Testsett for immunokromatografisk ett-trinns kvalitativ bestemmelse av okkult blod i avføring.

Gastrointestinale sykdommer som tykktarmskreft, magesår, polypper, kolitt, divertikulitt og rektalfissurer kan ikke forårsake noen synlige symptomer i de tidlige utviklingsstadiene. Det er vanskelig å oppdage dem i denne perioden.
En enkel og pålitelig diagnostisk metode i dette tilfellet kan være påvisning av fekalt okkult blod (FOB).

Sammensetning:

• individuell tablett, pakket i individuell vakuumemballasje laget av aluminiumsfolie med et tørkemiddel,
• pipette med en beholder for å legge til en prøve,
• reagens for fortynning av en fekal prøve.

Sensitivitet: 50 ng/ml eller 6 mcg i 1 gram avføring.
Analysetid: 5 minutter.
Én tablett er beregnet på én bestemmelse.

Holdbarhet: 24 måneder.

KORTE BRUKSINSTRUKSJONER

Gjennomføring av analyser

1. Før bestemmelsen starter, må alle analyserte prøver av serum (plasma) eller fullblod oppbevares i romtemperatur (+18 - 25 o C) i minst 20 minutter.

2. Åpne reagensglasset for å fortynne prøven.

3. Samle en avføringsprøve med en prøvetakingsstav, plasser den i hetteglasset, lukk lokket og rist for å blande prøven og bufferen.

4. Åpne tablettemballasjen, fjern tabletten og plasser den på en ren overflate med testområdet vendt opp.

5. Tilsett 5 dråper (~ 120 µl) i det runde vinduet på tabletten, merket S (prøve).

6. Etter 5 minutter (men ikke senere enn 10 minutter), vurdere resultatet av reaksjonen visuelt.

Tolkning av analyseresultater

Påvisning av 2 parallelle rosa striper på markeringsnivået i testområdet på nettbrettet T Og MED indikerer et positivt testresultat.

Påvisning av den første linjen med rød farge i testsonen på nettbrettet på merkenivået MED indikerer et negativt testresultat.

I tilfelle når i testsonen er den røde linjen på nivå med merkingen MED mangler eller én rød strek på merkenivået T testresultatet er ugyldig og bestemmelsen må utføres med en annen nettbrett.

Lagrings- og driftsforhold

Settet skal oppbevares i produsentens emballasje ved en temperatur på +2 - 30 o C på et tørt sted gjennom hele holdbarheten. Frysing av settkomponenter er ikke tillatt.

Holdbarheten til settet er 24 måneder.

For å oppnå pålitelige resultater, er streng overholdelse av bruksanvisningen nødvendig.

Generell informasjon om studiet

Kolorektal kreft er en av de vanligste typene svulster, både når det gjelder forekomst og dødelighet. Det rangerer nummer to i dødelighet blant ondartede neoplasmer hos menn og kvinner. Hvert år er det mer enn 1 million nye tilfeller av sykdommen over hele verden, og den årlige dødsraten overstiger 500 000. Risikoen for å utvikle sykdommen øker med alderen, 90 % av de som rammes er over 55 år. I følge epidemiologiske data er arvelighet årsaken til utviklingen av tykktarmskreft hos 5-30% av pasientene. Arvelige syndromer som betydelig øker risikoen for å utvikle det inkluderer familiær adenomatøs polypose, Lynch-syndrom, juvenil polypose og noen sjeldnere tilstander. En pasients 5-års overlevelsesrate avhenger av kreftstadiet på diagnosetidspunktet.

Kolorektal kreft utvikler seg sakte over flere år. Svulsten oppstår ofte som et resultat av transformasjonen av en polypp i tarmslimhinnen. Denne prosessen kan ta fra 8 til 12 år. Ikke alle typer polypper kan bli til svulster, men deres tilstedeværelse, spesielt i store mengder, øker risikoen for å utvikle tykktarmskreft betydelig. Andre precancerøse tilstander inkluderer dysplasi, som er typisk for personer med ulcerøs kolitt og Crohns sykdom.

