Определение количества тромбоцитов с помощью гематологического анализатора. Анализатор агрегации тромбоцитов, агрегация тромбоцитов норма

Новый высокочувствительный метод исследования агрегации - измерение среднего радиуса - позволяет регистрировать кинетику образования малых агрегатов в реальном времени
Чувствительность при измерении спонтанной агрегации выше, чем у прибора Бреддина
Два независимых канала; в каждом канале светопропускание и средний радиус агрегатов измеряются одновременно
Результаты измерений могут регистрироваться с помощью встроенного дисплея или компьютера

Области применения:

Диагностика состояния тромбоцитарного звена гемостаза
Диагностика врожденных и приобретенных нарушений гемостаза
Оценка эффективности терапии
Скрининг новых лекарственных препаратов
Оценка жизнеспособности тромбоцитарной массы при переливании крови
Токсикология

Анализаторы агрегации НПФ БИОЛА предназначены для исследования агрегации тромбоцитов и других клеток, определения концентрации клеток в суспензии, а также оценки их формы. Агрегация регистрируется как традиционным турбидометрическим методом, так и недавно разработанным методом, основанным на оценке среднего размера агрегатов в реальном времени.

Турбидометрический метод, предложенный Борном и О"Брайеном, является в настоящее время наиболее распространенным при исследовании агрегации тромбоцитов. Он основан на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы. Это позволяет исследовать не только агрегацию, но и изменение формы тромбоцитов. С другой стороны, изменение формы может маскировать начальный этап агрегации. Кроме того, показано, что образование малых агрегатов (менее 100 тромбоцитов) может не сказываться на светопропускании суспензии. В 1989 году З.А. Габбасовым и соавторами был предложен новый метод исследования агрегации тромбоцитов.

Метод основан на анализе флуктуаций светопропускания (ФСП-метод), вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале. Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему размеру агрегатов, и используется для исследования кинетики агрегации. Метод отличается высокой чувствительностью, что делает его пригодным для исследования спонтанной агрегации, агрегации под действием низких концентраций индукторов, а также агрегации субклеточных частиц и макромолекул. Развитие этого методического подхода позволило также измерять концентрацию частиц в перемешиваемой суспензии.

В комплекте с анализаторами агрегации поставляется программное обеспечение. Программа выполняется на IBM-совместимом компьютере в среде Windows. Она отображает кривые агрегации в ходе эксперимента, сохраняет их вместе с временными метками и сопроводительной информацией на диске, и позволяет в дальнейшем их просматривать и обрабатывать.

Тромбоциты, пластинчатые кровяные клетки, которые не имеют цвета и отвечают за свертываемость крови, и защиту организма от кровотечений во время повреждения тканей. При проведении диагностики каждый параметр исследуется в лабораторных условиях. В результате анализа крови указываются количественные и качественные показатели клеток, агрегация тромбоцитов. На основании полученных данных врач может сделать вывод о состоянии здоровья пациента.

Свертываемость крови

Известная всем ситуация, когда кровь сворачивается и прекращается кровотечение, имеет свои нормы по скорости свертывания. Но что такое агрегация тромбоцитов? Это способность пластинчатых клеток объединяться в одно целое, образуя тромб, который закрывает собой поврежденную стенку сосудов. При повреждении ткани отдельные тромбоциты по кровотоку движутся к месту ранения. Благодаря своим особенностям клетки способны склеиваться между собой (адгезия) и прикрепляться к сосуду. Сначала пластинчатые клетки объединяются в сгусток (тромб), он прикрывает рану и на коже появляется «корочка». Так происходит адгезия и агрегация тромбоцитов у здорового человека.

Если агрегационный показатель снижен, пластинчатые клетки крови не склеиваются и не могут препятствовать кровотечению. Даже незначительное повреждение тканей может привести к большой кровопотере. Серьезные травмы напрямую угрожают жизни. Пока адгезивный процесс не нормализуется, врачи рекомендуют с осторожностью относиться к любым колюще-режущим предметам, избегать любых травм. Частые кровотечения могут вызвать анемию и истощение организма.

