Группа крови аво расшифровка. Генетика группы крови и их полиморфизмы. Ошибки при определении групповой принадлежности

Система групп крови ABO - это основная система групп крови, которая используется при переливании крови у людей. Ассоциированные анти-А и анти-В-антитела (иммуноглобулины) , обычно относятся к типу IgM, которые, как правило, образуются в первые годы жизни в процессе сенситизации к веществам, которые находятся вокруг, в основном таких, как продукты питания, бактерии и вирусы. Система групп крови ABO также присутствует у некоторых животных, например, у обезьян (шимпанзе, бонобо и горилл).

История открытия

Считается, что система групп крови ABO, впервые была обнаружена австрийским ученым Карлом Ландштейнером (Karl Landsteiner), который определил и описал три различных типа крови в 1900 году. За свою работу он был удостоен Нобелевской премии по физиологии и медицине в 1930 году. Через недостаточно тесные связи между научными работниками того времени, значительно позже было установлено, что чешский серолог (врач, специализирующийся на изучении свойств сыворотки крови) Ян Янский (Jan Janský) впервые независимо от исследований К. Ландштейнера выделил 4 группы крови человека. Однако именно открытие Ландштейнера было воспринято научным миром того времени, тогда как исследования Я. Янского были относительно неизвестными. Однако на сегодня, именно классификация Я. Янского до сих пор применяется в России, Украине и государствах бывшего СССР. В США, Мосс опубликовал собственную, очень похожую работу в 1910 году.

* К. Ландштейнер описал А, B и O группы ;

* Альфред фон Декастелло (Alfred von Decastello) и Адриано Стурла (Adriano Sturli) обнаружили четвертую группу - АB, в 1902 году.

* Людвик Гиршфельд (Hirszfeld) и Э. фон Дунгерн (E. von Dungern) описали наследственность системы групп крови АВО в 1910-11 гг.

* В 1924 году Феликс Бернштайн (Felix Bernstein) исследовал и определил точные механизмы наследования групп крови на основе нескольких в одном .

* Уоткинс (Watkins) и Морган (Morgan), английские ученые обнаружили, что эпитопы ABO переносят специфические сахара - N-ацетилгалактозамин в случае группы А и галактозу в случае группы В.

* После публикации большого количества, связанных с этой информацией материалов, в 1988 году было определено, что все вещества ABH присоединяются к гликосфинголипидам. Так, группа во главе с Лайне (Laine) обнаружила, что связь 3 белков приводит к образованию длинной цепи полилактозоамина, содержащего большое количество веществ ABH. Позже, группа Ямамото подтвердила наличие большого количества гликозилтрансфераз, которые соответственно относятся к А, В и О эпитопам.

АВО антигены

Антиген H является важным предшественником антигенов системы групп крови АВО. Локус H находится на Он состоит из 3 экзонов, которые охватывают более 5 Кб геномной и кодирует деятельность фермента фукозилтрансферазы, отвечающего за производство антигена Н на эритроцитах. Антиген Н - это углеводная последовательность в которой углеводы, в основном связаны с белком (незначительная их часть соединенная с функциональной группой церамидов). Антиген состоит из цепочки β-D-галактозы, β-DN-ацетилглюкозамина, β-D-галактозы и 2-связанных между собой молекул, α-L-фукозы, которые соединяются с молекулами белка или церамида.

Аллель I A соответствует группе крови А, I B - группе крови В, а i - группе О. Аллели I A и I B являются доминантными по отношению к i.

Только люди с типом ii имеют группу крови О. Лица с типом I A I A или I A i имеют группу крови А, а лица с I B I B или I B i типом имеют группу крови В. В то время как люди с I A I B имеют оба , ведь доминантность между группами А и В - особая - называется , это означает, что родители, из А и В группами крови могут иметь детей с группой АВ. Кроме того у ребенка, супружеской пары, имеющей А и В группу крови может быть О тип, если оба родителя - за I B i, I A i. При цис-AB фенотипе у человека есть только один фермент, отвечающий за образование А и В антигенов. В результате этого красные кровяные клетки обычно не образуют А или В антигены на нормальном уровне, который характерен для групп А1 или В, что может помочь объяснить проблему возникновения генетически невозможной группы крови.

Распространение и эволюционная история

Распределение групп крови А, В, О и АВ в мире разное, и изменяется в соответствии с особенностями определенного населения. Есть также определенные различия по распространению групп крови внутри субпопуляций.

В Великобритании, распределение частоты типа крови среди населения, по-прежнему показывает некоторую корреляцию с распределением топонимов, воинственных вторжений и миграций викингов, данов, саксов, кельтов, норманнов которые привели к формированию определенных генетических особенностей среди населения.

Среди европеоидной расы известны шесть аллелей гена ABO, которые отвечают за группу крови:

A A101 (A1) A201 (A2)

B B101 (B1)

O O01 (O1) O02 (O1v) O03 (O2)

Кроме того много редких вариантов этих аллелей были найдены среди разных народов во всем мире. Некоторые эволюционные биологи предполагают, что аллель I A возникла раньше с О путем удаления одного , в результате сдвига рамки считывания, в то время как аллель I B появилась позже. Именно на этой теории основано вычисления числа людей в мире с каждой группой крови, которая согласуется с принятой моделью миграции населения и распространения различных групп крови в разных частях света.

Так, например, группа B очень распространена среди азиатского населения , тогда как среди населения Западной Европы, эта группа встречается довольно редко. Согласно другой теории, существуют четыре основных линии гена ABО, а при которых образовался тип О произошли в организме человека, как минимум трижды. Раньше появилась аллель A101, далее по хронологии - A201/O09, B101, O02 и O01. Длительное присутствие O аллелей объясняется результатом стабилизирующего отбора. Эти две приведенные теории противоречат распространенной ранее теории о том, что О группа крови возникла первой.

Распределение групп крови АВО и резус факторов по странам мира

Распределение групп крови АВО и резус факторов по странам мира (доля населения)
Страна	Кол-во населения
Австралия
Бразилия
Финляндия
Германия
Исландия
Ирландия
Нидерланды
Новая Зеландия

Группа крови B чаще встречается среди жителей Северной Индии и других стран Центральной Азии, при этом ее доля уменьшается, как при движении на Запад, так и при движении на Восток и количество жителей Испании, которые имеют группу крови В составляет всего 1%. Считается, что этой группы крови вообще не было среди населения американских индейцев и австралийских аборигенов до европейской колонизации.

Доля населения с группой крови А - самая большая среди европейского населения, особенно высок этот показатель у жителей Скандинавии и Центральной Европы, хотя часто эта группа крови встречается среди австралийских аборигенов и этнических групп черноногих индейцев, проживающих в штате Монтана (США).

Ассоциация с фактором фон Виллебранда

Антигены системы АВО также образуются в факторе , гликопротеине, который участвует в гемостазе (остановке кровотечения). Так, у людей, имеющих О группу крови, повышается риск возникновения внезапного кровотечения, ведь около 30% от общей генетической изменчивости плазмы фактора фон Виллебранда объясняется влиянием системы групп крови ABО, а у особей с группой крови О уровень фактора фон Виллебранда (и VIII фактора) в плазме крови - ниже, чем у людей, имеющих другие группы крови.

Кроме того, уровень ФВ в общем среди населения постепенно снижается, что объясняется распространенностью группы крови О с Cys1584 вариантом ФР ( аминокислоты в структуре ФВ) гена ADAMTS13 (кодирующего деятельность протеазы, расщепляющей ФВ). На 9 хромосоме она занимает то же локус (9q34), что и система групп крови АВО. Более высокий уровень фактора Виллебранда встречается среди людей, у которых впервые был ишемический инсульт (от свертывания крови). Результаты этого исследования показали, что дефицит ФВ был обусловлен не появлением полиморфизма ADAMTS13 , а группой крови человека.

Связь с заболеваниями

У людей имеющих группу крови О по сравнению с людьми, имеющими другие группы крови (A, AB, и B) риск возникновения плоско клеточной карциномы - ниже на 14%, а базалиомы - ниже на 4%. Кроме того, эту группу крови связывают с низкой вероятностью возникновения рака поджелудочной железы. В-антигены ассоциируют с повышенным риском рака яичников. Рак желудка - наиболее характерен для лиц с группой крови А, а реже встречается среди населения с группой крови О.