Ved tykktarmskreft kan blod frigjøres i avføringen lenge før de første symptomene på sykdommen. Screeningundersøkelse av avføring for okkult blod blant personer i faresonen bidrar til å diagnostisere sykdommen i tide og redusere dødeligheten fra tykktarmskreft med 15-33%. Effektiviteten av slik screening er bekreftet av flere studier.

For å oppdage skjult blod i avføring brukes oftest guaiac- eller benzidintester, men de krever streng overholdelse av visse regler, spesielt etter en diett flere dager før testen. I tillegg, i motsetning til guaiac-testen, er moderne immunkjemiske metoder svært sensitive og spesifikke.

Den fekale okkult blod (FOB) immunoassay-testen har vist seg å være den mest praktiske testmetoden på grunn av dens enkle og effektive pasientbehandling. Den lar deg nøyaktig bestemme mengden hemoglobin (Hb) i avføringen, uten å kreve at pasienter følger en diett eller endrer livsstil. Metoden er basert på en antigen-antistoff-agglutinasjonsreaksjon mellom det humane hemoglobinet i prøven og anti-hemoglobin-antistoffet på latexpartikler. Agglutinasjon måles som en økning ved absorbans på 570 nm, hvis enhet er proporsjonal med mengden humant hemoglobin i prøven. Studien fastslår skjult blod som har kommet inn i tarmlumen i de nedre delene av mage-tarmkanalen, siden hemoglobin fra de øvre delene blir ødelagt når det passerer gjennom fordøyelseskanalen.

Et positivt testresultat krever ytterligere undersøkelse for å avklare årsakene, siden kilden til mindre blodtap kan være en godartet polypp, divertikulum, hemoroider eller inflammatorisk tarmsykdom. I gjennomsnitt tester 1-5 % av personene positivt for okkult blod, hvorav 2-10 % er diagnostisert med kreft, og 20-30 % får diagnosen adenomatøse polypper i tykktarmen. Hvis okkult blod er positivt, gjøres ytterligere tester for å se etter kreft, en polypp eller en annen årsak til blødning. For å bekrefte diagnosen er pasienter i fravær av kontraindikasjoner foreskrevet koloskopi, sigmoidoskopi eller dobbel kontrastradiografi. Fraværet av blod i avføringen utelukker ikke helt muligheten for tykktarmskreft, så endoskopi anbefales for personer med høy risiko (med en familiehistorie), selv om testresultatet er negativt.

Hva brukes forskningen til?

• For screening for tykktarms- og endetarmskreft.
• For diagnostisering av blødning fra den nedre mage-tarmkanalen ved visse godartede og inflammatoriske sykdommer (tykktarmspolypper, Crohns sykdom, ulcerøs kolitt, hemoroider).

Når er studiet planlagt?

• Ved en forebyggende årlig undersøkelse av personer i alderen 50-75 år.
• Hvis du mistenker skjult tarmblødning.

Katalognummer: 4091-3L Emballasje: 20 tester/pakning

Henvisning

Det er mer enn 600 000 tilfeller av tykktarmskreft over hele verden hvert år, som er den tredje vanligste kreftformen (1). Som med alle typer kreft, vil det å oppdage lesjoner på et tidlig stadium forbedre pasientens overlevelsesrater betydelig (2). Blant personer over 45 år har 10 % kolorektale polypper, hvorav 1 % blir kreft (3). Basert på det faktum at mange polypper større enn 0,5 cm kan blø, ser testing for fekalt okkult blod ut til å være en enkel og rimelig screeningmetode for å diagnostisere tykktarmskreft sammenlignet med koloskopi. I mange år har det vært brukt kjemiske teknikker basert på pseudoperoksidaseaktiviteten til hemoglobin, og ulempene med disse er lav sensitivitet og mangel på spesifisitet (4). Begynner å bruke nå immunologisk metoder med forbedret sensitivitet og spesifisitet for humant blod, til tross for deres større tekniske kompleksitet sammenlignet med andre tester (5). Nylig er en direkte assosiasjon mellom fekal hemoglobinkonsentrasjon og tykktarmskreft blitt bekreftet (6).

