Rettidig diagnose av HIV-infeksjon blir et ekstremt viktig tiltak, siden tidligere behandling i stor grad kan bestemme den videre utviklingen av sykdommen og forlenge livet til pasienten. De siste årene har det vært betydelige fremskritt når det gjelder å oppdage denne forferdelige sykdommen: de gamle testsystemene blir erstattet av mer avanserte, undersøkelsesmetoder blir mer tilgjengelige, og deres nøyaktighet økes betydelig.
I denne artikkelen vil vi snakke om moderne metoder for å diagnostisere HIV-infeksjon, som er nyttige å vite for rettidig behandling av dette problemet og opprettholde den normale livskvaliteten til pasienten.
Metoder for å diagnostisere HIV
I Russland, for diagnostisering av HIV-infeksjon, utføres en standardprosedyre, som inkluderer to nivåer:
- ELISA testsystem (screeningsanalyse);
- immunblotting (IB).
Andre diagnostiske metoder kan også brukes:
- ekspressprøver.
ELISA testsystemer
På det første stadiet av diagnosen brukes en screeningtest (ELISA) for å oppdage HIV-infeksjon, som er basert på HIV-proteiner laget i laboratorier som fanger opp spesifikke antistoffer produsert i kroppen som svar på infeksjon. Etter deres interaksjon med reagensene (enzymer) i testsystemet, endres fargen på indikatoren. Videre behandles disse fargeendringene på spesialutstyr, som bestemmer resultatet av analysen som utføres.
Slike ELISA-tester kan vise resultater innen noen få uker etter introduksjonen av HIV-infeksjon. Denne analysen bestemmer ikke tilstedeværelsen av viruset, men oppdager produksjonen av antistoffer mot det. Noen ganger, i menneskekroppen, begynner produksjonen av antistoffer mot HIV etter 2 uker etter infeksjon, men hos de fleste produseres de på et senere tidspunkt, etter 3-6 uker.
Det er fire generasjoner med ELISA-tester med ulik sensitivitet. De siste årene har III og IV generasjons testsystemer blitt hyppigere brukt, som er basert på syntetiske peptider eller rekombinante proteiner og har større spesifisitet og nøyaktighet. De kan brukes til å diagnostisere HIV-infeksjon, overvåke HIV-prevalens og sikre sikkerhet ved testing av donert blod. Nøyaktigheten til III- og IV-generasjons ELISA-testsystemer er 93-99% (mer følsomme er testene som produseres i Vest-Europa - 99%).
For å utføre en ELISA-test tas 5 ml blod fra pasientens vene. Mellom siste måltid og analysen bør det være minst 8 timer (som regel utføres det om morgenen på tom mage). En slik test anbefales ikke tatt tidligere enn 3 uker etter den påståtte infeksjonen (for eksempel etter ubeskyttet samleie med en ny seksuell partner).
Resultatene av ELISA-testen oppnås etter 2-10 dager:
- negativt resultat: indikerer fravær av HIV-infeksjon og krever ikke henvisning til en spesialist;
- falsk-negativt resultat: kan observeres i de tidlige stadiene av infeksjon (opptil 3 uker), i de senere stadier av AIDS med alvorlig immunsuppresjon og med feil blodforberedelse;
- falskt positivt resultat: det kan observeres i noen sykdommer og i tilfelle feil blodforberedelse;
- positivt resultat: indikerer infeksjon med HIV-infeksjon, krever IB og pasientens henvisning til spesialist på AIDS-senter.
Hvorfor kan en ELISA-test gi falske positive resultater?
Falsk-positive resultater av en ELISA-test for HIV kan observeres ved feil behandling av blod eller hos pasienter med slike tilstander og sykdommer:
- multippelt myelom;
- smittsomme sykdommer provosert av Epstein-Barr-viruset;
- stat etter ;
- autoimmune sykdommer;
- mot bakgrunnen av graviditet;
- tilstand etter vaksinasjon.
Av grunnene beskrevet ovenfor kan det være tilstede ikke-spesifikke kryssreagerende antistoffer i blodet, hvis produksjon ikke ble provosert av HIV-infeksjon.
De siste årene har frekvensen av falske positive resultater redusert betydelig på grunn av bruken av III og IV generasjons testsystemer, som inneholder mer sensitive peptider og rekombinante proteiner (de syntetiseres ved hjelp av in vitro genteknologi). Etter bruk av slike ELISA-tester har frekvensen av falske positive resultater redusert betydelig og er ca. 0,02-0,5 %.
Et falskt positivt resultat betyr ikke at en person er smittet med HIV. I slike tilfeller anbefaler WHO en ny ELISA-test (obligatorisk IV-generasjon).