Подгруппы системы групп крови АВО

А1 и А2

Группа крови А содержит около двадцати подгрупп, из которых наиболее распространенными являются А1 и А2 (более 99%). A1 составляет около 80% всех случаев группы крови А. Эти две подгруппы являются взаимозаменяемыми, если говорить о переливании крови, однако очень редко бывают случаи, когда при переливании различных подтипов крови возникают определенные сложности.

Бомбейский фенотип

У людей, имеющих редкий бомбейский фенотип (HH) красные кровяные клетки не производят антиген Н. Поскольку антиген H выполняет функции предшественника для образования А и В антигенов, то его отсутствие означает, что люди не имеют ни А ни В антигенов (явление аналогичное группе крови O). Однако, в отличие от группы O, антиген H отсутствует, т.е. в организме человека образовываются изоантитела к антигену H, а также к А и В антигенам. Если этим людям переливают кровь группы О, то анти-Н антитела связываются с антигеном H на эритроцитах донорской крови и уничтожают собственные эритроциты в процессе комплемент-опосредованного лизиса. Именно поэтому, людям с бомбейским фенотипом можно переливать кровь только от других hh.

Обозначение в Европе и странах бывшего СССР.

В некоторых странах Европы, "O" в системе групп крови АВО заменена на "0" (ноль), что означает отсутствие А или В антигена. В странах бывшего СССР для обозначения групп крови используют римскую нумерологию, а не буквы. Это оригинальная классификация групп крови Янского , согласно которой есть четыре группы крови I, II, III, IV , с использованием системы групп крови АВО эти цифры означают соответственно O, A, B, и AB. Обозначать группы крови буквами А и В впервые предложил Людвик Гиршфельд (Ludwik Hirszfeld)

Примеры метода тестирования АВО и резус-D

При использовании этого метода для исследования берутся три капли крови, которые помещаются на предметное стекло вместе с жидкими реагентами. Процесс агглютинации указывает на наличие или отсутствие антигенов группы крови в исследуемом материале.

Создание универсальной крови из всех типов крови и искусственной крови

В апреле 2007 год а , международная команда исследователей опубликовала в журнале Nature Biotechnology недорогой и эффективный способ преобразования групп крови A, B и AB в группу крови О. Этот процесс осуществляется с помощью ферментов гликозидазы, полученных с конкретной бактерии, которые позволяют выделить антигены групп крови из красных кровяных клеток.

Удаление антигенов А и В пока не решает проблемы антигенов резус-фактора, содержащихся в клетках крови. Перед использованием этого метода нужно проводить глубокие исследования и эксперименты с участием большого количества людей. Другим подходом к решению проблем антигенов крови является создание искусственной крови, которую можно будет использовать в качестве заменителя в чрезвычайных ситуациях.

Гипотезы

Есть множество популярных гипотез, связанных с системой групп крови АВО. Они возникли сразу после обнаружения системы групп крови АВО и их можно найти в разных культурах по всему миру. Например, на протяжении 1930-х годов в Японии и некоторых других частях мира стали популярными теории, объединяющие группы крови и тип личности.

Популярность книги Питера д"Адамо (Peter J. D"Adamo), «Ешьте то, что необходимо для вашей крови» и его концепции 4 группы - 4 пути к здоровью, указывает на то, что похожие теории и на сегодня остаются популярными. Согласно книге этого автора можно определить оптимальный рацион, основываясь на системе групп крови АВО (диета по группам крови).

Другой интересной догадкой является то, что наличие группы крови А вызывает тяжелое похмелье, группу O связывают с прекрасными зубами, а у людей с группой A2 - самый высокий уровень IQ. Однако никаких научных доказательств для этих утверждений на сегодня не существует.

Таким образом, диета (питание) по группам крови, ассоциация с характером, типом личности или связь с тяжестью похмелья вряд ли достаточно обоснованные и ассоциировать эти признаки или особенности с наличием той или иной группы крови не стоит.

Анализ на антитела по системе ABO – общеклиническое исследование, направленное на выявление в крови альфа- либо бета-изогемагглютининов – естественных антител класса IgG к отсутствующим антигенам A или В. Определяются в случае несовместимости матери и плода по антигенам системы ABO. Выявление антигрупповых антител в крови беременной необходимо для диагностики межгруппового конфликта и своевременного проведения лечебных мероприятий с целью предупреждения выкидыша, преждевременных родов, гемолитической болезни плода (новорожденного). Забор крови производится из вены. Метод исследования – реакция агглютинации. В норме (при низкой вероятности межгруппового конфликта) результат отрицательный. Готовность результатов анализа – один рабочий день.

Антитела по системе ABO или антигрупповые антитела – иммуноглобулины, которые вырабатываются при появлении в крови антигена, несовместимого в групповом отношении. Группа крови зависит от присутствующих на внешней стороне мембраны эритроцитов специальных белков – агглютиногенов. В медицинской практике определяются агглютиногены A, B, и D. У людей с I группой крови эритроциты без белков A и B, при II группе – с белками типа A, при III группе – с белками типа B, при IV группе – с белками типов A и B. Наличие или отсутствие агглютиногена D определяет положительный или отрицательный резус-фактор. Антигрупповые антитела производятся организмом, когда в кровоток попадают эритроциты с незнакомыми агглютиногенами A или B. Реакция этих антител приводит к разрушению чужеродных эритроцитов.

Производство антител по системе ABO возможно при переливаниях крови, при смешении крови плода и матери. Теоретически групповая несовместимость крови определяется в следующих случаях: если реципиент (мать) имеет I или III группу крови, а донор (плод) – II; если реципиент (мать) имеет I или II группу крови, а донор (плод) – III; если реципиент (мать) имеет I, II или III группу крови, а донор (плод) – IV. На практике выработка антигрупповых антител чаще всего отмечается у женщин с I группой крови, так как она не содержит агглютиногенов A и B и при этом является самой распространенной. Иммуноконфликт в период беременности способен привести к эритробластозу новорожденного, при переливаниях крови – к внутрисосудистому гемолизу эритроцитов. В группе риска находятся реципиенты после нескольких трансфузий, а также беременные, перенесшие переливания крови, искусственные и естественные прерывания, у которых имеются дети с гемолитической болезнью.

Для анализа крови на антитела по системе ABO забор крови производится из вены. Наиболее распространенным методом исследования является реакция агглютинации с использованием диффузного геля. Результаты находят применение в акушерстве и гинекологии при планировании и мониторинге беременности, а также в хирургии и реаниматологии при проведении гемотрансфузий.

Показания

Исследование крови на антитела по системе ABO показано женщинам в период беременности, если существует вероятность развития иммунологического группового конфликта. При определении риска учитывается сочетание групп крови родителей. Наличие антител в крови чаще всего определяется у беременных с I группой, если от отца ребенку передалась II, III или IV. Также вероятностно конфликтными являются сочетания II материнская + III или IV отцовская, III материнская + II или IV отцовская. При назначении анализа учитываются и другие факторы риска: нарушение проницаемости плаценты, травмы живота, инвазивные диагностические процедуры (например, амниоцентез). Во всех этих случаях возможно попадание эритроцитов плода в кровь матери с последующей выработкой антигрупповых антител. Клинически определить наличие иммунологического конфликта такого типа нельзя – женщина не чувствует никаких изменений. Но если не отслеживать титр антител, то существует риск развития у ребенка гемолитической болезни, которая проявляется отеками, желтушностью, анемией, увеличением селезенки и печени, в тяжелых случаях – отставаниями в развитии.

Еще одним показанием для исследования крови на антитела по системе ABO являются осложнения после гемотрансфузии. При групповом конфликте часто развивается острый внутрисосудистый гемолиз – реакция разрушения эритроцитов введенной крови. Он проявляется жжением в месте инфузии, лихорадкой, ознобом, болью в спине и в туловище, паническими приступами. При мониторинге беременности решение о проведении анализа принимается врачом с учетом совокупности факторов риска развития группового конфликта. Исследование крови на антитела по системе ABO не является скрининговым в отличие, например, от теста на антиэритроцитарные антитела. Это связано с тем, что иммунологический конфликт такого типа развивается нечасто, а гемолитическая болезнь протекает в легкой форме и в основном проявляется желтухой новорожденных

Подготовка к анализу и забор материала

Материалом для исследования на антитела по системе ABO является венозная кровь. Процедура забора, как правило, выполняется в утренние часы. Специальных требований к подготовке нет, желательно сдавать кровь спустя 4-6 часов после принятия пищи. Последние 30 минут необходимо провести в спокойной обстановке, без физического и эмоционального напряжения. Кровь берется из локтевой вены с помощью вакуумной системы без антикоагулянта или с активатором свертывания. Хранится при температуре от 2 до 8° C, в течение 2-3 часов доставляется в лабораторию.