Hensikt og prinsipp for metoden

Kvantitativ immunokromatografisk hurtigtest for påvisning av okkult blod i avføring. Bestemmelsesmetoden er basert på bruk av et spesifikt kompleks av fargestoffkonjugert musemonoklonal antistoffer mot humant hemoglobin og monoklonale museantistoffer mot humant hemoglobin immobilisert i testsonen til kassetten for dets selektive identifikasjon med høy grad av sensitivitet og spesifisitet. Etter å ha tatt en prøve med en spesiell sprøyte som inneholder en ekstraksjonsløsning, plasseres noen få dråper av det resulterende fekale ekstraktet i prøvebrønnen på testkassetten. Når testprøven passerer gjennom adsorbentlaget, binder det merkede antistoff-fargestoff-konjugatet seg til humant hemoglobin, og danner et kompleks antigen-antistoff. Dette komplekset binder seg til antistoffer mot hemoglobin i reaksjonssonen, og danner et rosa bånd. I fravær av hemoglobin dannes ikke linjen. Fortsetter å bevege seg langs adsorbentlaget, binder det ubundne konjugatet seg til reagensene i kontrollsonen for å danne et kontrollbånd som indikerer reaktiviteten til testen. Avhengig av blodkonsentrasjonen vises linjer med varierende intensitet i testvinduet, som lar deg kvantitativt måle hemoglobin ved å bruke "Easy Reader" immunokromatografisk ekspressanalysator (VEDALAB).

Sammensatt

Testkassetter 20

Prøvetakingsutstyr (sprøyte med 2 ml ekstraksjonsløsning) 20

Instruksjon 1

Stabilitet og lagring

1. Oppbevares ved en temperatur på 4 til 30°C i forseglet originalemballasje.

2. Må ikke fryses!

3. Testen er stabil frem til utløpsdatoen som er angitt på etiketten.

Forebyggende tiltak

Denne testen er kun for diagnostiske formål. i vitro og profesjonell bruk.

Når du arbeider med prøver, bruk verneklær og engangshansker.

Ikke spis, drikk eller røyk innendørs hvor arbeid som gjøres med prøver.

Når du tar og tester prøver, ikke berør slimhinnen i øyne og nese med hendene.

Ikke bruk testkassetten hvis dens beskyttende emballasje er skadet.

Ikke bruk en testkassett som er utløpt.

Ekstraksjonsløsningen kan forårsake irritasjon av hud, øyne og slimhinner. Hvis løsningen kommer på huden din, vask den umiddelbart av med vann.

Avfallshåndtering

Alle prøver bør betraktes som potensielt smittsomme. Etter at testprosedyren er fullført, bør prøvene kastes med forsiktighet og kun etter sterilisering i autoklav eller behandling med 0,5–1 % natriumhypoklorittløsning i minst 1 time.

Reagenspreparering

Alle reagenser er klare til bruk.

Testprøver

Fekalekstrakt.

Prøveinnsamling og klargjøring

1.Skriv pasientens navn, alder, adresse og dato for prøvetaking på prøvetakingsenhetens etikett.

2. Åpne toppen av prøvetakingsenheten, der prøvetakingssonden er plassert.

3. Samle en avføringsprøve ved å bruke toppen av prøvetakingsenheten ved å dyppe den på 3 forskjellige steder i samme avføringsprøve og plasser den inn i enheten.

4.Plasser prøvetakingssonden lastet med prøve tilbake på plass i prøvetakingsenheten og skru pluggen godt fast.

5. Oppbevar prøvetakingsenheten ved en temperatur på 2-8°C.

Testprosedyre

1. Ta med alle prøver og testkassetter til romtemperatur.

2. Ta testkassetten ut av dens beskyttende emballasje.

3. Bryt av tuppen på prøvetakingsanordningen, dispenser 6 fulle dråper ekstrahert prøve (150 µl) i prøvebrønnen på testkassetten, slik at den forrige dråpen kan absorberes.

4. Testresultater i ng/ml leses av på "Easy Reader"-enheten 10 minutter etter tilsetning av prøven.

En detaljert beskrivelse av funksjonen til leseren er gitt i instruksjonene for enheten.