Pasientens blod sendes til et referanse- eller voldgiftslaboratorium merket "repeat" og testes på et IV-generasjons ELISA-testsystem. Hvis resultatet av den nye analysen er negativt, blir det første resultatet gjenkjent som feilaktig (falsk positiv) og IB blir ikke utført. Hvis resultatet er positivt eller tvilsomt under den andre testen, må pasienten gjennomgå IB om 4-6 uker for å bekrefte eller avkrefte HIV-infeksjon.
immunblotting
En definitiv diagnose av HIV-infeksjon kan bare stilles etter at et positivt immunblotting (IB) resultat er oppnådd. For implementeringen brukes en nitrocellulosestrimmel, på hvilken virale proteiner påføres.
Blodprøvetaking for IB utføres fra en vene. Deretter blir den utsatt for spesiell behandling og proteinene i serumet separeres i en spesiell gel i henhold til ladningen og molekylvekten (manipulasjonen utføres på spesialutstyr under påvirkning av et elektrisk felt). En nitrocellulosestrimmel påføres blodserumgelen og blotting ("blotting") utføres i et spesielt kammer. Strimlen behandles og hvis materialene som brukes inneholder antistoffer mot HIV, binder de seg til de antigene båndene på IB og vises som linjer.
IB anses som positiv hvis:
- i henhold til amerikanske CDC-kriterier - det er to eller tre linjer gp41, p24, gp120 / gp160 på stripen;
- i henhold til amerikanske FDA-kriterier - det er to linjer p24, p31 og en linje gp41 eller gp120 / gp160 på stripen.
I 99,9 % av tilfellene indikerer et positivt IB-resultat HIV-infeksjon.
I mangel av linjer - IB er negativ.
Ved identifisering av linjer med gp160, gp120 og gp41 er IB tvilsom. Et slikt resultat kan oppdages når:
- onkologiske sykdommer;
- svangerskap;
- hyppige blodoverføringer.
I slike tilfeller anbefales det å utføre en ny studie med et sett fra et annet selskap. Hvis resultatet etter ytterligere IB fortsatt er tvilsomt, er oppfølging nødvendig i seks måneder (IB utføres hver 3. måned).
polymerase kjedereaksjon
PCR-testen kan oppdage RNA til viruset. Dens følsomhet er ganske høy, og den gjør det mulig å oppdage HIV-infeksjon så tidlig som 10 dager etter infeksjon. I noen tilfeller kan PCR gi falske positive resultater, fordi dens høye sensitivitet også kan reagere på antistoffer mot andre infeksjoner.
Denne diagnoseteknikken er dyr, krever spesialutstyr og høyt kvalifiserte spesialister. Disse grunnene tillater ikke at det utføres under massetesting av befolkningen.
PCR brukes i slike tilfeller:
- å oppdage HIV hos nyfødte som ble født av HIV-infiserte mødre;
- å oppdage HIV i "vindusperioden" eller i tilfelle tvilsom IB;
- å kontrollere konsentrasjonen av HIV i blodet;
- for studier av donorblod.
Bare ved PCR-testen stilles ikke diagnosen HIV, men utføres som en ekstra diagnostisk metode for å løse tvister.
Ekspressmetoder
En av nyvinningene innen HIV-diagnostikk har blitt hurtigtester, hvis resultater kan vurderes på 10-15 minutter. De mest effektive og nøyaktige resultatene oppnås med immunokromatografiske tester basert på prinsippet om kapillærstrøm. De er spesielle strimler som blod eller andre testvæsker (spytt, urin) påføres. I nærvær av antistoffer mot HIV, etter 10-15 minutter, vises en farget og kontrollstrimmel på testen - et positivt resultat. Hvis resultatet er negativt, vises kun kontrolllinjen.
Som med ELISA-tester, bør raske testresultater bekreftes ved IB-analyse. Først da kan en diagnose av HIV-infeksjon stilles.
Det finnes ekspresssett for hjemmetesting. OraSure Technologies1 (USA)-testen er FDA-godkjent, tilgjengelig uten resept, og kan brukes til å oppdage HIV. Etter testen, i tilfelle et positivt resultat, anbefales pasienten å gjennomgå en undersøkelse i et spesialisert senter for å bekrefte diagnosen.
De resterende testene for hjemmebruk er ennå ikke godkjent av FDA, og resultatene deres kan være svært tvilsomme.
Til tross for at hurtigtester er dårligere når det gjelder nøyaktighet enn IV-generasjons ELISA-tester, er de mye brukt for ytterligere testing av befolkningen.
Du kan bli testet for HIV-infeksjon på hvilken som helst poliklinikk, Regionalsykehuset sentralt eller ved spesialiserte AIDS-sentre. På Russlands territorium holdes de absolutt konfidensielt, eller anonymt. Hver pasient kan forvente å motta medisinsk eller psykologisk råd før eller etter analysen. Du må betale for HIV-tester kun i kommersielle medisinske institusjoner, og på offentlige klinikker og sykehus utføres de gratis.
