната група на човек.
Подобен серологичен кръвен тест се използва в гинекологията за диагностициране на полово предавани болести. Този метод се практикува и за цялостни прегледи на бременни жени (откриване на токсоплазмоза, ХИВ, сифилис и др.). Преминаването на този тест е задължително при регистрация в предродилната клиника.
При деца се използва серологичен тест за потвърждаване на диагнозата на така наречените "детски" заболявания (варицела, морбили, рубеола и др.), В случай че симптомите нямат изразени прояви и е невъзможно да се идентифицира заболяването чрез анализ на клиничните показания.
Откриване на венерически болести
За венеролозите това изследване е наистина незаменимо и ви позволява да поставите диагноза много точно.
При замъглена клинична картина, серологичен кръвен тест за сифилис, лямблиоза, уреаплазмоза, хламидия, херпес и други заболявания ви позволява бързо да идентифицирате наличието на антитела.
Вирусни и инфекциозни заболявания
Серологичният анализ се използва активно от гастроентеролози, хепатолози и специалисти по инфекциозни заболявания за диагностициране на вирусен хепатит.
Дешифрирането на серологичен кръвен тест дава възможност да се определи етапът на хода на заболяването и да се отговори на въпроса колко хоспитализация е необходима в момента. Как да се подготвим правилно?
Подготовка за предаване на анализа
Серологичните кръвни тестове се правят както в обществени, така и в търговски клиники. Предпочитание трябва да се даде на лаборатория с модерно оборудване и квалифициран персонал.
Биологичните проби за изследване могат да бъдат слюнка и изпражнения, но в повечето случаи се използва венозна кръв на пациента. Кръв за серологичен тест се взема от кубиталната вена в лаборатория. Преди да вземете теста, трябва да се консултирате с Вашия лекар относно подготовката за тази процедура.
За да се подготвите за предоставяне на анализ за серологично изследване, трябва да следвате няколко прости правила.
Кръвта се взема в спокойно състояние преди хранене, тоест на празен стомах. Преди това не трябва да се подлагате на други изследвания, като рентгенови лъчи, ултразвук и др.
Необходимо е да се изключи употребата на антибактериални и някои други лекарства няколко седмици преди кръводаряването. Определени препоръки в този случай зависят от заболяването, за което се прави изследването. Например, тестът за хепатит включва избягване на мазни храни и алкохол 48 часа преди процедурата.
Реакция на флуоресценция
Сред разновидностите на серологичните реакции има флуоресцентна реакция. Тази техника използва реагент, който подчертава антителата в кръвния серум.
Поставянето на серологична реакция от директен тип включва маркиране на специфични антитела с флуоресцентно вещество. Тази реакция е най-бързата и се извършва в един етап.
Друг вариант за провеждане на такъв анализ се нарича индиректен или RNIF. Провежда се на два етапа. В първия етап антителата не се маркират с флуоресцентни етикети, а във втория етап се използват подходящо белязани антитела за откриване на антигени и антитела. Луминесценцията възниква само след свързване със специфично антитяло.
Какво показва серологичният кръвен тест? Резултатът от цялата процедура се оценява от специално устройство, което анализира силата на излъчване, разкрива формата и размера на обекта, който се изследва. Причинителите на инфекциозните заболявания се откриват с резултат, чиято достоверност е 90-95%, в зависимост от вида и стадия на патологията.
Свързан имуносорбентен анализ
Тези типове серология използват уникални, стабилни реагенти. Маркираните вещества изглежда се придържат към желаните антитела. В резултат на това получаваме качествен или количествен резултат.
Ако не се открият изразени маркери, резултатът ще се счита за отрицателен. Ако се установи наличието на антитела в биологични проби по време на качествено изследване, тогава резултатът от анализа се счита за положителен. При количествено определяне на клетките анализът дава по-точен резултат.
Анализирайки показателите на анализа (например количеството открити клетки), специалистът определя дали заболяването е в начален стадий, в остър стадий или дали хроничната форма на патологията се е влошила. За да постави диагноза, лекарят взема предвид не само данните от серологичното изследване, но и клиничната картина на заболяването.
Характеристики на този тест
Провеждането на този анализ не винаги е в състояние да даде 100% сигурност, че определено заболяване е открито. Случва се резултатите да са двусмислени и да са необходими други процедури.
Например, по време на тест за бруцелоза, серумът се тества за самозадържане без антиген. Това значително повишава надеждността на тестването. Анализът за бруцелоза може да бъде положителен или отрицателен и също така да предизвика съмнение.