Антитела по системе ABO определяются в крови методом агглютинации. Процедура исследования состоит из нескольких этапов. Сначала исследуемый образец добавляют в микропробирки с гелем фильтрации. Затем их на некоторое время устанавливают в инкубатор, после – в центрифугу. Эритроциты, которые соединены с антигрупповыми антителами, имеют больший размер и поэтому не проходят сквозь гель, а остаются на его поверхности. Свободные эритроциты в результате центрифугирования оседают на дно пробирки. По распределению эритроцитов оценивается наличие антител в образце. Подготовка результатов исследования занимает 1 день.

Нормальные значения

Антитела системы ABO представлены двумя типами – α и β. Первые вырабатываются в агглютиногену A, вторые – к агглютиногену B. Оба типа антител могут быть естественными и иммунными, то есть приобретенными в результате сенсибилизации. В норме титр естественных α-антител составляет от 1:8 до 1:256, титр естественных β-антител – от 1:8 до 1:128. Иммунные антигрупповые антитела в норме не обнаруживаются. Физиологическое снижение уровня естественных антител может определяться у детей и пожилых людей.

Повышение значений

Причиной повышения значений анализа на антитела по системе ABO является сенсибилизация организма, вызванная поступлением антигена, несовместимого по групповому признаку. В этих случаях повышаются титры естественных антигрупповых антител, иногда определяются иммунные антигрупповые антитела полной и неполной формы. Чаще всего отклонения такого характера диагностируются у беременных женщин с I группой крови, так как эритроциты не имеют агглютиногенов ни типа A, ни типа B, а частота встречаемости группы составляет 45%.

Снижение значений

Снижение значений анализа на антитела по системе ABO не имеет диагностического значения, его причинами могут стать некоторые патологии, например, агаммаглобулинемия, болезнь Ходжкина, хронический лимфоцитарный лейкоз. При отсутствии изоиммунизации специфическими факторами иммунные антигрупповые антитела отсутствуют, а титры естественных невысоки.

Лечение отклонений от нормы

Анализ крови на антитела по системе ABO имеет наибольшую прогностическую значимость при мониторинге беременностей у женщин с I группой крови. Его результаты позволяют выявить состояние сенсибилизации к групповым факторам и предупредить развитие иммунологического конфликта, приводящего к эритробластозу новорожденного. Если обнаружен повышенный титр естественных антигрупповых антител, определяются иммунные антитела, то необходимо обратиться за консультацией к ведущему беременность акушеру-гинекологу. Решение о необходимости и тактике терапии принимается специалистом индивидуально.

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

Систему группы крови АВО составляют два групповых агглютиногена - А и В и два соответствующих агглютинина в плазме - альфа (анти-А) и бета (анти-В). Различные сочетания этих антигенов и антител образуют четыре группы крови: группа 0(1) - оба антигена отсутствуют; группа А(II) - на эритроцитах присутствует только антиген А; группа В(III) - на эритроцитах присутствует только антиген В; группа АВ (IV) - на эритроцитах присутствуют антигены А и В.

Уникальность системы АВО состоит в том, что в плазме у неиммунизированных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену: у лиц группы 0(1) - антитела к А и В; у лиц группы А(II) - анти-В-антитела; у лиц группы В(III) - анти-А-антитела; у лиц группы АВ(IV) нет антител к антигенам системы АВО.

В последующем тексте анти-А- и анти-В-антитела будут обозначаться как анти-А и анти-В.

Определение группы крови АВО проводят путем идентификации специфических антигенов и антител (двойная или перекрестная реакция). Анти-А и анти-В выявляют в сыворотке крови с помощью стандартных эритроцитов А(II) и В(III). Наличие или отсутствие на эритроцитах антигенов А и В устанавливают при помощи моноклональных или поликлональных антител (стандартных гемагглютинирующих сывороток) соответствующей специфичности.

Определение группы крови проводят дважды: первичное исследование - в лечебном отделении (бригаде заготовки крови); подтверждающее исследование - в лабораторном отделении. Алгоритм проведения иммуногематологических лабораторных исследований при переливании крови представлен на рис. 18.1.

Результат определения группы крови записывается в правом верхнем углу лицевого листа истории болезни или в донорский журнал (карту)с указанием даты и за подписью врача, производившего определение.

На северо-западе России распределение групп крови системы АВО в популяции следующее: группа 0(I) - 35%; группа А(II) - 35-40%; группа В(III) - 15-20%; группа АВ (IV) - 5-10%.

Следует отметить, что существуют различные виды (слабые варианты) как антигена А (в большей степени), так и антигена В. Наиболее часто встречаются виды антигена А - А 1 и А 2 . Распространенность антигена А 1 у лиц групп А(II) и АВ(IV) составляет 80%, а антигена А 2 - около 20%. Образцы крови с А 2 могут содержать анти-А 1 -антитела , взаимодействующие со стандартными эритроцитами группы А(II). Наличие анти-А 1 выявляется при перекрестном определении групп крови и при проведении пробы на индивидуальную совместимость.

Для дифференцированного определения вариантов антигена А (А 1 и А 2) необходимо использовать специфические реагенты (фитогемагглютинины или моноклональные антитела анти-А 1 . Пациентам групп А 2 (II) и А 2 В(IV) нужно переливать эритроцитосодержащие гемокомпоненты, соответственно, групп А 2 (II) и А 2 В(IV). Также могут быть рекомендованы трансфузии отмытых эритроцитов: 0(I) - пациентам с группой крови А 2 (II); 0(I) и В(III) - пациентам с группой крови А 2 В(II).

Таблица 18.4. Результаты определения группы крови АВО
Результаты исследования						Групповая принадлежность исследуемой крови
эритроцитов с реагентом			сыворотки (плазмы) со стандартными эритроцитами
анти-АВ	анти-А	анти-В	0(I)	А(II)	В (III)
-	-	-	-	+	+	0(I)
+	+	-	-	-	+	А(II)
+	-	+	-	+	-	В(III)
+	+	+	-	-	-	АВ(IV)
Обозначения : + - наличие агглютинации, - - отсутствие агглютинации

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО

Группы крови определяют по стандартным сывороткам (простая реакция) и стандартным эритроцитам (двойная или перекрестная реакция).

Группу крови простой реакцией определяют обязательно двумя сериями стандартных изогемагглютинирующих сывороток.

• Ход определения [показать] .

  Определение группы крови производят при хорошем освещении и температуре от + 15 до + 25°С на планшетах. На левой стороне планшета надписывают 0(1), в середине - А(II), на правой стороне - В(III). В середине верхнего края планшета отмечают фамилию донора или номер исследуемой крови. Используют активные стандартные сыворотки трех групп (О, А, В) с титром не ниже 1:32, двух серий. Сыворотки располагают в специальных штативах в два ряда. Каждой сыворотке соответствует маркированная пипетка. Для дополнительного контроля используют сыворотку группы АВ(IV).

  На планшет наносят по одной - две капли стандартных сывороток в два ряда: сыворотку группы 0(1) - слева, сыворотку группы А(II) - в середину, сыворотку группы В(III) - справа.

  Капли крови из пальца или пробирки наносят пипеткой или стеклянной палочкой около каждой капли сыворотки и смешивают палочкой. Количество крови должно быть в 8-10 раз меньше, чем сыворотки. После смешивания тарелку или планшет осторожно покачивают в руках, что способствует более быстрой и четкой агглютинации эритроцитов. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, к каплям сыворотки с эритроцитами, где наступила агглютинация, добавляют по одной капле 0,9% раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение до истечения 5 мин. Через 5 мин читают реакцию в проходящем свете.

  Если агглютинация нечеткая, к смеси сыворотки и крови дополнительно добавляют по одной капле 0,9% раствора хлорида натрия, после чего дают заключение о групповой принадлежности (табл. 18.4).

• Результаты реакции [показать] .
  1. Отсутствие агглютинации во всех трех каплях указывает на то, что в исследуемой крови нет агглютиногена, то есть кровь относится к группе 0(I).
  2. Наступление агглютинации в каплях с сыворотками 0(I) и В(III) указывает на то, что в крови имеется аггглютиноген А, то есть кровь относится к группе А(II).
  3. Наличие агглютинации в каплях с сыворотками группы 0(I) и А(II) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген В, то есть кровь группы В(III).
  4. Агглютинация во всех трех каплях указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов А и В, то есть кровь относится к группе АВ(IV). Однако в этом случае, учитывая, что агглютинация со всеми сыворотками возможна за счет неспецифической реакции, необходимо нанести на планшет или тарелку две-три капли стандартной сыворотки группы АВ(IV) и добавить к ним 1 каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают и результат реакции наблюдают в течение 5 мин.