Если у пластинчатых клеток крови наблюдается повышенное слипание между собой, возникает угроза образования тромбов внутри кровеносных сосудов, что может привести к закупорке вен. При этом результат анализа крови покажет, что агрегация тромбоцитов повышена. Этот состояние известно как сгущение крови или гиперагрегация тромбоцитов. Пожилой возраст, а также избыточный вес пациента увеличивают возможность образования тромбов. Высокий показатель увеличивает риск инсульта, инфаркта, болезней сердца.

Исследование крови

Агрегация тромбоцитов и что это такое наглядно отражается в процессе проведения теста. Норма и нарушения показателя также сразу заметны. В лабораторных условиях для свертывания крови используются медицинские реагенты, которые ускоряют процесс соединения тромбоцитов.

На основании реакции поводятся расчеты и можно сделать вывод о состоянии здоровья пациента.

На достоверность результатов анализа влияет не только лаборант и анализатор агрегации тромбоцитов, но и сам пациент. Прежде чем сдать анализ крови, к нему необходимо подготовиться. Тест проводится натощак (чаще всего с 7 до 10 утра) в частной лаборатории и государственной поликлинике. В течение нескольких дней до исследования необходимо придерживается диеты, рекомендованной врачом.

За 24-48 часов до того, как будет сдаваться анализ, исключают любые стимулирующие продукты (кофе, крепкий черный чай, энергетические напитки, алкоголь и пр.)
Прекращается прием лекарственных препаратов (после консультации с врачом), которые могут повлиять на агрегацию
В течение 12 часов до теста нельзя употреблять пищу, разрешается пить только воду
Чрезмерный стресс и волнение перед сдачей крови может исказить результаты
Не рекомендуется сдавать кровь при наличии воспаления, простуды или во время менструации

В лабораториях, оснащенных современным оборудованием, многие анализы проводятся автоматически, и результаты считает компьютер. Специальный анализатор агрегации тромбоцитов ведет наблюдение и подсчет клеток. Этот прибор не только облегчает труд сотрудников лаборатории, но и повышает качество исследований. Но и с применением современных технологий в редких случаях бывают ошибки, и результат исследования может быть признан недействительным. Выделяют следующие виды агрегации:

Спонтанная агрегация тромбоцитов. Для определения не используются какие-либо реагенты, образец просто нагревается до определенной температуры.
Индуцированная агрегация тромбоцитов. Обработка образца проводится с помощью вещества – индуктора.
Повышенная. Грозит риском образования тромбов, проявляется физически в виде отеков и других проявлений.
Пониженная. Может свидетельствовать о заболеваниях крови, проявляется физически появлением кровоподтеков, синяков и пр.
Умеренная. Встречается у беременных женщин.

Установленные нормы

Слишком активный процесс слипания пластинчатых клеток крови получил название гиперагрегация тромбоцитов. Определить отклонение можно с помощью анализа венозной крови. Для проведения исследования клиники используют различные реагенты: аденозиндифосфат (АДФ агрегация), арахидоновая кислота, серотонин, ристомицин и другие. В результате анализа крови на агрегацию тромбоцитов в различных медицинских лабораториях норма будет иметь разное значение.

Агрегация тромбоцитов с АДФ имеет показатель в норме 30,7–77,7%
Норма для исследования с ристомицином составляет 30–60%
Агрегация тромбоцитов с адреналином 35–92,5%
Агрегация тромбоцитов с коллагеном в норме 46,4–93,1%

Индукторы для агрегации тромбоцитов также отличаются по концентрации вещества. Обычно в результате анализа указана норма, принятая для конкретного реагента с учетом его состава и производителя. Поэтому врачи не рекомендуют делиться результатами своих анализов с другими пациентами. Различные процентные значения, полученные разными методами, на самом деле могут отражать одну и ту же величину. Анализ крови во время беременности может показывать отклонение от нормы. В большинстве случаев такая ситуация является нормальной, и показатель нормализуется после родов.

Повышенный показатель

Если исследование агрегации тромбоцитов определило высокий уровень исследуемого параметра, следует немедленно обратиться к врачу и начать лечение. Незначительный на первый взгляд показатель, который отражает прилипание пластинчатых клеток друг к другу, на самом деле очень важен. Высокая агрегация у тромбоцитов не должна оставаться без внимания. Согласно статистике от тромбоза погибает каждый 250-й пациент.