For informasjon om hvordan du kan få HIV-smitte og hvilke myter som eksisterer om mulighetene for å bli smittet, les
Unikt registeroppføringsnummer
Registreringsnummer for det medisinske utstyret
FSR 2011/10182
Dato for statlig registrering av et medisinsk utstyr
Navn på det medisinske utstyret
Et sett med reagenser "MilaLab-IFA-HIV-AGAT" enzymimmunoassay for påvisning av antistoffer mot humant immunsviktvirus type 1 og 2 (HIV-1 og HIV-2), HIV-1 gruppe O og HIV-1 p24 antigen iht. TU 9398 -187-05941003-2017
bestående av: - Immunosorbent - en 96-brønners polystyrenplate som kan klappes sammen til strimler (eller til brønner), i brønnene der kunstige antigener er sorbert - gp160, gp41, p31 HIV-1, gp41 HIV-1 gruppe O, gp36 HIV- 2 og antistoffer mot HIV-1 p24-antigen: sett 1 (1 tablett), sett 2 (2 tabletter), sett 3 (5 tabletter), - Konjugat-1: sett 1 (1 hetteglass 1,2 ml), sett 2 (1 hetteglass) 1,2 ml), sett 3 (1 hetteglass 3,6 ml eller 3 hetteglass 1,2 ml hver), - Konjugat-2: sett 1 (1 hetteglass 2,0 ml), sett 2 (1 hetteglass 1,2 ml). 2,0 ml), sett 3 (1) hetteglass 4,0 ml eller 2 hetteglass 2,0 ml hver), - RRK-1 - løsning for fortynning av konjugat-1: sett 1 (1 hetteglass 12,0 ml), sett 2 (1 hetteglass 12,0 ml), sett 3 (3 hetteglass 12,0 ml hver) , - RRK-2 - løsning for fortynning av konjugat-2: sett 1 (1 hetteglass 20,0 ml), sett 2 (1 hetteglass 20,0 ml), sett 3 (2 hetteglass 20,0 ml hver), - K + AT - kontrollpositiv prøve som inneholder antistoffer mot HIV: sett 1 (1 hetteglass 2,0 ml), sett 2 (1 hetteglass 2,0 ml), sett 3 (1 hetteglass 4,0 ml eller 2 hetteglass 2,0 ml hver), - K + AG - con trol-positiv prøve som inneholder kunstig p24 HIV-1-antigen: sett 1 (1 hetteglass. 2,0 ml), sett 2 (1 hetteglass 2,0 ml), sett 3 (1 hetteglass 4,0 ml eller 2 hetteglass 2,0 ml), - K- - negativ kontrollprøve: sett 1 ( 1 hetteglass 2,5 ml), sett 2 (1 hetteglass 2,5) ml), sett 3 (1 hetteglass 5,0 ml eller 2 hetteglass 2,5 ml hver), - PR - spyleløsning: sett 1 (1 hetteglass 50,0 ml), sett 2 (1 hetteglass 120,0 ml), sett 3 (2 hetteglass 120,0 ml hver ), - Stoppreagens: sett 1 (1 hetteglass 25,0 ml), sett 2 (2 hetteglass på 25,0 ml), sett 3 (2 hetteglass på 50,0 ml eller 4 hetteglass på 25,0 ml), - SB - substratbufferløsning: sett 1 (1 hetteglass med 25 0 ml), sett 2 (1 hetteglass 25,0 ml), sett 3 (2 hetteglass 50,0 ml hver eller 3 hetteglass på 25,0 ml hver), - TMB - løsning som inneholder 3,3", 5,5"-tetrametylbenzidin: sett 1 ( 1 hetteglass 2,5 ml), sett 2 (1 hetteglass 2,5 ml), sett 3 (2 hetteglass 3,5 ml eller 3 hetteglass 2,5 ml) ml). Tilbehør: - deksler til polystyren 96-brønns plater: sett 1 (1 stk), sett 2 (2 stk), sett 3 (5 stk) eller - beskyttelsesfilmer for ELISA plater: sett 1 (2 stk) , sett 2 (4 stk.), sett 3 (10 stk.), - engangsspisser: sett 1 (16 stk.), sett 2 (32 stk.), sett 3 (80 stk.), - plastbrett for flytende reagenser : sett 1 (2 stk.), sett 2 (4 stk.), sett 3 (10 stk.), - plastposer med Zip-Lock-lås: sett 1 (1 stk.), sett 2 (2 stk.) , sett 3 (3 stk.).
