Testsett for immunokromatografisk entrinns kvalitativ bestemmelse av fekalt okkult blod.

Gastrointestinale sykdommer som tykktarmskreft, magesår, polypper, kolitt, divertikulitt og rektalfissurer kan ikke forårsake noen synlige symptomer i de tidlige stadiene. Det er vanskelig å finne dem i denne perioden.
En enkel og pålitelig diagnostisk metode i dette tilfellet kan være påvisning av fekalt okkult blod (FOB).

Sammensetning:

• tabletten er individuell, pakket i en individuell vakuumpakke laget av aluminiumsfolie med et tørkemiddel,
• pipette med prøvebeholder,
• reagens for fortynning av avføringsprøven.

Sensitivitet: 50 ng/ml eller 6 µg i 1 gram avføring.
Analysetid: 5 minutter.
Én plate er for én bestemmelse.

Holdbarhet: 24 måneder.

KORTE BRUKSINSTRUKSJONER

Gjennomføre en analyse

1. Før bestemmelsen starter, må alle analyserte prøver av serum (plasma) eller fullblod oppbevares i romtemperatur (+18 - 25 °C) i minst 20 minutter.

2. Åpne reagensglasset for å fortynne prøven.

3. Ta en avføringsprøve med en prøvetakingsstav, plasser den i hetteglasset, lukk lokket og rist for å blande prøven og bufferen.

4. Åpne tablettemballasjen, fjern tabletten og plasser den på en ren overflate med testområdet opp.

5. Dispenser 5 dråper (~120 µl) i den runde brønnen merket S (prøve).

6. Etter 5 minutter (men ikke senere enn 10 minutter), evaluer resultatet av reaksjonen visuelt.

Tolkning av analyseresultater

Deteksjon i testområdet på nettbrettet 2 parallelle striper med rosa farge på nivået av markeringer T og FRA indikerer et positivt resultat av analysen.

Deteksjon i testområdet på nettbrettet av den første linjen med rød farge på markeringsnivået FRA indikerer et negativt testresultat.

I tilfelle det i testområdet er linjen rød i nivå med merkingen FRA mangler eller én rød strek på merkenivået T resultatet av analysen er ugyldig og bestemmelsen må utføres med en annen plate.

Lagrings- og driftsforhold

Settet skal oppbevares i produsentens emballasje ved en temperatur på +2 - 30 ° C på et tørt sted under hele holdbarheten. Frysing av settkomponenter er ikke tillatt.

Holdbarheten til settet er 24 måneder.

For å oppnå pålitelige resultater, er streng overholdelse av bruksanvisningen nødvendig.

Generell informasjon om studiet

Kolorektal kreft er en av de vanligste krefttypene både når det gjelder forekomst og dødelighet. Den rangerer nummer to når det gjelder dødelighet blant ondartede neoplasmer hos menn og kvinner. Hvert år registreres mer enn 1 million nye tilfeller av sykdommen på verdensbasis, og den årlige dødsraten overstiger 500 000. Risikoen for å utvikle sykdommen øker med alderen, 90 % av tilfellene er i befolkningen over 55 år. I følge epidemiologiske data er arvelighet årsaken til tykktarmskreft hos 5-30 % av pasientene. Arvelige syndromer som betydelig øker risikoen for å få det inkluderer familiær adenomatøs polypose, Lynch-syndrom, juvenil polypose og noen sjeldnere tilstander. 5-års pasientoverlevelse avhenger av kreftstadiet på diagnosetidspunktet.

Kolorektal kreft utvikler seg sakte over flere år. Svulsten oppstår ofte som et resultat av transformasjonen av polyppen i tarmslimhinnen. Denne prosessen kan ta fra 8 til 12 år. Ikke alle typer polypper kan bli til en svulst, men deres tilstedeværelse, spesielt i stort antall, øker risikoen for å utvikle tykktarmskreft betydelig. Andre precancerøse tilstander inkluderer dysplasi, som er vanlig hos personer med ulcerøs kolitt, Crohns sykdom.