Testegenskaper

a) Måleområde

Det kvantitative resultatet av testen er uttrykt i ng hemoglobin per ml ekstraksjonsløsning. Det lineære resultatområdet er fra 10 til 500 ng/ml, området er gitt i tabellen:

b) Nøyaktighet

Studien ble utført på et panel med 24 avføringsprøver sendt av Bradford Hospital (UK) til Yorkshire External Quality Assurance System (YEQAS). Disse prøvene, som inneholder en kjent konsentrasjon av hemoglobin (i mg/g feces), ble testet med en kvalitativ visuell hurtigtest og denne kvantitative testen. De oppnådde resultatene indikerer en fullstendig korrelasjon mellom resultatene. I tillegg korrelerer de kvantitative resultatene godt med mengden hemoglobin (YEQAS-data i mg/g feces). I alle tilfeller ble prøver klart identifisert som negative (<10 нг/мл), пограничные (10-25 нг/мл) и позитивные (500-5,000 нг/мл).

c) Følsomhet

Konsentrasjoner nær 5 ng/ml bestemmes av enheten. I dette tilfellet vises resultatet som "<10 ng/ml». Результаты выше 100 нг/мл рассматриваются как патологические.

d) Høydoseeffekt (krokeffekt)

Ingen krokeffekt ble observert opp til 2 mg/ml takket være den proprietære VEDALAB-metoden.

e) Kryssreaktivitet:

Testen viste ingen kryssreaksjoner med hemoglobin fra storfe, svin, kanin, hest og sau.

f) Reproduserbarhet:

Ved testing av to kommersielle prøver med okkulte blodkonsentrasjoner på 3,35 og 26,67 ng/ml i 25 replikater, er koeffisienten variasjoner resultatene var henholdsvis 8,5 % og 11,4 %.

g) Diagnostisk betydning

Som diskutert nedenfor (se Metodens begrensninger), er det mange årsaker til tilstedeværelsen av blod i avføring, og legen bør bekrefte resultatene av denne testen med andre kliniske metoder, for eksempel koloskopi.

Ved testing av 54 fekale prøver ble det bestemt at resultater under 100 ng/ml skulle tolkes som negative, fra 100 til 200 ng/ml som borderline og over 200 ng/ml som positive. Men hvis andre symptomer er tilstede, er ytterligere undersøkelse nødvendig, selv om den påviste konsentrasjonen er under 100 ng/ml.

Metodens begrensninger

1. Testen er utformet for å kvantifisere humant blod (hemoglobin) i avføring.

2. Blod i avføringen kan skyldes flere andre årsaker enn tarmkreft, som for eksempel hemoroider, blod i urinen eller mageirritasjon. Blødning fra den øvre fordøyelseskanalen (f.eks. i tilfelle av magesår eller duodenalsår) kan ikke påvises konsekvent på grunn av fordøyelsen av proteiner og vanskeligheten med antistoffgjenkjenning av hemoglobinantigenet etter proteolyse.

3. Ikke all intestinal blødning kan være forårsaket av forstadier til kreft eller kreftpolypper.

4. Som med enhver diagnostisk prosedyre, må legen bekrefte funnene ved å bruke denne testen med andre kliniske metoder, for eksempel bariumklyster, sigmoidoskopi eller koloskopi.

5. Negative resultater utelukker ikke blødning, siden blødningen kanskje ikke er konstant.

6. Kolorektale polypper på et veldig tidlig stadium av sykdommen kan ikke blø. Av denne grunn, for å være på den sikre siden, anbefales det å sjekke personer over 45 år med jevne mellomrom (en gang i året).

7. Testen er kun beregnet for lesing på "Easy Reader"-enheten. Testen er ikke ment å leses visuelt.

8. Hvis avlesningstiden (10 minutter) ikke overholdes, kan falske resultater observeres.

9. Som det er observert i andre analysemetoder, er det en viss variasjon i måleresultatene. For kliniske data anbefales det derfor å legge inn en variasjonskoeffisient på +/- 25 % i forhold til det oppnådde resultatet.