Organisasjonens navn - søkeren av det medisinske utstyret
Plassering av søkerorganisasjonen for det medisinske utstyret
Juridisk adresse til søkerorganisasjonen for det medisinske utstyret
603014, Russland, Nizhny Novgorod, st. Komintern, 47
Navn på produsenten av medisinsk utstyr eller produsenten av medisinsk utstyr
OOO "NPO "Diagnostiske systemer"
Plassering av organisasjonen-produsenten av det medisinske utstyret eller organisasjonen-produsenten av det medisinske utstyret
603093, Russland, Nizhny Novgorod, st. Yabloneva, 22, postboks 69
Juridisk adresse til organisasjonen-produsenten av det medisinske utstyret eller organisasjonen-produsenten av det medisinske utstyret
1 Sett oppdrag
1.1 Settet er designet for samtidig påvisning av antistoffer mot humant immunsviktvirus av den første og andre typen (HIV-1 og HIV-2) og HIV-1 p24-antigenet i humant serum og plasma "in vitro" ved hjelp av indirekte enzym- koblet immunosorbentanalyse.
2 Egenskaper og prinsipp for drift av settet
2.1 Sett komposisjon:
|
Komponentnavn |
Mengde |
|
Immunosorbent |
2 tabletter |
|
Positiv kontrollprøve AT (K + AT) |
1 hetteglass, 3 ml |
|
Positiv kontrollprøve AG (K + AG) |
3 hetteglass, lyofilisert preparat |
|
Negativ kontrollprøve (TIL -) |
2 flasker á 3 ml |
|
Konjugert løsning #1 (RK-1) |
1 hetteglass, 12 ml |
|
Konjugat #2 (Kg-2) |
1 hetteglass, 1 ml |
|
Konjugert fortynningsløsning nr. 2 (RR-K2) |
2 flasker á 18 ml |
|
Substratbuffer ( BRS) |
2 flasker á 18 ml |
|
Kromogen TMB |
1 hetteglass, 1 ml |
|
Tween fosfatbufferkonsentrat (FSB-T×25) |
2 flasker á 50 ml |
|
Stopp reagens |
1 hetteglass, 12 ml |
|
Reagensbadesett med spisser for flerkanalspipetter |
1 sett |
|
Selvklebende film |
2.2 Hovedkomponentene i "ELISA-HIV 1.2 AGAT"-settet er immunosorbent, konjugatløsning nr. 1 og konjugat nr. 2.
Immunosorbent er en polystyrentablett, i brønnene hvor en blanding av rekombinante HIV-1 (gp41) og HIV-2 (gp36) antigener og monoklonale antistoffer mot HIV-1 p24 antigen er adsorbert.
Konjugert løsning #1 er en blanding av biotinmerkede monoklonale humane antistoffer mot HIV-1 p24-antigen og biotinmerkede rekombinante HIV-1- og HIV-2-proteiner.
Konjugat #2 er streptavidin konjugert med pepperrotperoksidase.
Positiv kontrollprøve AT- humant blodserum som inneholder antistoffer mot HIV-1 og HIV-2, som ikke inneholder antistoffer mot hepatitt C-virus og Treponema pallidum, HIV-1 p24-antigen og HBs-antigen, inaktivert ved oppvarming i 3 timer ved en temperatur på 56 ºC.
Positiv kontrollprøve AG– humant blodserum som inneholder det native p24 HIV-1-antigenet, som ikke inneholder antistoffer mot HIV-1, HIV-2, hepatitt C-virus og Treponema pallidum og HBs-antigen, inaktivert ved oppvarming i 3 timer ved en temperatur på 56 ºC.
Negativ kontrollprøve– humant blodserum som ikke inneholder antistoffer mot HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24-antigen og HBs-antigen, inaktivert ved oppvarming i 3 timer ved en temperatur på 56 ºC.
Driftsprinsippet til settet. Når en løsning av konjugat nr. 1 og serumprøver av infisert blod innføres i tablettens brønner, binder p24-antigenet seg både til spesifikke antistoffer på den faste fasen og til monoklonale biotinylerte anti-p24-antistoffer som er en del av konjugatløsningen nr. 1; HIV-spesifikke antistoffer binder seg både til de rekombinante HIV-1 og HIV-2 antigenene adsorbert på den faste fasen, og til antigenene inkludert i konjugatløsningen nr. 1, og danner antigen-antistoffkomplekser. Immunkomplekser av anti-p24-spesifikke antistoffer og p24-antigen påvises av konjugat nr. 2. Etter å ha vasket av de ubundne komponentene, tilsettes en løsning av peroksidasesubstrat (hydrogenperoksid) og TMB-kromogen til brønnene på platen.
Peroksidasereaksjonen stoppes ved å tilsette en stoppreagens (0,9 M svovelsyreløsning) og fargeintensiteten til løsningen i brønnene måles på et spektrofotometer som en optisk tetthet (OD) verdi ved en bølgelengde på 450 nm.
OD-verdien er direkte proporsjonal med konsentrasjonen av spesifikke antistoffer og/eller p24-antigen i en serum- eller plasmaprøve. Jo høyere innhold av antistoffer og/eller p24-antigen i serumprøven, desto høyere er fargingsintensiteten.