     Если агглютинация не наступила, то исследуемую кровь относят к группе АВ(IV). Если же агглютинация появляется с сывороткой группы АВ(IV), значит, реакция неспецифическая. При слабой агглютинации и во всех сомнительных случаях кровь заново проверяют со стандартными сыворотками других серий.

Определение группы крови АВО двойной реакцией
(по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам)

Стандартные эритроциты представляют собой 10-20% взвесь свежих нативных эритроцитов (или отмытых от консерванта тест-клеток) группы 0(I), А(II) и В(III) в 0,9% растворе хлорида натрия или цитратно-солевом растворе. Нативные стандартные эритроциты могут быть использованы в течение 2-3 дней при условии хранения их в изотоническом солевом растворе при температуре +4°С. Консервированные стандартные эритроциты хранят при температуре +4°С в течение 2-х месяцев и отмывают от консервирующего раствора перед использованием.

Ампулы или флаконы со стандартными сыворотками и стандартными эритроцитами располагают в специальных штативах с соответствующей маркировкой. Для работы с типирующими реагентами используют сухие чистые пипетки, отдельные для каждого реагента. Для промывания стеклянных (пластмассовых) палочек и пипеток подготавливают стаканы с 0,9% раствором хлорида натрия.

Для определения группы берут 3-5 мл крови в пробирку без стабилизатора. Кровь должна отстояться в течение 1,5-2 ч при температуре + 15-25° С.

• Ход определения [показать] .

  На планшет наносят по две капли (0,1 мл) стандартных сывороток групп 0(I), А(II), В(III) двух серий. Соответственно каждой группе сывороток располагают по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп 0(I), А(II), В(III). В стандартные сыворотки добавляют по одной капле исследуемой крови, а в стандартные эритроциты - по две капли исследуемой сыворотки. Количество крови должно быть в 8-10 раз меньше, чем сыворотки. Капли перемешивают стеклянной палочкой и, покачивая планшет в руках в течение 5 мин, следят за наступлением агглютинации. Если агглютинация нечеткая, к смеси сыворотки и крови дополнительно добавляют по одной капле 0,9% раствора хлорида натрия (0,1 мл), после чего делают заключение о групповой принадлежности (табл. 18.4).

• Оценка результатов определения группы крови системы АВО [показать] .
  1. Наличие агглютинации со стандартными эритроцитами А и В и отсутствие агглютинации в трех стандартных сыворотках двух серий указывает на то, что в исследуемой сыворотке присутствуют оба агглютинина - альфа и бета, а в исследуемых эритроцитах нет агглютиногенов, то есть кровь относится к группе 0(I).
  2. Наличие агглютинации со стандартными сыворотками групп 0(I), В(III) и со стандартными эритроцитами группы В(III) указывает на то, что в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген А, а в исследуемой сыворотке - агглютинин бета. Следовательно, кровь относится к группе А(II).
  3. Наличие агглютинации со стандартными сыворотками групп 0(I), А(II) и со стандартными эритроцитами группы А(II) указывает на то, что в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке - агглютинин альфа. Следовательно кровь относится к группе В(III).
  4. Наличие агглютинации со всеми стандартными сыворотками и отсутствие агглютинации со всеми стандартными эритроцитами указывает на то, что в исследуемых эритроцитах имеются оба агглютинина, то есть кровь относится к группе АВ(IV).

Определение групповой принадлежности крови
с использованием цоликлонов анти-А и анти-В

Цоликлоны анти-А и анти-В (моноклональные антитела к антигенам А и В) предназначены для определения группы крови системы АВО человека взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого определения группы крови применяют по одной серии реагента анти-А и анти-В.

• Ход определения [показать] .

  На планшет (пластинку) наносят по одной большой капле цоликлонов анти-А и анти-В (0,1 мл) под соответствующими надписями: "Анти-А" или "Анти-В". Рядом помещают по одной маленькой капле исследуемой крови (соотношение кровыреагент - 1:10), затем реагент и кровь смешивают и наблюдают за ходом реакции при легком покачивании планшета или пластинки.

  Агглютинация с цоликлонами анти-А и анти-В обычно наступает в первые 5-10 с. Наблюдение следует вести 2,5 мин, ввиду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

• Оценка результатов реакции агглютинации с цоликлонами анти-А и анти-В представлена в табл. 18.4, в которую также включены результаты определения агглютининов в сыворотке доноров с помощью стандартных эритроцитов.

При подозрении на спонтанную агглютинацию у лиц с группой крови АВ(IV) проводят контрольное исследование с 0,9% раствором хлорида натрия. Реакция должна быть отрицательной.

Цоликлоны анти-А (розового цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и лиофилизированной форме в ампулах по 20, 50, 100 и 200 доз с растворителем, приложенным к каждой ампуле, по 2, 5, 10, 20 мл соответственно.

Дополнительным контролем правильности определения группы крови АВО реагентами анти-А и анти-В является моноклональный реагент анти-АВ ("Гематолог", Москва). Реагент анти-АВ целесообразно использовать параллельно как с иммунными поликлональными сыворотками, так и с моноклональными реагентами. В результате реакции с реагентом анти-АВ развивается агглютинация эритроцитов групп А(II), В(III) и АВ(IV); у эритроцитов группы 0(I) агглютинация отсутствует.

ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ

Ошибки при определении групп крови могут зависеть от трех причин:

1. технических;
2. неполноценности стандартных сывороток и стандартных эритроцитов;
3. биологических особенностей исследуемой крови.

К ошибкам по техническим причинам относятся:

• а) неправильное расположение сывороток на планшете;
• б) неправильные количественные соотношения сывороток и эритроцитов;
• в) применение недостаточно чистых планшетов и других предметов, соприкасающихся с кровью. Для каждой сыворотки должна быть отдельная пипетка; для промывания пипеток следует применять только 0,9% раствор хлорида натрия;
• г) неправильная запись исследуемой крови;
• д) несоблюдение положенного для реакции агглютинации времени; при поспешности, когда реакцию учитывают до истечения 5 мин, агглютинация может не наступить, если в исследуемой крови имеются слабые агглютиногены; при передержанной более 5 мин реакции может произойти подсыхание капель с краев, симулирующее агглютинацию, что также поведет к ошибочному заключению;
• е) отсутствие агглютинации из-за высокой (выше 25°С) температуры окружающего воздуха. Во избежание этой ошибки целесообразно использовать специально приготовленные сыворотки для работы в условиях жаркого климата; производить определение групп крови на тарелке или пластмассовом подносе, внешняя поверхность дна которых опущена в холодную воду.
• ж) неправильное центрифугирование: недостаточное может привести к ложноотрицательному результату, а избыточное - к ложноположительному.

Ошибки, зависящие от применения неполноценных стандартных сывороток и стандартных эритроцитов:

• а) слабые стандартные сыворотки с титром ниже чем 1:32 или с истекшим сроком годности могут вызывать позднюю и слабую агглютинацию;
• б) применение негодных стандартных сывороток или эритроцитов, которые были приготовлены нестерильно и недостаточно законсервированы, ведет к возникновению неспецифической "бактериальной" агглютинации.

Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемой крови:

Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемых эритроцитов:

• а) поздняя и слабая агглютинация объясняется "слабыми" формами антигенов, эритроцитов, чаще - наличием в группах А и АВ слабого агглютиногена А 2 . При этом, в случае определения группы крови без исследования сыворотки на наличие агглютининов (простая реакция) могут наблюдаться ошибки, вследствие которых кровь группы А 2 В определяют как группу В(III), а кровь А 2 - как группу 0(I). Поэтому, во избежание ошибок, определение группы крови как доноров, так и реципиентов необходимо проводить с использованием стандартных эритроцитов (двойная или перекрестная реакция). Для идентификации агглютиногена А 2 рекомендуется повторить исследование с другими видами (сериями) реагентов, используя другую лабораторную посуду, с увеличением времени регистрации реакции.

  Специфическими реагентами уточнения группы крови при наличии слабых вариантов антигена А (А 1 , А 2 , А 3) методом прямой реакции агглютинации являются цоликлон анти-А сл и реагент анти-А).