Immunokromatografisk test for å oppdage hemoglobin i avføring (okkult blod)

Hensikt

"RØDT okkult blod"-testen er beregnet på in vitro ett-trinns, rask kvalitativ påvisning av hemoglobin (okkult blod) i avføring.

kort informasjon

Fekal okkult blodprøve brukes til å identifisere ulike typer patologi i den nedre mage-tarmkanalen, preget av blødning (tykktarmspolypper, tykktarmskreft, Crohns sykdom, ulcerøs kolitt). Karene på overflaten av en kolorektal polypp eller ondartet neoplasma er ofte skjøre og lett skadet av passasje av avføring. I dette tilfellet frigjøres en liten mengde blod i avføringen, som sjelden er merkbar for øyet.

"RØDT okkult blod"-testen viser høy sensitivitet og spesifisitet når det gjelder å oppdage blødninger i nivå med tykktarm og endetarm, samtidig som den er ufølsom for skjulte blødninger i øvre mage-tarmkanal, hvor proteindelen av hemoglobin fordøyes.

Prinsippet for metoden

Bestemmelsen er basert på prinsippet om immunokromatografisk analyse. Prøven av flytende biologisk materiale som analyseres absorberes av den absorberende delen av teststrimmelen. Hvis det er hemoglobin i prøven, reagerer det med spesifikke monoklonale antistoffer mot hemoglobin, merket med fargede partikler, påført startsonen, og fortsetter å bevege seg med væskestrømmen. I teststrimmelens analytiske sone skjer interaksjon med spesifikke monoklonale antistoffer immobilisert på overflaten av membranen, og danner et farget immunkompleks.

I kontrollsonen til teststrimmelen dannes et spesifikt farget immunkompleks uavhengig av tilstedeværelsen av hemoglobin i det testede biologiske materialet.

Hvis hemoglobin er tilstede i den analyserte prøven, dannes det to parallelle fargede linjer på teststrimmelen (rød analytisk, betegnet med bokstaven T, og grønn kontroll, betegnet med bokstaven C), som indikerer et positivt testresultat. Hvis det ikke er hemoglobin i den analyserte prøven, dannes en grønn kontrolllinje (C) på teststrimmelen, som indikerer et negativt testresultat.

Sammensatt

Ett sett med RØDE okkulte blodprøver inkluderer:

• immunokromatografiske teststrimler "RØDT skjult blod" i hvite plastkassetter - 5, 10 eller 20 stk.;
• reagensrør med en dråpehette og en stang for å samle en avføringsprøve, som inneholder en buffer for oppløsning av prøven - henholdsvis 5, 10 eller 20 stk.;
• selvklebende etiketter for merking av reagensrør av brukeren - henholdsvis 5, 10 eller 20 stk;
• bruksanvisning for "RED occult blood"-testen – 1 stk.

Kassetter med teststrimler er pakket i individuell vakuumemballasje laget av aluminiumsfolie som inneholder poser med silikagel.

Testsettet "RØDT okkult blod" er pakket i en pappeske.

Nødvendig utstyr og materialer er ikke inkludert i settet

• beholdere for innsamling av avføringsprøver;
• engangshansker av gummi eller plast;
• klokke eller tidtaker.

Analytiske egenskaper

• Sensitiviteten til RØD okkult blodprøve er >99 %.
• Spesifisiteten til den røde okkult blodprøven er >99 %.
• Analysetid: 10 minutter.

"RØDT okkult blod"-testen er spesifikk for humant hemoglobin og kryssreagerer ikke med hemoglobin og myoglobin av animalsk opprinnelse som kommer fra mat.

Hver RØD okkult blodprøve er utformet for å bestemme tilstedeværelsen av hemoglobin (okkult blod) i en persons avføring.

Forebyggende tiltak

"RØDT okkult blod"-testen er kun beregnet på in vitro diagnostisk bruk.

Alle komponentene i den røde okkulte blodprøven er ikke-toksiske i konsentrasjonene som brukes.

RØDE okkulte blodprøver skal ikke brukes etter utløpsdatoen.

Når du utfører bestemmelsen, bør du bruke engangshansker av gummi eller plast, pga prøvene av biologisk materiale som undersøkes bør anses som potensielt infiserte.

Brukte tester og gjenværende biologisk materiale skal legges i en spesialbeholder for sanitæravfall.

Analyserte prøver

Nysamlet biologisk materiale (avføring) som ikke inneholder konserveringsmidler.