2.3 Settet er designet for å holde å holde 24 produksjoner ELISA: 1 innstilling - 1 stripe (8 hull). Total - 192 definisjoner inkludert kontrollprøver.
3 Forholdsregler ved bruk av settet
3.1 Alle komponentene i settet i konsentrasjonene som brukes er ikke-giftige. Arbeid imidlertid med alle testede prøver av humant serum (plasma), som bør betraktes som potensielt infisert, i stand til å lagre og overføre HIV, hepatitt B-virus eller andre patogener av virusinfeksjon, med brukte løsninger og væsker, diverse utstyr som kan være forurenset i analyseprosessen krever visse sikkerhetstiltak ved bruk av settet:
Arbeidet skal utføres i et spesialutstyrt rom;
Det er nødvendig å arbeide med bruk av personlig verneutstyr og med overholdelse av forholdsregler i henhold til kravene i , , og .
3.2 Stoppreagens som inneholder svovelsyre er irriterende. Ved kontakt med hud og slimhinner, skyll umiddelbart med mye vann.
3.3 Ved arbeid med settet skal arbeidsplassene være utstyrt med til- og avtrekksventilasjon.
3.4 Alle personer som arbeider i laboratoriet med sett må gjennomgå en obligatorisk medisinsk undersøkelse i henhold til kravene.
3.5 Medisinsk avfall og/eller ubrukte, utgåtte sett må kastes på riktig måte.
4 regler for arbeid med et sett
4.1 For å utelukke falske resultater, må testprøver tilberedes og oppbevares under forhold som hindrer bakterievekst. Serumprøver som inneholder aggregerte serumkomponenter eller sediment bør klargjøres ved sentrifugering i (5-10) minutter ved 3000 rpm. Serumprøver kan oppbevares ved (2-8) °C i ikke mer enn 5 dager. Frosne prøver (helst til en temperatur på minst minus 20 °C) kan lagres i ikke mer enn 1 år. Gjentatte fryse-tine-sykluser av prøver bør unngås.
Det må huskes at prøver med hemolyse, hyperlipidemi, bakterievekst, så vel som de som er lagret i lang tid uten frysing, ikke er egnet for analyse.
Påliteligheten til resultatene avhenger av følgende regler:
Det er ikke tillatt å bruke settet etter utløpsdatoen, samt å blande komponentene i sett fra forskjellige serier;
En separat beholder bør brukes for tilberedning av hver reagens;
Ikke behandle alle redskaper som brukes til tilberedning av reagenser med desinfeksjonsmidler og rengjøringsmidler. Om nødvendig, skyll med drikkevann, og skyll deretter fem ganger med destillert vann;
For å jobbe med TMB- og RX-kromogenet er det nødvendig å bruke separate beholdere for løsninger, pipettespisser og servise.
Det må utvises forsiktighet for å blande reagensene grundig;
Tiden mellom fylling og tømming av brønnene på platen med løsninger og reagenser bør være minst 30 s. Det er ikke tillatt å tørke brønnene på alle stadier av ELISA-innstillingen;
Når du bruker vaskemaskinen, hold øye med tilstanden til beholderen for løsning for vask av platen og tilkoblingsslanger: de skal ikke vise tegn på bakterie- eller soppvekst;
Det er nødvendig å bruke automatiske pipetter med utskiftbare spisser, sertifisert for verdien av gjennomsnittsdosen og konvergensen av pipetteresultatene (feil ikke mer enn 3%);
Dispensere og arbeidsflater skal behandles med en løsning med en volumfraksjon av etylalkohol på 70 %. Ikke bruk kloramin og andre klorholdige stoffer;
Det anbefales å bruke engangspipettespisser for håndtering av test- og kontrollprøver. Hver serumprøve, så vel som reagenssett, må samles med en separat spiss.
Ved innføring i brønnene til PK-1 må du ikke berøre overflaten av tabletten og løsningen i brønnene med pipettespissen.
Unngå direkte sollys på arbeidsflaten under analysen.
4.2 Når du åpner og løser opp de frysetørkede komponentene, er det nødvendig å sikre at det ikke blir igjen tørrstoff på lokket og veggene til hetteglassene.