• б) "панагглютинация" или "аутоагглютинация", то есть способность крови давать одинаковую неспецифическую агглютинацию со всеми сыворотками и даже со своей собственной. Интенсивность подобной реакции после 5 мин ослабевает, в то время как истинная агглютинация усиливается. Наиболее часто встречается у гематологических, онкологических больных, обожженных и др. Для контроля рекомендуется оценить, происходит ли агглютинация тестируемых эритроцитов в стандартной сыворотке группы АВ (IV) и физиологическом растворе.

  Группа крови при "панагглютинации" может быть определена после трехкратного отмывания эритроцитов. Для устранения неспецифической агглютинации планшет помещают в термостат при температуре +37°С на 5 мин, после чего неспецифическая агглютинация исчезает, а истинная остается. Целесообразно повторить определение с использованием моноклональных антител, постановки пробы Кумбса.

  В том случае, когда отмывание эритроцитов не дает желаемого результата, необходимо произвести повторное взятие образца крови в предварительно согретую пробирку, поместить пробу в термоконтейнер для поддержания температуры +37°С и доставить в лабораторию на исследование. Определение группы крови необходимо производить при температуре +37°С, для чего используют предварительно подогретые реактивы, физиологический раствор и планшет.

• в) эритроциты тестируемой крови складываются в "монетные столбики", которые при макроскопии можно принять за агглютинаты. Прибавление 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия с последующим мягким покачиванием планшета, как правило, уничтожает "монетные столбики".
• г) смешанная или неполная агглютинация: часть эритроцитов агглютинирует, а часть остается свободной. Наблюдается у пациентов групп А(II), В(III) и АВ(IV) после трансплантации костного мозга или в течение первых трех месяцев после переливания крови группы 0(I). Разнородность эритроцитов периферической крови четко верифицируется в гелевом тесте DiaMed.

Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемой сыворотки:

• а) выявление антител другой специфичности при рутинном тестировании является результатом предшествующей сенсибилизации. Целесообразно определить специфичность антител и подобрать типированные эритроциты без антигена, к которому выявлена иммунизация. Иммунизированному реципиенту обязателен индивидуальный подбор совместимой донорской крови;
• б) при выявлении образования "монетных столбиков" стандартных эритроцитов в присутствии тестируемой сыворотки аномальный результат целесообразно подвердить, используя стандартные эритроциты группы 0(I). Для дифференцировки "монетных столбиков" и истинных агглютинатов добавляют 1-2 капли изотонического раствора хлорида натрия и покачивают планшет, при этом "монетные столбики" разрушаются;
• в) отсутствие анти-А- или анти-В-антител. Возможно у новорожденных и пациентов с угнетением гуморального иммунитета;
всего страниц: 10

ЛИТЕРАТУРА [показать] .

1. Иммунологический подбор донора и реципиента при переливаниях крови, ее компонентов и трансплантациях костного мозга / Сост. Шабалин В. Н., Серова Л. Д., Бушмарина Т.Д. и др.- Ленинград, 1979.- 29 с.
2. Калеко С. П., Серебряная Н. Б., Игнатович Г. П. и др. Аллосенсибилизация при гемокомпонентной терапии и оптимизация подбора гистосовместимых пар "донор-реципиент" в военных лечебных учреждениях/ Методич. рекомендации.- С.-Петербург, 1994.- 16 с.
3. Практическая трансфузиология / Ред. Козинец Г. И., Бирюкова Л. С., Горбунова Н.А. и др.- Москва: Триада-Т, 1996.- 435 с.
4. Руководство по военной трансфузиологии / Ред. Э. А. Нечаев. - Москва, 1991. - 280 с.
5. Руководство по трансфузионной медицине / Под ред. Е. П. Сведенцова. - Киров, 1999.- 716с.
6. Румянцев А. Г., Аграненко В. А. Клиническая трансфузиология.- М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1997.- 575 с.
7. Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б., Безопасное переливание крови: Руководство для врачей.- СПб.: Питер, 2000.- 320 с.
8. Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б., Серебряная Н.Б. Иммунологическая и инфекционная безопасность гемокомпонентной терапии.- СПб.: Наука, 1998.- 232 с.
9. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови / Пер. с англ.- М.- СПб.: Издательство БИНОМ - Невский диалект, 2000.- 448 с.
10. Blood transfusion in Clinical Medicine / Ed. P.L.Mollison, C. P. Engelfriet, M. Contreras.- Oxford, 1988.- 1233 p.

Источник : Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001

Эта система является основной, определяющей совместимость или несовместимость переливаемой крови. В нее входя два генетически детерминированных важных антигена: А и В - и два вида антител к ним, агглютинины а и в. Сочетания агглютиногенов и агглютининов определяют 4 группы системы АВО. Эта система единственная, где в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему антигену. Агглютиноген А у большинства людей является хорошо вы­раженным (обладает большой антигенной силой): с антителами анти-А (а) он дает резко выраженную реакцию агглютинации эритроцитов. Приблизительно у 12% лиц групп А(11) и AB(IV) антиген имеет слабые антигенные свойства, его обозначают как А2 антиген. Таким образом, имеется группа антигенов A: A1 (сильный) и более слабые А2, A3, А4 и др. О существовании слабых антигеном А следует помнить при определении групп крови, так как эрит­роциты с такими антигенами способны давать лишь позднюю и слабовыраженную агглютинацию, что может привести к ошиб­кам. Слабые разновидности антигена В встречаются очень редко. Антитела системы АВО а (анти-А) и в (анти-В) являются нормальным свойством плазмы крови, качественно не изменяющимся в течение жизни человека, а и в - это полные, холодовые анти­тела. В большинстве случаев они не обнаруживаются у новорожденных и появляются в течение первых трех месяцев жизни или даже года. Полного развития групповые агглютинины достигают к 18 годам, а в старости титр (уровень) их снижается, что наблю­дается также при иммунодефицитных состояниях. Кроме существующих в норме (естественных) групповых ангитсл а и в в ряде случаев возникают иммунные антитела анти-А и анти-В. Наиболее частой причиной этого является беремен­ность, при которой мать и плод имеют разные группы крови, чаще, если мать 1(0) группы, плод 11(A) или Ш(В). Определение группы крови необходимо для совместимого переливания крови. При этом необходимо придерживаться правила: эритроциты донора не должны содержать антигена, соответствующего антителам реципиента, т. е. А и а, В и в, так как иначе произойдет массивное разрушение введенных эрит­роцитов антителами больного - гемолиз, что может привести к смерти реципиента. Групповые антитела донора можно не учитывать, так как они разводятся плазмой реципиента. Следова­тельно, кровь группы O(I), не содержащую агглютиногенов, можно переливать людям с любой группой крови. Лица, имеющие 0(1) группу крови, считаются «универсальными до- норами». Кровь группы А(П) можно переливать реципиентам группы А(П) и группы AB(IV), не имеющей в плазме агглюти­нинов. Кровь группы В(Ш) может быть перелита лицам с группой В(Ш) и AB(IV).

Определение групп крови системы АВО производится сле­дующими методами.

I. Определение группы крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток. При этом способе в крови устанав­ливают наличие или отсутствие агглю­тиногенов и, исходя из этого, делают заключение о групповой принадлеж­ности исследуемой крови.

2. Определение группы крови пе­рекрестным способом, т. е. одновре­менно при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стан­дартных эритроцитов. При этом способе, так же как и при первом, определяют наличие или отсутст­вие агглютиногенов и, кроме того, при помощи стандартных эритроцитов устанавливают наличие или отсутствие групповых агглютининов.

3. Определение группы крови с помощью моноклональных антител (ЦОЛИКЛОНов).

ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУПП КРОВИ

Технические ошибки. Нарушение изложенных правил опредсления групп крови может привести к неправильной оценке ре­зультатов реакции. Отступлением от правил могут явиться:

Использование недоброкачественных стандартных сывороток или эритроцитов (истекший срок годности, загрязнение ими высыхание сывороток);

Перепутывание проб исследуемой крови;

Ошибочное расположение стандартных сывороток или фоцитов в штативах;

Ошибочный порядок нанесения стандартных реагентов на пластину;

Неправильное соотношение количества сыворотки и эритроцитов (не 10:1);

Исследование при температуре менее 15 °С (наступает холодовая агглютинация) или более 25 °С (происходит замедление агглютинации);

Несоблюдение времени, необходимого для проведения реакции (5 мин);

Не осуществляют добавление физиологического раствора с последующим покачиванием пластинки;

Не используют контрольную реакцию с сывороткой АВо(IV) группы;

Применение загрязненных или мокрых пипеток, палочек, пластин.