Для лечения используются ингибиторы агрегации тромбоцитов, медицинские препараты, разжижающие кровь. После дополнительного обследования пациенту назначаются антикоагулянты, или новокаин и обезболивающие препараты.

Вещества, разжижающие кровь, содержатся не только в лекарственных препаратах. Употребление некоторых продуктов питания (имбирь, чеснок, морепродукты, цитрусовые и пр.) способствуют нормализации показателя. По усмотрению врача пациенту может быть назначена лечебная диета. Хорошо зарекомендовали себя отвары донника и корня пиона.

Пониженный показатель

Нормализация показателя проводится при помощи медикаментозного воздействия и лечебной диеты. Существуют действенные народные средства и гомеопатические препараты, однако любое средство следует принимать только после консультации с врачом. Низкий уровень агрегации чаще всего вызывается бактериальными или вирусными инфекциями. Иногда, это недостаток питания, вызванный голодом или несбалансированным рационом.

Лечение медикаментозными средствами назначается при значительном отклонении от принятой нормы. В некоторых случаях пациента госпитализируют. Аптеки располагают выбором препаратов («Дицинон», «Иммуноглобулин», «Преднизолон» и пр.) в широком ценовом диапазоне.

Для проверки эффективности лечения анализ на агрегацию тромбоцитов проводится каждые несколько дней или недель по указанию врача. Показатель измеряется в динамике, несколько раз за курс лечения. Пациенту запрещается употреблять продукты и вещества, препятствующие агрегации тромбоцитов. После того, как достигнута норма показателя, лечение прекращают по указанию врача.

В зависимости от результатов анализа, если у пациента обнаружена гиперагрегация тромбоцитов или наоборот, наблюдается снижение агрегации тромбоцитов, следует принять профилактические меры по профилактике здоровья. Самый простой способ нормализации показателя лечебное питание. В любом возрасте необходимо придерживаться полноценного и сбалансированного питания.

Вконтакте

Артикул: АГ02003/LA 230

Основные особенности:

Новый высокочувствительный метод исследования агрегации - измерение среднего радиуса - позволяет регистрировать кинетику образования малых агрегатов в реальном времени
Чувствительность при измерении спонтанной агрегации выше, чем у прибора Бреддина
Два независимых канала; в каждом канале светопропускание и средний радиус агрегатов измеряются одновременно
Результаты измерений могут регистрироваться с помощью встроенного дисплея или компьютера

Области применения:

Диагностика состояния тромбоцитарного звена гемостаза
Диагностика врожденных и приобретенных нарушений гемостаза
Оценка эффективности терапии
Скрининг новых лекарственных препаратов
Оценка жизнеспособности тромбоцитарной массы при переливании крови
Токсикология

Турбидометрический метод, предложенный Борном и О\"Брайеном, является в настоящее время наиболее распространенным при исследовании агрегации тромбоцитов. Он основан на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы. Это позволяет исследовать не только агрегацию, но и изменение формы тромбоцитов. С другой стороны, изменение формы может маскировать начальный этап агрегации. Кроме того, показано, что образование малых агрегатов (менее 100 тромбоцитов) может не сказываться на светопропускании суспензии. В 1989 году З.А. Габбасовым и соавторами был предложен новый метод исследования агрегации тромбоцитов.

Данный вид методов дает возможность дать наиболее полную оценку агрегационной способности тромбоцитов, поскольку в основе лежит количественная фотометрическая или спектрофотометрическая регистрация процесса агрегации при помощи агрегографов различной конструкции. Такие приборы осуществляют графическую регистрацию изменения оптической плотности тромбоцитарной плазмы при перемешивании ее со стимуляторами агрегации (рис. 16) . Образование тромбоцитарных агрегатов ведет к увеличению светопропускающей способности тромбоцитарной плазмы.

Рисунок 16. Прибор для автоматизированного исследования агрегации тромбоцитов.

Методы и лежащие в их основе принципы.

а) турбидиметрический метод Борна основан на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы, что позволяет исследовать не только агрегацию, но и изменение формы тромбоцитов. Однако изменение формы может маскировать начальный этап агрегации, а образование малых агрегатов (50-100 тромбоцитов) может вообще не сказываться на светопропускании суспензии.