5 Utstyr og materialer som kreves for analyse
5.1 Vertikalt skanningsspektrofotometer, som gjør det mulig å måle den optiske tettheten til løsninger i brønnene på tabletten ved en bølgelengde på 450 nm;
Halv- eller automatisk enhet for vask av tabletter (vasker);
Tørrlufttermostat type TC-80 M2, opprettholder en temperatur på (37 ± 1) ° C, eller lignende egenskaper;
Enkanals automatiske pipetter med utskiftbare spisser, som gjør det mulig å ta væskevolumer fra 0,01 til 5,0 ml;
Pipetter 8-kanals automatisk med utskiftbare spisser, slik at du kan velge væskevolum på opptil 0,5 ml;
Målesylinder med en kapasitet på 2000 ml;
Laboratoriekolbe med en kapasitet på 2000 ml;
Glassflasker med en kapasitet på 20 ml;
Bretter for reagenser eller petriskåler (diameter 100 mm);
Bomull medisinsk hygroskopisk;
Filterpapir;
Gummi kirurgiske hansker;
Løsning med en volumfraksjon av etylalkohol 70%;
Løsning med en massefraksjon av hydrogenperoksid 6%;
Avionisert eller destillert vann;
Beholder for oppsamling av fast avfall;
Beholder for drenering av flytende avfall.
6 Forberedelse til analyse
6.1 Fjern reagenssettet fra kjøleskapet før analyse, åpne lokket på boksen og hold komponentene i settet ved en temperatur (18-25) °C i 30 min.
Bland alle serum (plasma) prøver og reagenser grundig før analyse.
Reagensforbruket til testsettet, som bestemmes av antall strimler som brukes, er gitt i tabell A.1 i vedlegg A.
6.2 Klargjøring av platevaskeløsningen
Merk følgende! Klargjør løsningen for vask av platen 15 minutter før starten av analysen!
Hvis hetteglasset med FSB-T × 25 inneholder et bunnfall, må det varmes opp før bruk til en temperatur på (37 ± 1) ° C til bunnfallet er fullstendig oppløst. I en målesylinder med en kapasitet på 2000 ml, tilsett innholdet i hetteglasset med FSB-T × 25, tilsett deretter destillert vann til merket 1250 ml og bland forsiktig løsningen. Løsningen kan oppbevares ved (2-8) °C i 72 timer.
Ved bruk av en eller flere strimler, rist innholdet i hetteglasset med FSB-T × 25 kraftig i (20-30) s, ta det nødvendige volumet av løsningen (tabell A.1) i et målebeger eller en sylinder , tilsett den nødvendige mengden destillert vann og bland løsningen . Ubrukt FSB-T×25 kan oppbevares i et lukket hetteglass ved en temperatur på (2-8) °C under utløpsdatoen til settet.
6.3 Immunosorbentpreparat
Immunosorbenten er klar til bruk.
Åpne pakken og installer det nødvendige antall strimler på rammen. Oppbevar de resterende strimlene i en tett lukket pose med tørkemiddel ved (2-8) °C i 3 måneder.
6.4 Klargjøring av K + AT, K - , RK-1, PP-K2, BRS og stoppreagens
K + AT, K - , RK-1, RR-K2, BRS og stoppreagens er klare til bruk.
Merk følgende! Utfelling er mulig i et hetteglass med RK-1. Supernatanten må brukes til analyse.
Ubrukt RK-1, PP-K2, BRS og stoppreagens etter åpning av hetteglassene kan lagres i lukkede hetteglass ved en temperatur på (2-8) °C under utløpsdatoen til settet.
Resten av K + AT og K - etter åpning av flasken kan lagres i lukkede flasker ved en temperatur på (2-8) ° C under utløpsdatoen til settet.
6.5 Fremstilling av K + AG-løsning
Merk følgende! K + AG-løsningen bør tilberedes 15 minutter før analysen starter!
For å gjenopprette lyofilisert K + AG, før du åpner hetteglasset, bank lett for å riste av partiklene som fester seg til veggene på hetteglasset eller proppen. Åpne hetteglasset og legg korken opp ned på en tørr overflate. Tilsett 0,8 ml destillert vann til hetteglasset. Lukk hetteglasset med en kork, hold i 10 minutter ved en temperatur på (18-25) ° C og vipp og roter hetteglasset forsiktig, bland innholdet til det er helt oppløst, og unngå skumdannelse.
Rekonstituert K + AG kan oppbevares i et lukket hetteglass ved en temperatur på (2-8) °C i én måned, ved en temperatur på minus 20 °C – i seks måneder. En enkelt fryse-tine av den restaurerte K + AG er tillatt.
6.6 Fremstilling av Kg-2-løsning i arbeidsfortynning
Ta volumet angitt i tabell A.1 fra hetteglasset med Kg-2 og overfør det til hetteglasset med PP-K2. Bland innholdet i hetteglasset grundig, unngå skumdannelse.
Hvis en eller flere strimler brukes, ta den nødvendige mengden PP-K2 i et rent hetteglass, tilsett Kg-2 i henhold til tabell A.1 og bland løsningen uten å skumme.
Merk følgende! Kg-2-løsning i arbeidsfortynning tilberedes rett før bruk! Kg-2-løsning i arbeidsfortynning kan lagres i 15 minutter ved en temperatur på (18-25) °C. Bruk kun et nytt reagensbrett og nye tips!