Во всех случаях нечеткого или сомнительного результата необходимо повторное определение группы крови перекрестным методом с использованием стандартных сывороток других серий.

Ошибки, связанные с биологическими особенностями исследуемой крови.

Неправильное определение группы А 2 и А 2 В. Эритроциты со слабым антигеном А с антисывороткой образуют мелкие, мед­ленно появляющиеся агглютинаты. Реакция может быть учтена как отрицательная, т. е. группа А 2 ошибочно регистрируется как О(1), а А 2 В - как В(Ш). Особенно велик риск такой ошибки при одновременном наличии технических погрешностей (нару­шено соотношение сыворотки и эритроцитов 10:1, температура выше 25 °С, учет результатов ранее 5 мин).

Ошибки, связанные с наличием неспецифической агглю- тинабельности исследуемых эритроцитов. Такое явление наблюдается у больных злокачественными опухолями, лейкозами, сепсисом, ожогами, циррозом печени, аутоиммунной гемолитиче­ской анемией и обусловлено диспротеинемией. Выявляет нали­чие неспецифической агглютинации контроль с сывороткой АВо (IV) группы. В этих случаях необходимо вновь определить групповую принадлежность перекрестным методом. В капли, где на­блюдается агглютинация, можно добавить подогретый до 37° физиологический раствор. При необходимости, можно отмыть теп­лым (37°) физиологическим раствором исследуемые эритроциты и вновь определить группу крови.

Ошибки, связанные с наличием экстраагглютининов. В сыворотке крови лиц групп А2(П) и A2B(IV) приблизительно в 1% случаев обнаруживают антитела к А1 антигену - а1. Это осложняег определение группы крови перекрестным методом, так как сыворотка таких лиц агглютинирует стандартные эритроциты А(П) группы, т. е. проявляет себя как сыворотка 0(1) группы.

При некоторых заболеваниях наблюдается снижение агглютинабельности эритроцитов, особенно группы А(П).

При иммунодефицитных состояниях у стариков наблюдается снижение уровня групповых агглютининов.

Во всех случаях получения сомнительного результата определение групповой принадлежности крови должно производиться повторно перекрестным методом с использованием сывороток более высокой активности.

18.Антигены системы резус. Группы системы резус. Клиническое значение. Методы определения антигенов резус и возможные ошибки.

Антигены резус являются вторыми по значению в трансфузионной практике после групп крови системы АВО В период активного внедрения в клинику гемотрансфузий значительно воз­росло число посттрансфузионных осложнений после повторныхпереливаний совместимой по антигенам АВО крови. В систему резус входят шесть антигенов, для обозначения которых парал­лельно используются двеноменклатуры: Винера (Rh 0 , rh", rh", Hr 0 , hr", hr"); Фишера и Рейса (D, С, E, d, с, e).

Rh 0 - D, rh" - C, rh" - E, Hr 0 - d, hr" - c, hr" - e.

Поскольку в этой системе наиболее активным является антиген Rho(D), его называют резус-фактором. Именно в зависимости от наличия или отсутствия этого фактора людей разделяют на резус-положительных (Rh+) и резус-отрицательных (Rh-). Такое деление принято только в отношении реципиентов. Антигены rh"(C) и rh"(E) менее активны, чем Rho(D), но к ним также могут вырабатываться антитела у людей, не содержащих антигенов С и Е в эритроцитах. Поэтому к эритроцитам резус отрицательных доноров требования более строгие. Эритроциты не должны содержать не только антиген D, но также и С и Е. Антигены Hro(d), hr"(c), hr"(e) характеризуются низкой активностью, хотя антитела hr"(c) могут быть причиной изоиммунологических конфликтов. У 1-3% резус-положительных лиц в эритроцитах имеет слабый вариант антигена D - D", который определяет наличие мелкой, сомнительной агглютинации при определении резуc- фактора. В этих случаях резус-принадлежность крови реципиента или беременной женщины указывают как резус-отрицательную(Rh-), а резус-принадлежность крови донора как резус-положительную (Rh+). Не допускается переливание крови с ангеном D u резус-отрицательным реципиентам. Формируются антигены резус на 8-10 неделе эмбриогенеза, причем антигенность их даже может превышать активность ан­тигенов у взрослых. Система резус в отличие от системы АВО не имеет естест­венных антител. Антитела антирезус возникают только после иммунизации резус-отрицательного организма в результате переливания резус-положительной крови или беременности резус-положительным плодом. В организме сенсибилизированных лиц антитела к резус-антигенам сохраняются несколько лет, иногда на протяжении всей жизни. В большинстве случаев титр антител антирезус постепенно снижается, но опять резко возрастает при повторном попадании в организм резус-положительной крови. Резус-антитела различаются по специфичности (анти-D, ан- III С и т. д.) и по серологическим свойствам (полные и непол­ные). Полные антитела вызывают агглютинацию эритроцитов в солевой среде при комнатной температуре. Для проявления агглютинации под действием неполных антител требуются особые условия: повышенная температура, коллоидная среда (желатин, сывороточный белок). Полные антитела (IgM) синтезируются в начале иммунной реакции и вскоре исчезают из крови. Неполные антитела (IgG, IgA) появляются позже, синтезируются долго и являются причиной развития гемолитической болсзни новорожденных, так как проходят через плаценту и повреждают клетки плода.

Определение резус-принадлежности крови

Метод определения резус-фактора зависит от формы резус-антител в стандартной сыворотке и способа ее изготовления. К сыворотке антирезус прикладывается сопроводительная инст­рукция с описанием того метода, для которого предназначена данная серия выдаваемой сыворотки.

При каждом исследовании для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус необходимо ставить контроль. Для контроля применяются стандартные резус-положительные эритроциты группы 0(1) или той же группы, что и исследуемая кровь, и стандартные резус-отрицательные эритроциты обязательно той же группы, что и исследуемая кровь.

При определении резус-принадлежности двумя сериями стан­дартных сывороток в тех случаях, когда они используются раз­ными методами, результат учитывается как истинный при совпадении его в обеих сериях исследований после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность каждой серии сыворотки антирезус, т. е. при отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритро цитами одноименной группы и наличии агглютинации со стандартными резус-положительными эритроцитами одноименной группы или группы 0(1) и в контрольных пробах без сыворотки (реагента) антирезус. Если при определении резус-принаддеж ности наблюдается слабая или сомнительная реакция, то следует повторно исследовать кровь данного лица этими же и другими сериями сыворотки антирезус и желательно включить сыворотку содержащую полные антитела. Если при этом все серии сывороток, содержащих неполные антитела, дадут также слабую или сомнительную реакцию, а с полными антителами реакция будет отрицательная, это значит, что эритроциты содержат слабую paзновидность антигена резус, так называемый фактор D u . В этих случаях резус-принадлежность крови больного или беременной женщины указывают как резус-отрицательную (Rh-), a резус- принадлежность крови донора как резус-положительную (Rh+), не допуская таким образом переливания его крови резус-отрицательным реципиентам.

Определение резус-фактора можно проводить также следующими методиками.

Определение резус-фактора Rh 0 (D) реакцией конглютинации с применением желатина (в пробирке с подогревом до 46-48 °С).

Определение резус-фактора Rho(D) реакцией конглютинации в сывороточной среде на плоскости с подогревом.

Определение резус-фактора Rh 0 (D) реакцией агглютинации в солевой среде в маленьких пробирках. Реакция агглютинации в солевой среде пригодна для работы только с сывороткой, содержащей полные резус-антитела.

Определение резус-фактора Rh 0 (D) с помощью моноклональных антител.

Определение резус-фа ктора Rho(D) с помощью непрямой пробы Кумбса.

19 Анемии. Классификация и краткая характеристика. Этиология и патогенез анемий. Анемия (от греческого anemia - бескровие) - большая груп­па заболеваний, которая характеризуется снижением количества гемоглобина или гемоглобина и эритроцитов в единице объема крови. Анемии различны по этиологии, механизмам развития, клинико-гематологической картине, поэтому есть много различных классификаций, но они недостаточно совершенны. Л. И. Идельсон предложил рабочую классификацию анемий для врачей-клиницистов: 1) острые постгеморрагические анемии; 2) железодефицитные анемии; 3) анемии, связанные с нарушением синтеза или утилизации порфиринов (сидеробластные); 4) анемии, связанные с нарушением синтеза ДНК, РНК (мегалобластные); 5) гемолитические анемии; 6) анемии, связанные с угнетением пролиферации клеток костного мозга (гипопластические, апластические); 7) анемии, связанные с замещением кроветворного костного мозга опухолевым процессом (метапластические).