Ved tykktarmskreft kan blod bli utgytt i avføringen lenge før de første symptomene på sykdommen. Screening av avføring for okkult blod blant risikopersoner bidrar til å diagnostisere sykdommen i tide og redusere dødeligheten av tykktarmskreft med 15-33 %. Effektiviteten av denne screeningen er bekreftet av flere studier.

For å oppdage okkult blod i avføringen brukes oftest guaiac- eller benzidintester, men de krever streng overholdelse av visse regler, spesielt slanking noen dager før studien. I tillegg, i motsetning til guaiac-testen, har moderne immunkjemiske metoder høy sensitivitet og spesifisitet.

Den immunologiske testen av fekalt okkult blod (FOB) har vist seg å være den mest praktiske testmetoden på grunn av dens enkelhet og effektivitet i pasientbehandling. Den lar deg nøyaktig bestemme mengden hemoglobin (Hb) i avføringen, mens pasienter ikke trenger å følge en diett eller endre livsstil. Metoden er basert på en antigen-antistoff-agglutinasjonsreaksjon mellom humant hemoglobin i prøven og et anti-hemoglobin-antistoff på latexpartikler. Agglutinasjon måles som en økning i absorbans ved 570 nm, hvis enhet er proporsjonal med mengden humant hemoglobin i prøven. Studien bestemmer okkult blod som har kommet inn i tarmlumen i den nedre mage-tarmkanalen, siden hemoglobin fra de øvre delene blir ødelagt når de passerer gjennom fordøyelseskanalen.

Et positivt resultat av analysen krever ytterligere undersøkelse for å avklare årsakene, siden en godartet polypp, divertikkel, hemorroider eller inflammatorisk tarmsykdom kan tjene som en kilde til mindre blodtap. En okkult blodprøve er positiv hos gjennomsnittlig 1-5 % av personene, hvorav 2-10 % har kreft, og 20-30 % har adenomatøse kolonpolypper. Hvis testen er positiv for okkult blod, gjøres en ekstra test for å se etter kreft, en polypp eller en annen årsak til blødning. For å bekrefte diagnosen blir pasienter i fravær av kontraindikasjoner tildelt en koloskopi, sigmoidoskopi eller røntgen med dobbel kontrast. Fravær av blod i avføringen utelukker ikke helt muligheten for tykktarmskreft, så endoskopi anbefales for personer med høy risiko (med familiehistorie), selv om testresultatet er negativt.

Hva brukes forskning til?

• For screening for tykktarms- og endetarmskreft.
• For diagnostisering av blødning fra den nedre mage-tarmkanalen ved noen godartede og inflammatoriske sykdommer (tykktarmspolypper, Crohns sykdom, ulcerøs kolitt, hemoroider).

Når er studiet planlagt?

• Med en forebyggende årlig undersøkelse av personer i alderen 50-75 år.
• Ved mistanke om okkult blødning.

Delenummer: 4091-3L Emballasje: 20 tester/pakke

Referanse

Mer enn 600 000 tilfeller av tarmkreft forekommer hvert år over hele verden, og det er den tredje vanligste kreftformen (1). Som med enhver annen type kreft øker det å finne lesjoner på et tidlig stadium signifikant pasientenes overlevelse (2). Blant personer over 45 år har 10 % kolorektale polypper, hvorav 1 % blir kreft (3). Basert på det faktum at mange polypper større enn 0,5 cm kan blø, ser avføringsprøver av okkult blod ut til å være en enkel og rimelig screeningmetode for å diagnostisere tarmkreft sammenlignet med koloskopi. I mange år har det vært brukt kjemiske metoder basert på hemoglobinets pseudoperoksidaseaktivitet, hvor ulempene er lav sensitivitet og mangel på spesifisitet (4). Begynner å bruke nå immunologisk metoder med forbedret sensitivitet og spesifisitet for humant blod, til tross for deres større tekniske kompleksitet sammenlignet med andre tester (5). En direkte sammenheng mellom hemoglobinkonsentrasjon i fekal og tykktarmskreft er nylig bekreftet (6).