Ако получите съмнителни резултати, които нямат недвусмислено тълкуване, препоръчително е да повторите анализа. В допълнение, бруцелозата може да бъде открита чрез кръвни култури, изследване на костен мозък и цереброспинална течност.
Предимства на серологичния кръвен тест
Диагностичните техники с помощта на серологични тестове са широко използвани в съвременната медицинска практика. Това се прави особено често при определяне на вирусни и инфекциозни патологии.
Същите тестове се използват при географски скрининг и медицински прегледи за предотвратяване на епидемиологичното разпространение на инфекцията.
Предимствата на метода включват:
- Високо ниво на увереност.
- Бърза реакция и резултати. Резултатите от RSC са известни до 24 часа. В специална ситуация, в болнична обстановка, анализът ще бъде готов след няколко часа.
- Проследяване на развитието на заболяването и ефективността на терапията.
- Ниска цена и достъпност за пациентите.
Минуси на метода
Въпреки това, серологичните изследвания също имат своите недостатъци.
Те включват факта, че анализът трябва да вземе предвид инкубационния период на заболяването, за да се получи по-надеждна картина.
Например, определянето на херпес симплекс от първи или втори тип е възможно само след 14 дни от момента на заразяването. Анализът за наличие на вируса на имунната недостатъчност се извършва след 30 дни, след 90 дни и шест месеца след контакт със заразен човек.
Разбира се, надеждността на резултатите може да бъде повлияна и от човешкия фактор: пренебрегване на правилата за подготовка за вземане на кръв или грешка, допусната от лабораторния асистент по време на реакцията.
Според статистиката в 5% от случаите може да се получи грешен резултат. Опитен лекар, когато преглежда пациент, след като е проучил клиничната картина, в повечето случаи може да изчисли допуснатата грешка.
Съдържание на темата "Методи за откриване на вируси. Методи за диагностика на микози (гъбични заболявания). Методи за откриване на протозои.":Откриване на антивирусни антитела (AT) в кръвния серум. RTGA. RSK. РИФ. Имуносорбтивни методи за откриване на антивирусни антитела.
По-прост и по-достъпен подход - откриване на антивирусни антитела (AT) в серума. Кръвните проби трябва да се вземат два пъти: веднага след появата на клиничните признаци и след 2-3 седмици. Изключително важно е да се изследват точно две серумни проби. Резултатите от едно изследване не могат да се считат за убедителни поради невъзможността да се свърже появата на AT с настоящия случай. Възможно е тези антитела да циркулират след предишна инфекция. В такава ситуация ролята на изследването на серума, получен по време на периода на възстановяване, едва ли може да бъде надценена. Наличието на заболяването по време на периода на вземане на първата проба се показва от най-малко четирикратно увеличение на AT титъра, което беше открито по време на изследването на втората проба.
Методите, изброени по-долу не позволяват диференциране на антитела(AT), образувани по време на заболяване и циркулиращи след възстановяване (продължителността на този период е различна за различните инфекции). Тъй като за адекватна диагноза е необходимо да се потвърди значително увеличение на AT титрите в две проби, първата проба се изследва в острата фаза, а втората - по време на периода на възстановяване (след 2-3 седмици). Получените резултати са ретроспективни и по-подходящи за епидемиологични изследвания.
RTGAоткрива AT, синтезиран срещу хемаглутинините на вируси (например грипен вирус). Методът улеснява откриването на такива антитела (АТ) в серума на пациента.
RSK- основен серодиагностика на вирусни инфекции(сред наличните). Реакцията открива комплемент-фиксиращи IgM и IgG, но не ги диференцира; за оптимизиране на получените резултати, формулирането на реакцията изисква определени умения на персонала.
РИФ. Ако е налична биопсия на инфектирана тъкан и са налични търговски комплекти AT, маркирани с флуоресцеин, директната имунофлуоресценция може да потвърди диагнозата. Формулирането на реакцията включва инкубиране на изследваната тъкан с АТ, последващото им отстраняване и флуоресцентна микроскопия на пробата.