Resten av Kg-2 kan oppbevares i et lukket hetteglass ved en temperatur på (2-8) °C under utløpsdatoen til settet.
6.7 Klargjøring av arbeidssubstratløsning
Flasken med TMB-kromogen må varmes opp før bruk til en temperatur på (37±1)° C til fullstendig oppløsning av krystallene.
Ta volumet angitt i tabell A.1 fra hetteglasset med TMB-kromogen og overfør det til hetteglasset med BRS. Bland innholdet i hetteglasset grundig, unngå skumdannelse.
Hvis en eller flere strimler brukes, ta den nødvendige mengden BRS i et rent hetteglass, tilsett TMB-kromogenet i samsvar med tabell A.1 og bland løsningen uten å skumme.
Merk følgende! Arbeidsløsningen til underlaget tilberedes umiddelbart før bruk på et sted beskyttet mot lys! Løsningen kan lagres i 20 minutter ved en temperatur på (18-25) ° C, beskyttet mot lys.
Løsningen må beskyttes mot lys og kontakt med metaller eller metallioner. Substratløsningen må være fargeløs før bruk. Retter som vil være i kontakt med substratløsningen under reaksjonen bør vaskes uten bruk av syntetiske vaskemidler. Bruk kun et nytt reagensbrett og nye tips!
Resten av TMB-kromogenet kan oppbevares i et lukket hetteglass ved en temperatur på (2-8) °C under utløpsdatoen til settet.
7 Krav til platevask
I alle stadier av vask er det nødvendig å kontrollere fyllingen av alle brønner og fullstendig fjerning (aspirasjon) av væske fra dem;
Det er nødvendig ved hver vask å fylle alle brønnene med en løsning til randen (0,30-0,35 ml per brønn), uten å renne over og renne over væske fra nabobrønner;
Hold brønnene fylt med platevaskeløsningen i 30 s;
Med hver aspirasjon, fjern forsiktig gjenværende væske fra brønnene ved å banke på rammen med strimlene i en omvendt posisjon på filterpapiret brettet flere ganger, plassert på et ark med polyetylen;
Dårlig vask av platen fører til feil resultat.
8 Gjennomføre analyse
8.1 Legg til i to brønner på tabletten 0,07 ml(70 µl) K + AT, i de to andre brønnene - ved 0,07 ml(70 µl) K + AG, i tre andre hull - av 0,07 ml(70 µl) TIL - .
Merk følgende! Ved oppsett av ELISA på en stripe er det tillatt å bruke to brønner for K - - en brønn, for K + AT - en brønn, for K + AG - en brønn.
Tilsett i de resterende brønnene på tabletten 0,07 ml(70 µl) av de studerte prøvene av humant serum (plasma).
Merk følgende! Hver prøve skal tas med engangsspiss!
8.2 Inn i alle brønner på tabletten over kontrollprøver og testprøver av blodserum (plasma) med en gang bidra med 0,05 ml(50 µl) RK-1. Bland innholdet i brønnene ved å banke forsiktig på kantene på platen.
8.3 (37 ± 1) ° Innenfra 60 min.
Merk følgende! For (1-2) minutter før slutten av inkubasjonen, tilbered en Kr-2-løsning i arbeidsfortynning (seksjon 6.6).
8.4 Fjern innholdet i brønnene med vaskemaskinen, vask deretter brønnene på platen med platevaskeløsningen (trinn 6.2) syv ganger.
8.5 Legg til alle brønnene på platen 0,15 ml(150 ul) løsning Kg-2 i arbeidende avl (klausul 6.6).
8.6 Forsegl platen med en film eller dekk til med et lokk og inkuber i en termostat ved en temperatur (37 ± 1) ° Innenfra 10 min.
8.7 Fjern innholdet i brønnene på platen med en vaskemaskin, vask deretter brønnene på platen med løsningen for å vaske platen (seksjon 6.2) syv ganger.
8.8 Innfør i alle brønner på tabletten 0,15 ml(150 µl) substratarbeidsløsning(klausul 6.7).
Når du tilbereder en arbeidsløsning av substratet (klausul 6.7) f lacon med TMB-kromogen må varmes opp før bruk i (3-5) minutter ved en temperatur på (37± 1) ° C til krystallene er helt oppløst.
8.9 Forsegl platen med en film eller dekk til med et lokk og inkuber i en termostat ved en temperatur (37 ± 1) ° FRA på et mørkt sted for 15 minutter.
Merk følgende! Ved slutten av inkubasjonen, i brønner med serumprøver som inneholder antistoffer mot HIV-1 og/eller HIV-2 og/eller HIV-1 p24-antigen, vil fargen på løsningen endres fra fargeløs til blå med varierende intensitet avhengig av konsentrasjonen av antistoffer og/eller antigen i testserumprøven.