Hensikt og prinsipp for metoden

Kvantitativ immunokromatografisk hurtigtest for påvisning av okkult blod i avføring. Bestemmelsesmetoden er basert på bruk av et spesifikt kompleks av fargestoffkonjugert musemonoklonal antistoffer mot humant hemoglobin og monoklonale museantistoffer mot humant hemoglobin immobilisert i testsonen til kassetten for dets selektive identifikasjon med høy grad av sensitivitet og spesifisitet. Etter å ha tatt en prøve med en spesiell sprøyte med en ekstraksjonsløsning, tilsettes noen få dråper av det resulterende fekale ekstraktet til prøvebrønnen på testkassetten. Når testprøven passerer gjennom adsorbentlaget, binder det merkede antistoff-fargestoff-konjugatet seg til humant hemoglobin, og danner et kompleks antigen-antistoff. Dette komplekset binder seg i reaksjonssonen med antistoffer mot hemoglobin med dannelse av et rosa bånd. I fravær av hemoglobin dannes ingen linje. Fortsetter å bevege seg langs adsorbentlaget, binder det ubundne konjugatet seg til reagensene i kontrollsonen med dannelse av et kontrollbånd, som indikerer reaktiviteten til testen. Avhengig av blodkonsentrasjonen vises linjer med varierende intensitet i testvinduet, noe som gjør det mulig å kvantitativt måle hemoglobin ved hjelp av Easy Reader (VEDALAB) immunokromatografisk ekspressanalysator.

Sammensatt

Testkassetter 20

Prøvetakingsutstyr (sprøyte med 2 ml ekstraksjonsløsning) 20

Instruksjon 1

Stabilitet og lagring

1. Oppbevares ved 4 til 30°C i lukket originalemballasje.

2. Må ikke fryses!

3. Testen er stabil til utløpsdatoen som er trykt på etiketten.

Forebyggende tiltak

Denne testen er kun for diagnostiske formål. i vitro og profesjonell bruk.

Bruk verneklær og engangshansker ved håndtering av prøver.

Ikke spis, drikk eller røyk i et rom hvor arbeid pågår med prøver.

Når du tar og tester prøver, ikke berør slimhinnene i øyne og nese med hendene.

Ikke bruk testkassetten hvis dens beskyttende emballasje er skadet.

Ikke bruk en utgått testkassett.

Ekstraksjonsløsningen kan forårsake irritasjon av hud, øyne og slimhinner. Hvis løsningen kommer i kontakt med huden, vask den umiddelbart av med vann.

Avfallshåndtering

Alle prøver bør betraktes som potensielt smittsomme. Etter at testprosedyren er fullført, skal prøvene kastes med forsiktighet og kun etter sterilisering i autoklav eller behandling med 0,5-1 % natriumhypoklorittløsning i minst 1 time.

Klargjøring av reagens

Alle reagenser er klare til bruk.

Testprøver

Fekalekstrakt.

Prøveinnsamling og klargjøring

1. Skriv pasientens navn, alder, adresse og dato for prøvetaking på etiketten til prøvetakingsapparatet.

2. Åpne toppen av prøvetakingsenheten der prøvetakingssonden er plassert.

3. Ta en avføringsprøve ved å bruke toppen av prøvetakingsenheten, dypp den ned på 3 forskjellige steder i samme avføringsprøve, og plasser den i enheten.

4. Plasser prøvetakingssonden, lastet med prøve, tilbake på plass i prøvetakingsanordningen og skru proppen godt fast.

5. Oppbevar prøvetakingsenheten ved 2-8°C.

Test prosedyre

1. Ta med alle prøver og testkassetter til romtemperatur.

2. Ta testkassetten ut av den beskyttende emballasjen.

3. Bryt av tuppen på prøvetakingsanordningen, klem 6 hele dråper av den ekstraherte prøven (150 µl) dråpevis inn i prøvebrønnen på testkassetten, slik at den forrige dråpen kan absorberes.

4. Testresultater i ng/mL leses av på Easy Reader 10 minutter etter at prøven er tilsatt.

En detaljert beskrivelse av arbeidet med leseren er gitt i instruksjonene for enheten.