б) ФСП-метод исследования агрегации тромбоцитов основан на анализе флуктуаций светпропускания (ФСП), вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале. Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему размеру агрегатов и используется для исследования кинетики агрегации. Метод отличается высокой чувствительностью , что делает его пригодным для исследования спонтанной агрегации и агрегации под действием низких концентраций индукторов. Развитие этого метода позволило также измерять концентрацию частиц в перемешиваемой суспензии.

Примером является использование двухканального лазерного анализатора агрегации тромбоцитов /счетчика LA220/230 (НФП БИОЛА, Россия). Данный прибор отличается от обычного турбидиметрического агрегометра, главным образом, наличием фильтра высоких частот и двухполупериодным выпрямителем, что позволяет использовать как стандартный турбидиметрический метод, так и ФСП-метод исследования агрегации тромбоцитов. Прибор выпускается в нескольких исполнениях: 220 LA выполняет измерение агрегации вышеописанными методами; 230LA имеет дополнительно функцию определения концентрации тромбоцитов (также ФСП-методом). Возможность определения концентрации тромбоцитов непосредственно при исследовании их агрегационной способности создает ряд преимуществ: с одной стороны, предоставляет полную диагностическую информацию, с другой – дает возможность определять агрегацию при стандартной концентрации тромбоцитов в плазме (200 тыс/мкл).Модель 230 LA-2 наряду с вышеперечисленными возможностями позволяет определять фактор Виллебранда; метод основан на исследовании агглютинации фиксированных тромбоцитов.

Агрегометры БИОЛА 230 LA подключаются к компьютеру. Программное обеспечение AGGR 2.41 удобно в работе и легко осваивается. Агрегограммы хранятся в памяти компьютера вместе с данными о пациенте. Это позволяет проводить анализ изменений показателей агрегации как у пациентов, находящихся на лечении в стационаре, так и у амбулаторных больных.

Результаты автоматизированного измерения агрегации тромбоцитов представлены на рисунке 17.

Рисунок 17. Результаты автоматизированного определения агрегации тромбоцитов (пояснения в тексте).

Полученные агрегатограммы анализируют по нескольким количественным параметрам : временя начала агрегации после добавления соответствующего стимулятора, амплитуда агрегатограммы на 2-й и 6-й минутах, общая площадь агрегатограммы и др. При использовании в качестве стимулятора агрегации тромбоцитов коллагена, тромбина, ристомицина регистрируют одну большую волну агрегации, а при добавлении к тромбоцитарной плазме малых доз АДФ – двухволновую агрегатограмму (рис.17а ).

На нормальных агрегатограммах, полученных при использовании в качестве стимулятора малых доз АДФ, 1-я волна регистрируемой кривой отражает начальную агрегацию тромбоцитов, обусловленную введением извне стимулятора этого процесса. 2-я волна связана с реакцией высвобождения из тромбоцитов собственных биологически активных веществ (адреналина, АДФ, тромбоксана А 2 и др.), которые усиливают начавшуюся агрегацию кровяных пластинок.

Большое значение в последние годы придают существованию тромбоцитопатий с нарушением реакции высвобождения , к которым, по-видимому, относится большая часть встречающихся во врачебной практике «необъяснимых» форм кровоточивости. При таких патологиях агрегатограмма демострирует отсутствие 2-й волны агрегации и раннюю дезагрегацию тромбоцитов (рис. 17б ).

При тромбастении Гланцмана в мембранах кровяных палстинок отсутствуют специфические рецепторы (гликопротеинов IIb и IIIa), необходимые для взаимодействия этих клеток со стимуляторами агрегации и фибриногеном. При этом резко нарушен процесс агрегации тромбоцитов под влиянием АДФ, адреналина и коллагена (рис. 17в ).

Охарактеризовать морфологические особенности нейтрофилов и их предшественников.