Имуносорбционни методи за откриване на антивирусни антитела
Имуносорбционни методи(например ELISA и RIA) са по-информативни, тъй като откриват IgM и IgG поотделно, което ви позволява да направите определени заключения за динамиката на инфекциозния процес или състоянието на реконвалесценция. За откриване на АТ известното Ag се адсорбира върху твърд субстрат (например върху стените на епруветки, пластмасови микроплаки, петриеви панички) и се добавят различни разреждания на серума на пациента. След подходяща инкубация несвързаните АТ се отстраняват, добавя се ензимно-белязан антисерум срещу човешки Ig, процедурата за инкубиране и промиване на несвързани АТ се повтаря и се добавя всеки хромогенен субстрат (чувствителен към действието на ензима). Тъй като промяната на цвета е пропорционална на съдържанието на специфични антитела, е напълно възможно да се определи техният титър чрез спектрофотометричен метод. При диагностицирането на ХИВ инфекцията методът на имуноблотинг е намерил най-широко приложение.
Реакцията на свързване на комплемента (RCC) се провежда в две фази: в първата фаза антигенът се комбинира с тестовия серум, в който се предполага наличието на антитела и се добавя комплемент, инкубира се в термостат за 30 минути.
Втора фаза: добавете хемолитичната система (овчи еритроцити + хемолитичен серум). След инкубиране в термостат за 30 минути, резултатът се взема предвид.
При положителен RSK, серумните антитела, комбинирани с антигена, образуват имунен комплекс, който прикрепя комплемента към себе си и няма да настъпи хемолиза. Ако реакцията е отрицателна (няма антитела в тестовия серум), комплементът ще остане свободен и ще настъпи хемолиза.
RSK се използва за серологична диагностика на сифилис, гонорея, тиф и други заболявания.
Имунните реакции, използващи маркирани антигени и антитела, се основават на факта, че една от съставките, участващи в реакцията (антигени или антитела), се комбинира с някакъв етикет, който може лесно да бъде открит. Като етикети се използват флуорохроми (RIF), ензими (ELISA), радиоизотопи (RIA), електронно-плътни съединения (IEM).
Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA), подобно на други имунни реакции, се използва: 1) за откриване на неизвестен антиген с помощта на известни антитела или 2) за откриване на антитела в кръвния серум с помощта на известен антиген. Особеността на реакцията е, че известната съставка на реакцията се комбинира с ензим (например пероксидаза). Наличието на ензима се определя от субстрата, който е оцветен от действието на ензима. Най-широко използваният твърдофазен ELISA.
1) Откриване на антиген. Първият етап е адсорбцията на специфични антитела върху твърдата фаза, която се използва като повърхности от полистирен или поливинилхлорид на ямките на пластмасови панели. Вторият етап е добавянето на тестовия материал, което предполага наличието на антиген. Антигенът се свързва с антитела. След това ямките се измиват. Третият етап е добавянето на специфичен серум, съдържащ антитела срещу даден антиген, белязан с ензим. Маркираните антитела се прикрепват към антигени и излишъкът им се отстранява чрез промиване. По този начин, ако има антигени в тестовия материал, на повърхността на твърдата фаза се образува комплекс антитяло-антиген-антитяло, маркиран с ензим. Добавя се субстрат за откриване на ензима. За пероксидазата субстратът е ортофенилендиамин, смесен с H 2 O 2 в буферен разтвор. Под действието на ензима се образуват продукти, които имат кафяв цвят.
2) Откриване на антитела. Първият етап е адсорбцията на специфични антигени по стените на ямките. Обикновено в търговските системи за тестване антигените вече са адсорбирани на повърхността на ямките. Вторият етап е добавянето на изследвания серум. При наличие на антитела се образува комплекс антиген-антитяло. Третият етап - след промиване в ямките се добавят антиглобулинови антитела (антитела срещу човешки глобулини), маркирани с ензим. Резултатите от реакцията се оценяват, както е описано по-горе.
Като контроли се използват известни положителни и известни отрицателни проби, които са налични в търговски системи.
ELISA се използва за диагностициране на много инфекциозни заболявания, по-специално HIV инфекция, вирусен хепатит.
Имуноблотингът е вид ELISA (комбинация от електрофореза и ELISA). Биополимерите, като антигените на човешкия имунодефицитен вирус, се разделят чрез гел електрофореза. След това отделените молекули се прехвърлят върху повърхността на нитроцелулозата в същия ред, в който са били в гела. Процесът на пренасяне се нарича блотиране, а полученият отпечатък се нарича блот (англ. blot – петно). Този отпечатък се влияе от изследвания серум. След това се добавя белязан с пероксидаза анти-човешки глобулинов серум, последван от субстрата, който става кафяв под действието на ензима. Кафяви ивици се образуват там, където антителата са се комбинирали с антигени. Методът ви позволява да откриете антитела към отделни антигени на вируса.