Testegenskaper

a) Måleområde

Det kvantitative resultatet av testen uttrykkes som ng hemoglobin per ml ekstraksjonsløsning. Det lineære resultatområdet er fra 10 til 500 ng / ml, området er vist i tabellen:

b) Nøyaktighet

Studien ble utført på et panel av 24 avføringsprøver levert av Bradford Hospital (UK) under Yorkshire External Quality Assurance System (YEQAS). Disse prøvene som inneholder kjente konsentrasjoner av hemoglobin (mg/g feces) ble testet med en kvalitativ rask visuell test og ved denne kvantitative testen. De oppnådde resultatene indikerer en fullstendig korrelasjon mellom resultatene. I tillegg korrelerer de kvantitative resultatene godt med mengden hemoglobin (YEQAS-data i mg/g feces). I alle tilfeller ble prøvene positivt identifisert som negative (<10 нг/мл), пограничные (10-25 нг/мл) и позитивные (500-5,000 нг/мл).

c) Følsomhet

Konsentrasjoner nær 5 ng/ml bestemmes av instrumentet. I dette tilfellet vises resultatet som "<10 ng/ml». Результаты выше 100 нг/мл рассматриваются как патологические.

d) Høydoseeffekt (krokeffekt)

Ingen krokeffekt ble observert opp til 2 mg/ml takket være den patenterte VEDALAB-metoden.

e) Kryssreaktivitet:

Testen viste ingen kryssreaksjoner med storfe-, svine-, kanin-, heste- og sauehemoglobin.

e) Reproduserbarhet:

Ved testing av to kommersielle prøver med en okkult blodkonsentrasjon på 3,35 og 26,67 ng/ml i 25 repetisjoner, er koeffisienten variasjoner resultatene var henholdsvis 8,5 % og 11,4 %.

g) Diagnostisk verdi

Som diskutert nedenfor (se "Begrensninger for metoden"), er det mange årsaker til tilstedeværelsen av blod i avføringen, og klinikeren må bekrefte resultatene av denne testen med andre kliniske metoder, for eksempel koloskopi.

Ved testing av 54 avføringsprøver ble det funnet at resultater under 100 ng/ml skulle tolkes som negative, fra 100 til 200 ng/l som borderline, og over 200 ng/ml som positive. Men i nærvær av andre symptomer er ytterligere undersøkelse nødvendig, selv om den påviste konsentrasjonen er under 100 ng / ml.

Metodebegrensninger

1. Testen er utformet for å kvantifisere humant blod (hemoglobin) i avføring.

2. Tilstedeværelsen av blod i avføringen kan skyldes flere andre årsaker enn tarmkreft, for eksempel hemoroider, blod i urinen eller mageirritasjon. Blødning fra den øvre mage-tarmkanalen (f.eks. i tilfelle av magesår eller duodenalsår) kan ikke påvises konsekvent på grunn av proteinfordøyelse og vanskeligheter for antistoffer å gjenkjenne hemoglobinantigenet etter proteolyse.

3. Ikke all intestinal blødning kan være forårsaket av forstadier til kreft eller kreftpolypper.

4. Som med enhver diagnostisk prosedyre, må legen bekrefte funnene oppnådd ved bruk av denne testen med andre kliniske metoder som bariumklyster, sigmoidoskopi eller koloskopi.

5. Negative resultater utelukker ikke blødning da den kan være intermitterende.

6. Kolorektale polypper på et veldig tidlig stadium av sykdommen kan ikke blø. Av denne grunn, for pålitelighet, anbefales det å sjekke personer over 45 år med jevne mellomrom (en gang i året).

7. Testen er ment å leses kun på Easy Reader. Testen er ikke beregnet på visuell lesing.

8. Hvis avlesningstiden (10 minutter) ikke overholdes, kan falske resultater observeres.

9. Som det er observert i andre analysemetoder, er det en viss variasjon i måleresultatene. For kliniske data anbefales det derfor å legge inn en variasjonskoeffisient på +/- 25 % i forhold til oppnådd resultat.