Анемия может быть как самостоятельным заболеванием, так и сопутствующим симптомом или осложнением некоторых внутренних болезней, инфекционных и онкологических заболевании. Бывают полифакторные анемии, т. е. смешанного генеза, например: гемолитическая анемия с дефицитом железа, апластическая анемия с гемолитическим компонентом и др.

В зависимости от:

1)величины цветового показателя различают анемии:

Нормохромные (цветовой показатель 0,9-1,1);

Гипохромные (цветовой показатель меньше 0,85);

Гиперхромные (цветовой показатель больше 1,15);

2)величины среднего диаметра эритроцитов:

Нормоцитарные (средний диаметр эритроцитов 7,2-7,5 мкм)

Микроцитарные (средний диаметр эритроцитов меньше 6,5 мкм),

Макроцитарные (средний диаметр эритроцитов больше 8,0 мкм),

Мегалоцитарные (средний диаметр эритроцитов равен больше 12 мкм);

3)величины среднего объема эритроцитов в фемтолитрах (фл, 1 фл равен 1 мкм 3):

Нормоцитарные (средний объем эритроцитов 87±5 фл);

Микроцитарные (средний объем эритроцитов меньше 80 фл);

Макроцитарные (средний объем эритроцитов больше 95 фл);

4) уровня ретикулоцитов в периферической крови.

Регенераторные (количество ретикулоцитов 0,5-5%);

Гиперрегенераторные (количество ретикулоцитов больше 5%);

Гипо- и арегенераторные (количество ретикулоцитов сни­жено или они отсутствуют, несмотря на тяжелое течение анемии).

Уровень ретикулоцитов является показателем регенераторной функции костного мозга в отношении эритропоэза.

К нормохромным анемиям относятся острые постгеморраги­ческие (в первые дни после кровопотери), гипо- и апластические, несфероцитарные гемолитические, аутоиммунные гемоли­тические, метапластические (при лейкозах, миеломной болезни и др.), а также анемии, развивающиеся при эндокринных нару­шениях (гипофункция надпочечников), болезнях почек, хрони­ческих инфекциях.

К гипохромным анемиям относятся железодефицитные, си- деробластные, некоторые миелотоксические, гемолитические (талассемия).

Гиперхромными бывают В12-(фолиево)-дефицитные, некото­рые гемолитические анемии (наследственный микросфероцитоз, если среди эритроцитов в мазке преобладают микросфероциты). Иногда витамин-В1 2 -дефицитная анемия бывает нормохромной.

К нормоцитарным относятся острые постгеморрагические, апластические, аутоиммунные гемолитические анемии и др.

К микроцитарным относятся железодефицитные, сидеробластпые анемии, к макроцитарным - вигамин-В12-(фолиево)-дефицитные анемии и др.

К регенераторным относят постгеморрагические анемии; к гиперрегенераторным - гемолитические анемии, особенно со­стояние после гемолитического криза; к гипо- и арегенераторным - гипопластические, апластические анемии.

Костный мозг реагирует на развитие железодефицитных, ге­молитических анемий раздражением, гиперплазией красного рост­ка. При гипопластических анемиях отмечается прогрессирующее падение эритропоэза вплоть до полного его истощения.

20.Лабораторная диагностика железонасыщенных и железоненасыщенных анемий. Железодефицитная анемия. Виды дефицита железа. Лабораторные тесты, отражающие дефицит железа в организме. Картина периферической крови и костного мозга при ЖДА. Лабораторная диагностика сидеробластных анемии. Обмен и роль железа в организме

Железо имеет большое значение для организма, входит в со­став гемоглобина, миоглобина, дыхательных ферментов. Оно распределяется по основным фондам.

Гемоглобиновый фонд. Железо гемоглобина составляет 60- 65% от общего содержания железа в организме.

Запасной фонд. Это железо ферритина и гемосидерина, кото­рые депонированы в печени, селезенке, костном мозге, мышцах. Составляет 30-40% от уровня железа в организме. Ферритин - водорастворимый комплекс трехвалентного железа и белка апоферритина, содержащий 20% железа. Представляет собой ла­бильную фракцию запасного фонда железа. При необходимости легко используется для нужд эритропоэза. Гемосидерин - не­растворимый в воде белок, по составу близок к ферритину, но содержит большее количество железа - 25-30%. Является ста­бильной, прочно фиксированной фракцией запасов железа в организме.

Транспортный фонд представлен железом, связанным с транспортным белком трансферрином. Составляет 1% от содер­жания железа в организме.

Тканевой фонд представлен железом железосодержащих фер­ментов (цитохромы, пероксидаза и др.), миоглобина. Составляет 1% от содержания железа в организме.

Общее содержание железа в организме взрослых равно 4-5 г. Оно поступает в организм с пищевым рационом. Содержится в продуктах животного и растительного происхождения (мясо, особенно говядина, печень, яйца, бобовые, яблоки, курага и др.). Железо всасывается гораздо лучше из продуктов животного про­исхождения, чем растительного, так как оно содержится в них в форме гема. Так, из мяса всасывается 20-25%, из рыбы - 11%, из растительных продуктов - 3-5% содержащегося в них железа. Всасыванию железа способствуют аскорбиновая кислота, орга­нические кислоты (лимонная, яблочная и др.), ингибируют вса­сывание танин, высокое содержание жира в рационе. Всасыва­ние железа из пищевых продуктов лимитировано. За сутки вса­сывается 2-2,5 мг железа, кратковременно после сильного кро­вотечения может всасываться до 3 мг железа. Основное количест­во железа всасывается в 12-перстной кишке и в начальной части тощей кишки. Малое количество железа может всосаться во всех отделах тонкого кишечника.

Всасывание железа происходит в два этапа: 1) слизистая обо­лочка кишечника захватывает железо, поступающее с пищевым рационом; 2) железо из слизистой оболочки кишечника перехо­дит в кровь, нагружается на трансферрин и доставляется к мес­там использования и в депо. Трансферрин также переносит железо из его фондов и клеток системы фагоцитирующих мононук леаров, в которых происходит деструкция эритроцитов, в костный мозг, где оно частично используется для синтеза гемоглобина, а частично откладывается в виде железа запасов, а также в другие места хранения железа. Обычно с железом связывается 1/3 часть трансферрина. Ее называют связанным трансферрином или сы­вороточным железом. В норме содержание железа в сыворотке у мужчин и женщин составляет, соответственно, 13-30 и 12-25 мкмоль/л. Часть трансферрина, не связанную с желе­зом, называют свободным трансферрином или ненасыщенной, латентной железосвязывающей способностью сыворотки. Мак­симальное количество железа, которое мог бы присоединить трансферрин до своего насыщения, обозначают как общую железосвязывающую способность сыворотки (ОЖСС) (в норме 30-85 мкмоль/л). Разница между показателями ОЖСС и сывороточным железом отражает латентную железосвязывающую способ­ность, а отношение сывороточного железа к ОЖСС, выраженное в процентах, отражает процент насыщения трансферрина желе­зом (норма 16-50%). Для суждения о величине запасов железа и организме проводят:

Исследование уровня ферритина в сыворотке радиоимун ными методами;

Десфераловый тест. Десферал (десфероксамин) является комплексоном, который после введения в организм избира­тельно связывается с железом запасов, т. е. с железом ферри­тина, и выводит его с мочой. Больному однократно внутри­мышечно вводят 500 мг десферала, собирают суточную мочу и определяют в ней содержание железа. После введения десферала с мочой в норме выводится от 0,8 до 1,2 мг железа, в то время как у больных железодефицитной анемией или при на­личии скрытого дефицита железа количество выделяемого е мочой железа резко снижается;

Подсчет в пунктате костного мозга количества сидеробла- стов, а в периферической крови - сидероцитов. Сидеробласты - это нормобласты, т. е. ядросодержащие клетки красного ряда, в цитоплазме которых выявляются синего цвета гранулы железа запасов - ферритина. В норме 20-40% нормобластов являются сидеробластами. Сидероциты - это эритроциты, в которых обнаруживаются гранулы ферритина. В норме в периферической кровг: до 1% сидероцитов. Гранулы ферритина в сидеробластах и сидероцитах выявляются при специальной окраске берлинской лазурью.

Организму свойственны физиологические потери железа с мочой, калом, желчью, слущившимися клетками слизистой ки шсчника, с потом, при стрижке волос, ногтей. Женщины теряют железо с месячными.