8.10 Stopp peroksidasereaksjonen ved å legge til alle brønner 0,05 ml(50 µl) stopp reagens.
Merk følgende! Brønner med serumprøver som inneholder anti-HIV-1 og/eller HIV-2 antistoffer og/eller HIV-1 p24 antigen vil endre fargen på løsningen fra blå til gul med varierende intensitet.
8.11 Ikke senere enn (1-2) minutter etter stopp av reaksjonen, bestemme OD i brønnene i enkeltbølgemodus ved en bølgelengde 450 nm.
9 Behandling av analyseresultater
9.2 Resultater vurderes kun hvis:
Verdien av OPsr K - overstiger ikke 0,2 OE;
Hver enkelt verdi av OP K - bør ikke avvike fra OPs K - mer enn 30%. Hvis en av de tre verdiene til OP K - går utover denne grensen, bør den ekskluderes fra beregningen av OPs K - . Hvis to av de tre ODK-verdiene er utenfor denne grensen, bør analysen gjentas på et nytt sett med reagenser;
Verdien av OPsr K + AT mer enn 1,0 OE;
Verdien av OPsr K + AG er mer enn 1,0 OE.
9.3 Hvis betingelsene ovenfor er oppfylt, beregner du den kritiske verdien (OPcrit.), OE, i henhold til formelen (1):
OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).
10 Analytiske og diagnostiske egenskaper
Følsomhet reagenssett ELISA-HIV 1.2 AGAT for påvisning av HIV-1 p24-antigen –
Spesifisitet reagenssett ELISA-HIV 1.2 AGAT– 100 % standard AT(-)HIV. Standard panel av sera som ikke inneholder antistoffer mot humant immunsviktvirus av den første og andre typen (HIV-1,2) og HIV-1-antigen (p24). CJSC MBS.
11 Utgivelsesskjema for sett
11.1 Settet er tilgjengelig i fem konfigurasjoner:
1 sett 1P - manuell analyse. Settet er designet for 12 ELISA-kjøringer på en sammenleggbar plate: 1 kjøring - 1 stripe (8 hull). Totalt - 96 bestemmelser, inkludert kontrollprøver;
2 sett 2M - manuell analyse. Settet er designet for 2 ELISA-kjøringer på monolittiske plater: 1 kjøring - 1 plate. Totalt - 192 bestemmelser, inkludert kontrollprøver;
3 sett 2P- manuell analyse. Settet er designet for å holde 24 produksjoner ELISA for 2 sammenleggbar x tabletter: 1 innstilling - 1 strimmel (8 hull). Total - 192 definisjoner, inkludert kontrollprøver;
4 sett A2M - analyse på en automatisk analysator. Settet er designet for 2 ELISA-kjøringer på monolittiske plater: 1 kjøring - 1 plate. Totalt - 192 bestemmelser, inkludert kontrollprøver;
5 sett A2P - analyse på en automatisk analysator. Settet er designet for 24 ELISA-kjøringer på 2 sammenleggbare plater: 1 kjøring - 1 stripe (8 hull). Totalt 192 bestemmelser, inkludert kontrollprøver.
12 Oppbevarings- og bruksbetingelser for settet
12.1 Settet skal oppbevares i et rent, beskyttet mot fuktighet og lys rom ved en temperatur på (2-8) ° C under hele holdbarheten. Ikke frys settkomponenter.
12.2 For å oppnå pålitelige resultater, er det nødvendig å følge instruksjonene for bruk av settet nøye.
12.3 Utløpsdato for settet 12 måneder.
Vedlegg A
Tabell A.1 - Forbruk av reagenser i ELISA-settet
|
reagens, ml |
Antall brukte strips, stk. |
|||||||||||
|
Klargjøring av løsning for vask av platen |
||||||||||||
|
FSB-T×25 |
||||||||||||
|
destillert vann |
||||||||||||
|
Fremstilling av Kg-2-løsning i arbeidsfortynning |
||||||||||||
|
RR-K2 |
||||||||||||
|
Klargjøring av substratarbeidsløsning |
||||||||||||
|
Kromogen TMB |
||||||||||||
Bibliografi
|
Sanitære forskrifter |
Ordre fra Hviterusslands helsedepartementet datert 16. desember 1998 nr. 351 Om revisjon av avdelingsbestemmelser som regulerer spørsmål knyttet til problemet med hiv/aids |
|
|
Ordre fra Hviterusslands helsedepartementet datert 25. november 2002 nr. 165 Om å gjennomføre desinfeksjon og sterilisering ved helseinstitusjoner |
||
|
Dekret fra Hviterusslands helsedepartement datert 28. april 2010 nr. 47 Om godkjenning av instruksen om prosedyren for å gjennomføre obligatoriske medisinske undersøkelser av ansatte og ugyldiggjøring av visse resolusjoner fra helsedepartementet i Republikken Hviterussland |
||