Avføringsprøver skal samles i en ren beholder.

Før bestemmelse kan avføringsprøver oppbevares ved en temperatur på 2–4°C i ikke mer enn 2 dager hvis lengre (opptil 1 år) lagring er nødvendig, ved en temperatur på –20°C og lavere.

Før analyse må avføringsprøver tines fullstendig og bringes til romtemperatur.

Gjentatt frysing og tining av prøver er uakseptabelt.

Prøveforberedelse

1. Fjern dråpehetten fra reagensrøret og bruk stangen på hetten til å fjerne en liten mengde av prøven som skal analyseres. For å gjøre dette, sett stangen inn i prøven 3 ganger, og samle ca. 100 mg avføring (fig. 1-1). Hvis prøven er flytende, pipetteres 100 µl.

2. Sett stangen med prøven inn i reagensrøret med buffer for å løse opp prøven og skru dråpehetten godt fast (fig. 1-2).

3. Rist røret flere ganger for å lette oppløsningen av prøven (Figur 2-1).

Gjennomføring av analyser

De analyserte avføringsprøvene og RØDE okkulte blodprøver må bringes til romtemperatur (15–25°C) før analyse.

4. Rist reagensrøret som inneholder prøveløsningen (Figur 2-1). Kutt av eller brekk av tuppen på dråpehetten.

5. Umiddelbart før du starter analysen, åpne pakken med "RED occult blood"-testen og riv den langs spalten. Ta ut teststrimmelkassetten og plasser den på en flat, horisontal overflate.

6. Plasser 4 dråper (ca. 100 µl) av væskeprøven i det runde vinduet på kassetten, merket med bokstaven S, og unngå inkludering av faste partikler av prøven sammen med væsken (fig. 2-2). For hver prøve eller kontroll må det brukes et eget rør med prøverekonstitueringsbuffer og en separat RØD okkult blodprøve.

7. Etter 10 minutter, evaluer resultatet av reaksjonen visuelt.

Tolking av resultater

Påvisningen av én grønn kontrolllinje (C) i testvinduet på kassetten indikerer et negativt resultat av analysen, dvs. indikerer fravær av hemoglobin i den analyserte avføringsprøven (fig. 3-1).

Påvisningen av to parallelle fargede linjer (C og T) i testvinduet på kassetten indikerer et positivt resultat av analysen, dvs. indikerer tilstedeværelsen av hemoglobin i den analyserte avføringsprøven (fig. 3-2). Intensiteten til den røde analytiske linjen (T) i testvinduet på kassetten kan variere avhengig av konsentrasjonen av hemoglobin i prøven.

I tilfeller hvor det ikke dannes en farget linje i testvinduet til kassetten eller kun en rød analytisk linje (T) dannes, er analyseresultatet ugyldig (fig. 3-3). I dette tilfellet bør analysen gjentas med en annen "RØDT okkult blod"-test.

For store mengder avføringsprøve kan føre til at det vises uklare, mørke linjer i testvinduet på kassetten, som ikke har noen diagnostisk verdi. I dette tilfellet bør du tilsette en større mengde løsemiddel til avføringsprøven og gjenta analysen med en annen RØD okkult blodprøve.

Avføringsprøver tatt fra pasienter med blødende hemorroider, forstoppelse eller under menstruasjon kan vise falske positive resultater.

Resultatene oppnådd ved bruk av RØD okkult blodprøve er foreløpige. For å bekrefte dem er ytterligere studier av avføringsprøver ved bruk av alternative metoder nødvendig.

Lagrings- og driftsforhold

"RØDT okkult blod"-tester må oppbevares ved en temperatur på 2 til 25 ° C i produsentens emballasje på et tørt sted gjennom hele holdbarheten. Frysing av RØDE okkulte blodprøver er ikke tillatt.

Holdbarheten til «RED occult blood»-testene er 24 måneder. fra produksjonsdatoen.

Etter åpning av pakken, bør de RØDE okkulte blodprøvene brukes innen 2 timer når de oppbevares på et tørt sted ved romtemperatur.

For å oppnå pålitelige resultater, er det nødvendig å følge bruksanvisningen for "RED occult blood"-testen nøye.