Развитию железодефицитной анемии предшествует скрытый (латентный) дефицит железа. У больных появляются жалобы и клинические признаки, характерные для железодефицитной пиемии, но менее выраженные (слабость, умеренная бледность кожных покровов и видимых слизистых оболочек, головные боли, сердцебиение, часто извращение вкуса и обоняния, сухость кожи, ломкость ногтей и др.). При обследовании еще не обна­руживается изменений в содержании гемоглобина, эритроцитов и других показателей периферической крови. Но выявляются нарушения в обмене железа: снижается сывороточное железо, Повышаются общая и латентная железосвязывающие способности сыворотки, уменьшается процент насыщения трансферрина, снижается уровень железа запасов. Это сидеропения без анемии. Скрытый дефицит железа может развиться в любом возрасте, особенно часто им страдают женщины, подростки и дети. Если скрытый дефицит железа не компенсируется, а углубляется, раз­минается железодефицитная анемия.

Хотя весь полиморфизм - результат различий в последовательности ДНК, некоторые полиморфные локусы исследованы проверкой изменений в белках, кодируемых этими аллелями, а не изучением различий в ДНК-последовательности самих аллелей. Считают, что любой человек вероятно гетерозиготен по аллелям, определяющим структурно различающиеся полипептиды, приблизительно в 20% всех локусов; при сравнении индивидуумов из разных этнических групп полиморфизм обнаруживают даже в большей доле белков.

Таким образом, в пределах человеческого вида существует поразительная степень биохимической индивидуальности в характеристиках ферментов и других продуктов генов. Кроме того, поскольку продукты многих биохимических путей взаимодействуют, можно правдоподобно предположить, что каждый человек, независимо от состояния его здоровья, имеет уникальные, генетически определяемые биохимические характеристики и, таким образом, уникально отвечает на влияния окружающей среды, диетические и фармакологические факторы.

Это понятие химической индивидуальности , впервые выдвинутое столетие назад замечательным британским врачом Арчибальдом Гарродом, оказалось правильным.

Здесь мы обсудим несколько полиморфизмов , имеющих медицинское значение: группы крови АВО и резус-фактор Rh (важные в определении совместимости для переливаний крови) и МНС (играющий важную роль в пересадке органов и тканей). Исследования изменений в белках, а не в кодирующей их ДНК, дают реальную пользу; в конце концов, именно различные белковые продукты различных полиморфных аллелей часто ответственны за различные фенотипы и, следовательно, определяют, как генетические изменения в локусе влияют на взаимодействие организма и среды.

Группы крови и их полиморфизмы

Первые примеры генетически предопределенных изменений белков были обнаружены в эритроцитах, так называемые антигены групп крови. Известно большое число полиморфизмов в компонентах человеческой крови, особенно в АВО и Rh антигенах эритроцитов. В частности, системы АВО и Rh важны при переливании крови, пересадке тканей и органов и при гемолитической болезни новорожденного.

Система АВО групп крови

Человеческая кровь может относиться к одной из четырех групп, в соответствии с наличием на поверхности эритроцитов двух антигенов, А и В, и присутствия в плазме двух соответствующих антител, анти-А и анти-В. Существует четыре основных фенотипа: 0, А, В и АВ. Люди с группой А имеют на эритроцитах антиген А, с группой В имеют антиген В, с группой АВ - как антигены А, так и В, и наконец с группой 0 не имеют ни одного антигена.

Одна из характеристик групп АВО не распространяется на другие системы групп крови - это реципрокные отношения между наличием антигенов на эритроцитах и антител в сыворотке. Когда на эритроцитах отсутствует антиген А, сыворотка содержит анти-А антитела; когда отсутствует антиген В, сыворотка содержит анти-В антитела. Причина реципрокного отношения неизвестна, но полагают, что образование анти-А и анти-В антител - ответ на присутствие А- и В-подобных антигенов в окружающей среде (например, в бактериях).

Определяются локусом в хромосоме 9. Аллели А, В и 0 в этом локусе - классический пример мультиаллелизма, когда три аллеля, два из которых (А и В) наследуются как кодоминантные, а третий (0) - как рецессивный признак, определяют четыре фенотипа. Антигены А и В определяются действием аллелей А и В на поверхностный гликопротеид эритроцитов, названный антигеном Н.

Специфичность антигенов определяется концевыми углеводами, добавляемыми к субстрату Н. Аллель В кодирует гликозилтрансферазу, преимущественно опознающую сахар D-галактозу и добавляющую его к концу цепочки олигосахаридов, содержащейся в антигене Н, тем самым создавая антиген В. Аллель А кодирует немного отличающуюся форму фермента, распознающую и добавляющую к субстрату вместо D-галактозы N-ацетилгалактозамин, создавая тем самым антиген А. Третий аллель, 0, кодирует мутантную версию трансферазы, не обладающую трансферазной активностью и не влияющую на субстрат Н.

Определены молекулярные различия в гене гликозилтрансферазы , ответственной за аллели А, В и 0. Последовательность из четырех различных нуклеотидов, различающаяся между аллелями А и В, приводит к изменениям аминокислот, изменяющим специфичность гликозилтрансферазы. Аллель 0 имеет однонуклеотидную делецию в кодирующей области гена АВО, вызывающую мутацию сдвига рамки и инактивирующую активность трансферазы у людей с группой 0. Теперь, когда известны ДНК-последовательности, определение групповой принадлежности по системе АВО можно выполнять непосредственно на уровне генотипа, а не фенотипа, особенно когда есть технические трудности в серологическом анализе, что часто случается в судебной практике или при установлении отцовства.

На видео представлена техника определения группы крови стандартными сыворотками:

Первичное медицинское значение системы АВО - в переливании крови и пересадке тканей или органов. В системе групп крови АВО есть совместимые и несовместимые комбинации. Совместимая комбинация - когда эритроциты донора не несут антиген А или В, соответствующий антителу в сыворотке реципиента. Хотя теоретически существуют «универсальные» доноры (группа 0) и «универсальные» реципиенты (группа АВ), пациенту переливают кровь его собственной группы АВО, за исключением экстренных ситуаций.

Постоянное присутствие анти-А и анти-В антител объясняет неудачи многих ранних попыток переливания крови, поскольку эти антитела могут вызывать быстрое уничтожение АВО-несовместимых клеток. При пересадке тканей и органов для успешного приживания необходима совместимость донора и реципиента по группе АВО и HLA (описанной позже).

Система Rh групп крови

По клиническому значению система Rh сравнима с системой АВО из-за своей роли в развитии гемолитической болезни новорожденных и в несовместимости при переливаниях крови. Название Rh происходит от обезьян резусов (Rhesus), использовавшихся в экспериментах, приведших к открытию системы. Проще говоря, популяция разделяется на Rh-положительных индивидуумов, экспрессирующих в эритроцитах антиген Rh D, полипептид, закодированный геном (RHD) в хромосоме 1, и Rh-отрицательных, не экспрессирующих этот антиген. Отрицательный Rh-фенотип обычно вызван гомозиготностью по нефункциональному аллелю гена RHD. Частота Rh-отрицательных индивидуумов сильно изменяется в разных этнических группах. Например, 17% белых и 7% афроамериканцев Rh-отрицательны, тогда как среди японцев - всего 0,5%.

Гемолитическая болезнь новорожденных и группы крови

Главное клиническое значение системы Rh - то, что Rh-отрицательные лица могут легко формировать анти-Rh антитела после встречи с Rh-положительными эритроцитами. Это становится проблемой, когда Rh-отрицательная беременная вынашивает Rh-положительный плод. В норме в течение беременности небольшие количества крови плода пересекают плацентарный барьер и попадают в материнский кровоток. Если мать Rh-отрицательна, а плод Rh-положителен, мать формирует антитела, возвращающиеся к плоду и повреждающие его эритроциты, вызывая гемолитическую болезнь новорожденных с серьезными последствиями.

У Rh-отрицательных беременных риск иммунизации Rh-положительными эритроцитами плода может минимизироваться введением антирезус иммуноглобулина на сроке 28-32 нед гестации и дополнительно вскоре после родов. Иммуноглобулин человека антирезус удаляет Rh-положительные клетки плода из кровотока матери прежде, чем они ее сенсибилизируют. Антирезус иммуноглобулин также вводят после выкидышей, абортов или инвазивных процедур типа БВХ или амниоцентеза, в случаях, когда Rh-положительные клетки плода попадают в материнский кровоток. Открытие системы Rh и ее роли в развитии гемолитической болезни новорожденных - важный вклад генетики в медицину.