В настоящее время все шире используются определение количества тромбоцитов и их распределение по величине (гистограмма) с помощью автоматических счетчиков крови, или гематологических анализаторов. Эти аппараты точны, и позволяют проводить экспресс-диагностику (определения выполняются за 1 мин). Подсчет тромбоцитов проводят согласно инструкции к аппарату. Бюджетные модели гематологических анализаторов определяют только количество тромбоцитов, а более совершенные приборы содержат полный анализ тромбоцитарного звена, и позволяют говорить о морфологии тромбоцитов. Развернутый анализ тромбоцитов на анализаторе позволяет определить такие показатели:

· РLТ - количество тромбоцитов. Норма от 150-400*10 9 /л; При выходе за эти пределы необходима микроскопия мазка.

· MPV - средний объем тромбоцитов. «Молодые» тромбоциты имеют больший объем. MPV увеличивается с возрастом. Норма: 8-10 фл

· PDW ширина распределения тромбоцитов по объему отражает степень анизоцитоза тромбоцитов. Норма = 14-16%.

· РСТ – тромбокрит, доля объема цельной крови, занимаемая тромбоцитами (аналогичен гематокриту). Норма = 0,15-0,40%.

Также гематологический анализатор строит график распределения тромбоцитов по размеру:

Рис. 2. Распределение тромбоцитов по объему.

Количество тромбоцитов в крови здорового человека колеблется в пределах 150-400 ×10 9 /л.

Снижение числа тромбоцитов (<150 ×10 9 /л) – тромбоцитопения – может наблюдаться при следующих патологических и физиологических состояниях:

· острый ДВС-синдром;

· острый лейкоз и миелодиспластические синдромы;

· гипо- и апластические анемии;

· нарушение образования в организме тромбоцитопоэтина;

· химиотерапия и лучевая терапия;

· тромботическая тромбоцитопеническая пурпура и гемолитико-уремический синдром;

· спленомегалия и гепатолиенальный синдром;

· гепарин-индуцированная тромбоцитопения;

· эклампсия и преэклампсия;

· экстракорпоральное кровообращение;

· гемодиализ у больных с хронической почечной недостаточностью, гемосорбция;

· интенсивная трансфузионная терапия;

· пароксизмальная ночная гемоглобинурия;

· иммунные формы патологии (СКВ и др. коллагенозы, АФС, иммунная тромбоцитопеническая пурпура);

Повышение числа тромбоцитов (>400 ×10 9 /л) – тромбоцтоз – наблюдается в следующих случаях:

· мегакариоцитарные и миелолейкозы,

· эритремия;

· вторичный, реактивный тромбоцитоз в случае спленэктомии (через 1-3 недели),

· внутриполостные кровоизлияния после оперативных вмешательств,

· спустя 7-10 дней от начала подострого токсико-инфекционного ДВС-синдрома,

· после перенесенного острого кровотечения,

· при злокачественных новообразованиях (предвестник опухоли легкого, поджелудочной железы)

· других причинах хронического ДВС-синдома.

Нормальное количество тромбоцитов может не обеспечивать полноценный гемостаз при нарушении функциональных свойств тромбоцитов - тромбоцитопатиях. Поэтому также исследуют функциональные свойства тромбоцитов способность к спонтанной и индуцированной агрегации различными индукторами (агонистами) агрегации: АДФ, коллагеном, ристоцетином и т. д. Для исследования функциональных свойств тромбоцитов используют плазму богатую тромбоцитами.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ОБСУЖДЕНИЯ

1. Внутренняя среда организма. Эритроциты: строение, функции.

2. Эритропоэз: стадии и характеристики предшественников.

3. Регуляция эритропоэза: витамины и микроэлементы.

4. Регуляция эритропоэза: эритропоэтины и микроокружение.

5. Эритремия: этиология, патогенез, симптомы, принципы лечения.

6. Анемия: определение, симптомы, терапия.

7. Классификация анемий по цветовому показателю.

8. Классификация анемий по степени тяжести и по регенераторным способностям.

9. Этиологическая и патогенетическая классификация анемий.

10. Тромбоцитопоэз: стадии и характеристики предшественников.

11. Методы подсчета количества тромбоцитов: подсчет в камере Горяева.

12. Методы подсчета количества тромбоцитов: в тонком мазке крови.

13. Методы подсчета количества тромбоцитов: на гематологическом анализаторе. Тромбоцитарные показатели.

14. Тромбоцитопения: определение, причины.

15. Тромбоцитоз: определение, причины. Тромбоцитопатии.