Радиоимуноанализ (RIA). Методът ви позволява да определите количеството антиген в тестовата проба. Първо, към имунния серум се прикрепя материал, който вероятно съдържа антиген, след това известен антиген, белязан с радиоизотоп, например I 125 . В резултат на това откриваемият (небелязан) и известен белязан антиген се свързва с ограничен брой антитела. Тъй като белязаният антиген се добавя в определена доза, е възможно да се определи коя част от него се е свързала с антителата и коя е останала свободна поради конкуренция с небелязания антиген и е била отстранена. Количеството белязан антиген, свързан с антителата, се определя с помощта на брояч. Тя е обратно пропорционална на количеството на определяния антиген.
Имуноелектронна микроскопия (IEM). Антиген, например грипен вирус, е прикрепен към специфичен антисерум, белязан с електронно плътно вещество. Като етикет се използват металосъдържащи протеини (феритин, хемоцианин) или колоидно злато. При микроскопия в електронен микроскоп се правят снимки, които показват вириони на грип с прикрепени към тях тъмни точки - молекули на белязани антитела.
тестови въпроси
Придобит имунитет, неговата разлика от наследствен (вид, вроден). Видове придобит имунитет.
Задача.В семейството детето Валери, на три години, се разболя от дифтерия. Други членове на семейството не са се разболявали, а майката е била болна от дифтерия в детството, а бащата е бил ваксиниран с дифтериен токсоид. По-голямата сестра Наташа, на пет години, не беше ваксинирана с дифтериен токсоид поради медицински противопоказания, така че трябваше да се подложи на спешна профилактика с помощта на антидифтериен антитоксичен серум. По-малкият брат Виталий не се разболя три месеца, въпреки че не беше ваксиниран с нищо. В къщата има котка и куче, не са боледували. Посочете за всеки от членовете на семейството и за животните вида на имунитета, поради който не са се разболели.
Какво е антиген? Какви вещества могат да бъдат антигени? Пълни антигени и хаптени, как се различават един от друг? Структурата на антигена. Как се нарича частта от молекулата на антигена, която определя нейната специфичност? Назовете известните ви антигени. Какво представляват автоантигените? Антигенна структура на микробна клетка. Камшичета и соматични антигени; локализация, буквено означение, химическа природа, връзка с температурата, начин на получаване, практическо приложение. Анатоксин, неговите свойства, приложение, производство. Каква тъкан изгражда имунната система на тялото? Посочете централните и периферните органи на имунната система на човека. Опишете процеса на формиране на хуморален и клетъчен имунен отговор. Посочете клетките, които улавят и усвояват антигена; клетки, които взаимодействат при формирането на хуморален имунитет, клетъчен имунитет; клетки, които се трансформират и стават произвеждащи антитела плазмени клетки; клетки, които стимулират този процес; клетки, които потискат имунния отговор; клетки, които убиват туморни клетки и инфектирани с вируси клетки. Какво представляват антителата? Как да получите имунен серум? Как да получите серум, който да неутрализира тетаничния токсин? Срещу какви антигени се образуват антитоксини, аглутинини, хемолизини? Какви антитела се образуват при инжектиране на дифтериен токсоид в тялото? дифтерийни бактерии? Химическа природа и структура на антителата. Какво е активното място на имуноглобулина? Избройте класовете имуноглобулини, техните свойства. Посочете класа имуноглобулини, които могат да преминат през плацентата. Към кой клас принадлежат секреторните имуноглобулини? Динамика на натрупване на антитела. Как вторичният имунен отговор е различен от първичния? Как знанията за динамиката на имунния отговор се използват в практическата медицина? Какво представляват реакциите на имунитета, какъв е техният механизъм, фази на реакцията. В кои 2 посоки се използват имунните реакции? Избройте реакциите на имунната система.
Задача.Заменете липсващите думи с „токсоид“ или „антитоксин“: _________ е антиген, _________ е антитяло, __________ създава активен имунитет, когато се въведе в тялото, __________ създава пасивен имунитет, когато се въведе в тялото, __________ се получава чрез имунизация на животни , ___________ се получава от токсин при излагане на формалин и топлина, ___________ неутрализира токсините, __________ предизвиква образуването на антитела в тялото.
Реакция на аглутинация: какво е аглутинация, какво е антиген, какво е антитяло; методи за настройка, какви контроли се задават и за какво; как трябва да изглеждат контролите. Аглутиниращи серуми, какво съдържат, как се получават, за какво се използват; какъв е титърът на аглутиниращия серум? Реакцията на непряка (пасивна) хемаглутинация: какво служи като антиген в тази реакция, как се получава, механизмът на реакцията. Какво представлява еритроцитният диагностикум? Какво представлява еритроцитният диагностикум с антитела? Реакции на утаяване: какво е утаяване, какво служи като антиген; как да получа преципитиращ серум? Какъв е титърът на утаения серум? Изложбени методи, практическо приложение.