Immunokromatografisk test for å oppdage hemoglobin i avføring (okkult blod)

Hensikt

"RØDT okkult blod"-testen er beregnet på in vitro ett-trinns rask kvalitativ påvisning av hemoglobin (okkult blod) i avføring.

kort informasjon

Fekal okkult blodanalyse brukes til å oppdage ulike typer patologi i den nedre mage-tarmkanalen, preget av blødning (tykktarmspolypper, tykktarmskreft, Crohns sykdom, ulcerøs kolitt). Kar på overflaten av en kolorektal polypp eller malignitet er ofte skjøre og lett skadet av passasje av avføring. Samtidig frigjøres en liten mengde blod i avføringen, som sjelden er merkbar for øyet.

«RØDT okkult blod»-testen viser høy sensitivitet og spesifisitet for å oppdage blødninger i nivå med tykktarm og endetarm, samtidig som den er ufølsom for okkulte blødninger i øvre mage-tarmkanal, hvor proteindelen av hemoglobin fordøyes.

Metodeprinsipp

Bestemmelsen er basert på prinsippet om immunokromatografisk analyse. Den analyserte prøven av flytende biologisk materiale absorberes av den absorberende delen av teststrimmelen. Hvis det er hemoglobin i prøven, reagerer det med spesifikke monoklonale antistoffer mot hemoglobin merket med fargede partikler påført startsonen og fortsetter å bevege seg med væskestrømmen. I teststrimmelens analytiske sone oppstår interaksjon med spesifikke monoklonale antistoffer immobilisert på membranoverflaten, med dannelse av et farget immunkompleks.

I kontrollsonen til teststrimmelen dannes et spesifikt farget immunkompleks uavhengig av tilstedeværelsen av hemoglobin i det testede biologiske materialet.

I tilfelle hemoglobin er tilstede i den analyserte prøven, dannes det to parallelle fargede linjer på teststrimmelen (rød analytisk, merket med bokstaven T, og grønn kontroll, merket med bokstaven C), som indikerer et positivt testresultat. I fravær av hemoglobin i den analyserte prøven, dannes en grønn kontrolllinje (C) på teststrimmelen, som indikerer et negativt testresultat.

Sammensatt

Ett sett med RØDE okkulte blodprøver inkluderer:

• immunokromatografiske teststrimler "RØDT okkult blod" i hvite plastkassetter - 5, 10 eller 20 stk.;
• rør med en dråpehette og en stang for å ta en avføringsprøve som inneholder en buffer for prøveoppløsning - henholdsvis 5, 10 eller 20 stk.;
• selvklebende etiketter for merking av rør av brukeren - henholdsvis 5, 10 eller 20 stk.;
• instruksjoner for bruk av testen "RØDT okkult blod" - 1 stk.

Teststrimmelkassettene er pakket i individuelle aluminiumsfolievakuumpakker som inneholder silikagelposer.

Settet med tester "RØDT okkult blod" er pakket i en pappeske.

Nødvendig utstyr og materialer er ikke inkludert i settet

• beholdere for innsamling av avføringsprøver;
• engangshansker av gummi eller plast;
• klokke eller tidtaker.

Analytiske egenskaper

• Sensitiviteten til den RØDE okkulte blodprøven er >99 %.
• Spesifisiteten til den røde okkult blodprøven er >99 %.
• Analysetiden er 10 min.

"RØDT okkult blod"-testen er spesifikk for humant hemoglobin og kryssreagerer ikke med hemoglobin og myoglobin av animalsk opprinnelse fra mat.

Hver RØD okkult blodprøve er ment for én bestemmelse av tilstedeværelsen av hemoglobin (okkult blod) i menneskelig avføring.

Forebyggende tiltak

RØD okkult blodprøve er kun beregnet for in vitro diagnostisk bruk.

Alle komponentene i testen "RØDT okkult blod" i konsentrasjonene som brukes er ikke-giftige.

Ikke bruk RØDE okkulte blodprøver etter utløpsdatoen.

Når du utfører bestemmelsen, bør engangshansker av gummi eller plast brukes, pga. de studerte prøvene av biologisk materiale bør betraktes som potensielt infiserte.

Brukte tester og rester av biologisk materiale bør legges i en spesialbeholder for sanitæravfall.

Analyserte prøver

Nysamlet biologisk materiale (avføring) som ikke inneholder konserveringsmidler.