Реакция на свързване на комплемента (RCC): CFR принцип; какво се образува, когато имунният серум взаимодейства със специфичен антиген; какво се случва с комплемента, ако той присъства в това взаимодействие? Каква е съдбата на комплемента, ако няма специфичен афинитет между антиген и антитела? Ако крайният резултат от RSK е хемолиза, това означава ли положителен или отрицателен резултат? Техника за настройка на RSC. Защо тестовият серум трябва да бъде инактивиран? Хемолитичен серум: какво съдържа, как се получава, какво е титър и как се определя? Допълнение: химическа природа, връзка с висока температура, къде се съдържа? Как комплементът може да бъде унищожен? Какво на практика се използва като допълнение?
Задача.Петно от кръв е открито по дрехите на обвинения в убийство. По каква реакция може да се определи дали е човешка кръв; какъв ще бъде антигенът в тази реакция и какви ще бъдат антителата; какво диагностично лекарство трябва да има в лабораторията за тази реакция, как се приготвя?
Задача.Как да се определи, като се използва реакцията на утаяване, дали проба от говеждо или конско месо е доставена за анализ; какви диагностични препарати са необходими?
Реакция на утаяване в агар гел, методи на формулиране, практическо приложение.
Серологично изследване (тестове)- лабораторни методи за изследване, базирани на откриване на антитела или антигени в биологичния материал на пациента. Най-често за анализ се използва кръв, по-рядко - урина, слюнка, гноен секрет или тъканни проби, взети по време на биопсия.
Област на приложение
- Определяне на кръвна група.
- Идентифициране на специфични туморни протеини - туморни маркери (например при съмнение за рак на яйчници, простата, пикочен мехур, стомах и др.).
- Диагностика на вирусни, бактериални, гъбични, протозойни инфекции (ХИВ, сифилис, токсоплазмоза, хламидия, рубеола, херпес, хелминтози, кърлежов енцефалит и др.).
- Определяне на хормони, ензими и лекарства, съдържащи се в изследвания биоматериал в малки концентрации (по-малко от 10-10 g / l).
Същността на метода на серологичните изследвания
Серологичните тестове се различават по техника, но всички те са резултат от взаимодействието на антигени (чужди съединения) със съответните антитела. Проучването се състои от две последователни фази. Първата фаза се характеризира с взаимодействие между антигени и антитела с образуването на имунни комплекси (положителна реакция). Във втората фаза се появяват външни признаци, потвърждаващи наличието на същите тези комплекси (в зависимост от вида на реакцията, това може да бъде помътняване на тестовия разтвор, промяна в цвета му, лющене и др.). Липсата на видими физически явления се счита за отрицателен резултат от теста.
Подготовка за серологични изследвания
Зависи от вида на изследването. Медицински специалист трябва да ви разкаже за характеристиките на преминаването на конкретен анализ, когато се регистрирате за процедурата.
Можете да направите необходимия серологичен тест в клиника Spectra. Поръчваме анализи в най-добрите столични лаборатории, работещи по европейски стандарти, което гарантира бързи и надеждни резултати. Нашите лекари ще помогнат за дешифрирането на заключението и ще дадат препоръки за по-нататъшна диагностика.
Сайтът предоставя справочна информация само за информационни цели. Диагностиката и лечението на заболяванията трябва да се извършват под наблюдението на специалист. Всички лекарства имат противопоказания. Необходим е експертен съвет!
Серологични кръвен анализе метод за лабораторно изследване на определени антигени или антитела ( специфични протеини) в серума на пациента въз основа на имунните отговори на организма. Този метод се прилага, когато диагностикаинфекциозни заболявания за установяване наличието на антитела в кръвта на пациента към определен вид вирус или бактерия, както и за определяне на кръвната група.Проучван материал
На първо място, за серологичен анализ се използва биологичен материал, събран от пациента:- кръвен серум
- слюнка
- фекална материя
- почвата
Метод за анализ или вземане на кръвна проба
Този анализ не изисква специална подготовка на пациента. Вземането на кръв се извършва сутрин на празен стомах и се извършва в лечебните зали на лечебните заведения, съгласно общоприетите хематологични методи. За серологично изследване вземането на кръв се извършва по два метода: венозна кръв се взема от кубиталната вена на пациента и капилярна от безименния пръст. Кръвта се поставя в стерилни запечатани епруветки.Характеристики на кръвния транспорт и съхранението на серума
Веднага след вземането на кръвта тя се транспортира в специална лаборатория, където на същия ден се приготвя серумът. Серумът се съхранява не повече от 4-6 дни в хладилник при температура 2-4 градуса. Ако е необходимо по-дълго съхранение, серумът се замразява. За да се избегне нарушаване на качеството на серума, е разрешено да се замрази веднъж и съответно да се размрази. При дългосрочно съхранение антителата губят свойствата си и стават частично неактивни, най-чувствителни към замразяване са имуноглобулините от класа М. След размразяване на серума е необходимо да се разбърка старателно до хомогенна маса, която помага да се възстанови концентрацията на антитела, съдържащи се в този серум.
За какво се използва серологията?
Серологичните лабораторни диагностични методи се използват за откриване на заболявания като ехинококоза, трихинелоза, токсокароза, описторхоза, цистицеркоза, токсоплазмоза, амебиаза, ламблиоза, за да се определи ефективността на курса на лечение и накрая да се открие рецидив на заболяването след пълно възстановяване на пациента.Основни методи за серологична диагностика
Имунофлуоресцентна реакция (RIF)
Тази реакция е индиректна версия на серологично изследване, т.е. извършва се на два етапа. На първия етап необходимото антитяло се открива в циркулиращия комплекс антиген-антитяло с помощта на антиглобулин, който е подобен по структура на имунните серумни протеини. Идентифицирането на желаното антитяло е възможно и при изследване на предварително приготвен антигенен препарат под флуоресцентен микроскоп, без използване на антиглобулини.Имунофлуоресцентната реакция е много времеемък процес, който изисква много време и отговорност от специалист. Реакцията започва с приготвянето на разтвори, след което серумите и техните контролни проби се подлагат на титруване ( процес, който позволява определянето на съдържанието на определено вещество чрез постепенно смесване на тестов разтвор с контролирано количество реагент). Предварително приготвените разреждания и техните контролни проби се нанасят внимателно върху предметни стъкла с антиген. След това препаратите се подлагат на инкубиране, последвано от измиване и сушене на въздух. Тънък слой антисерум се нанася върху предметните стъкла, съдържащи антиген, след което препаратите се инкубират повторно и се повтаря цялата предишна верига от действия, завършваща със сушенето на препарата. В резултат препаратът върху предметно стъкло се обработва с глицерол и се изследва под флуоресцентен микроскоп.
Резултатите от реакцията се оценяват по четиристепенна скала, която се характеризира с интензитета на повърхностния жълто-зелен блясък на антигенните клетки:
+
много слаб блясък на клетката, забележим само по нейната периферия
++
слаб блясък на клетъчната периферия, но с ясно видим зелен оттенък
+++/++++
яркозелен блясък на клетъчната периферия
Реакционният титър се счита за такова серумно разреждане, при което най-малко 50% от антигенните клетки показват ясен повърхностен блясък, тоест резултатът от реакцията +++
или ++++
. Стойността на реакционния диапазон е от 1/80 до 1/100.
Интензивността на реакцията зависи от броя на утаените еритроцити на дъното на образуваните ямки:
–
отрицателна реакция, която се характеризира с отлагане на еритроцити на дъното на ямките под формата на малък пръстен с гладки ръбове или "копчета"
+
ниска интензивност, тази реакция се характеризира с малки единични отлагания на дъното на отвора. Неаглутинираните еритроцити образуват "малък пръстен" в центъра на ямката
++
средна интензивност, характеризира се с образуването на "широк плътен пръстен" от неаглутинирани еритроцити на дъното на ямката
+++
интензивна реакция, аглутинираните еритроцити образуват така наречените "чадъри", в центъра на които ясно се виждат пръстени, образувани от утаени неаглутинирани еритроцити
++++
рязко интензивна реакция, при която всички еритроцити се аглутинират и, образувайки "чадъри", покриват дъното на дупките.
Титърът на тази реакция се счита за последното разреждане на серума, при което се открива поне очевидна аглутинация на еритроцитите +++
, тоест с интензивна или рязко интензивна реакция.
Надеждността и качеството на серологичните диагностични методи зависят от организацията на вътрешния и външния лабораторен контрол, състоящ се от няколко независими процедури, предназначени да оценят качеството на резултатите от анализа.