Avføringsprøvene skal samles i en ren beholder.

Før bestemmelse kan avføringsprøver oppbevares ved en temperatur på 2–4 °C i ikke mer enn 2 dager, hvis lengre lagring (opptil 1 år) er nødvendig, ved en temperatur på –20 °C eller lavere.

Før analyse bør avføringsprøver tines fullstendig og bringes til romtemperatur.

Gjentatt frysing og tining av prøver er uakseptabelt.

Prøveforberedelse

1. Fjern dråpehetten fra røret og bruk stammen på hetten til å ta en liten mengde av prøven som skal analyseres. For å gjøre dette, sett stangen inn i prøven 3 ganger, og samle ca. 100 mg avføring (fig. 1-1). Hvis prøven er flytende, pipetteres 100 µl.

2. Sett prøvestaven inn i prøvefortynningsbufferrøret og skru dråpelokket godt fast (Figur 1-2).

3. Rist røret flere ganger for å lette prøveoppløsningen (Figur 2-1).

Gjennomføre en analyse

Analyserte fekale prøver og RØDE okkulte blodprøver bør bringes til romtemperatur (15–25 °C) før analyse.

4. Rist hetteglasset som inneholder prøveløsningen (Figur 2-1). Kutt av eller brekk av tuppen på dråpehetten.

5. Umiddelbart før du starter analysen, åpne pakken med RED Occult Blood-testen ved å rive den langs spalten. Ta ut teststrimmelkassetten og plasser den på en flat horisontal overflate.

6. Plasser 4 dråper (omtrent 100 µl) av væskeprøven i det runde vinduet på kassetten merket med bokstaven S, og unngå de faste partiklene i prøven med væsken (Figur 2-2). For hver prøve eller kontroll må det brukes et eget rør med prøveoppløsningsbuffer og en separat RØD okkult blodprøve.

7. Etter 10 minutter, evaluer resultatet av reaksjonen visuelt.

Tolking av resultater

Påvisningen av én grønn kontrolllinje (C) i testvinduet på kassetten indikerer et negativt resultat av analysen, dvs. indikerer fravær av hemoglobin i den analyserte fekale prøven (fig. 3-1).

Påvisningen av to parallelle fargede linjer (C og T) i testvinduet på kassetten indikerer et positivt resultat av analysen, dvs. indikerer tilstedeværelsen av hemoglobin i den analyserte fekale prøven (fig. 3-2). Intensiteten til den røde analytiske linjen (T) i testvinduet på kassetten kan variere avhengig av konsentrasjonen av hemoglobin i prøven.

I tilfeller hvor det ikke dannes en farget linje i testvinduet til kassetten eller kun en rød analytisk linje (T), blir analyseresultatet ugyldig (fig. 3-3). I dette tilfellet bør analysen gjentas med en annen test "RØDT okkult blod".

Et overskudd av en avføringsprøve kan føre til at det vises uklare, mørke linjer i testvinduet på kassetten, som ikke er diagnostiske. I dette tilfellet bør mer løsemiddel tilsettes avføringsprøven og analysen gjentas med en annen RØD okkult blodprøve.

Avføringsprøver tatt fra pasienter med blødende hemorroider, forstoppelse og under menstruasjon kan vise falske positive resultater.

Resultatene oppnådd ved bruk av RØD okkult blodprøve er foreløpige. For å bekrefte dem er ytterligere studier av avføringsprøver ved bruk av alternative metoder nødvendig.

Lagrings- og driftsforhold

"RØDT okkult blod"-tester bør oppbevares ved en temperatur på 2 til 25°C i produsentens emballasje på et tørt sted i hele holdbarheten. Frysing av RØDE okkulte blodprøver er ikke tillatt.

Utløpsdatoen for «RØDT okkult blod»-testene er 24 måneder. fra produksjonsdatoen.

Etter at pakken er åpnet, bør de røde okkulte blodprøvene brukes innen 2 timer når de oppbevares på et tørt sted ved romtemperatur.

For å oppnå pålitelige resultater er det nødvendig å følge bruksanvisningen for RØD okkult blodprøve nøye.