Det rettes for tiden mye oppmerksomhet mot forskning på rollen immunmekanismer i reproduksjonsprosessen, siden deres brudd fører til utvikling av infertilitet og tidlig avbrudd svangerskap. Studier av immunologiske parametere og deres forhold til reproduksjonsprosesser har ført til konklusjonen om behovet for restrukturering immunforsvar ved å forberede mors kropp for graviditet, fra eggløsningsperioden, på tidspunktet for embryoimplantasjon og under tidlig periode svangerskap.
En av de mest komplekse og vanskelig å diagnostisere årsakene til infertilitet og tilbakevendende spontanaborter er immundysfunksjon.
For å oppdage immunologisk infertilitet i tide, gjennomfører laboratoriet for immunologi for reproduksjon undersøkelser av ektepar ved å bruke følgende metoder diagnostikk:
- studie av nivået av proliferativ respons av en kvinnes lymfocytter på partnerens antigener (i en blandet kultur av lymfocytter)
- bestemmelse av aktiviteten til blokkerende faktorer i en kvinnes blodserum.
- vurdering av det kvantitative innholdet av subpopulasjoner av naturlige cytotoksiske celler i en kvinnes perifere blod.
- utvidet immunogram
- studie av innholdet av regulatoriske celler med suppressoraktivitet i perifert blod.
- ved identifisering av kliniske og laboratorieskilt Immunologisk undersøkelse av infertilitetspasienter anbefales å gjennomgå medisinsk prosedyre- alloimmunisering med mannens lymfocytter, som utføres i samsvar med en individuell tidsplan.
Konsultasjon nødvendig:
- hvis i fravær av gynekologisk og endokrine sykdommer Med regelmessig seksuell aktivitet i et år er det ingen graviditet.
- ved gjentatte (mer enn én gang) spontane svangerskapsavbrudd (abort).
- på mislykket IVF i anamnesen.
- når det er en trussel om avbrytelse av en reell graviditet.
Hvis det oppdages lidelser, foreskrives en prosedyre for immunkorreksjon av lidelser alloimmunisering med partnerlymfocytter (AIL). Denne metoden behandling er godkjent for bruk av Federal Service for Surveillance in Healthcare (lisens FS nr. 2009/179 datert 07/02/2009)
Prosedyren utføres kun hvis partneren har negative testresultater for HIV-infeksjon, syfilis og viral hepatitt(B, C). Ingen komplikasjoner ble identifisert med AIL. AIL-metoden har en uttalt immunkorrigerende effekt og øker effektiviteten av infertilitetsbehandling, både i den naturlige syklusen og under in vitro fertilisering (IVF). Også foreskrevet for mislykkede forsøk på in vitro fertilisering.
AIL utføres en gang hver 28.-30. dag (iht menstruasjonssyklus kvinner) i første fase av syklusen. Det første kurset inkluderer 3 AIL-prosedyrer. Etter 2. prosedyre tar paret en kontrollprøve på nytt. Hvis det er positiv dynamikk, er den tredje AIL-prosedyren den siste. Hvis det ikke er noen dynamikk, økes dosen av celler for immunisering og et 2. kurs utføres, inkludert 2 prosedyrer. Etter kontrollanalyse i noen tilfeller er det nødvendig å foreskrive et tredje immuniseringsforløp med en økende dose av celler. Etter å ha nådd standardverdier positiv effekt varer i 6-8 måneder.
For perioden 2003 til 2013. I laboratoriet for cellulær immunterapi ble det utført ca. 3000 alloimmuniseringsprosedyrer med partnerlymfocytter. For denne prosedyren er bare lymfocytter isolert fra partnerens blod, som alltid er tilstede i sædvæsken. I andre land* har alloimmuniseringsprosedyren også blitt utført i 20 år, som hjelper en kvinne med å bære og føde et friskt barn.
| Type tjeneste | pris, gni. |
| Lymfocytttransformasjonstest (Deteksjon av sesibilisering på 1. århundre) | 1650 |
| Lymfocytttransformasjonstest (Deteksjon av sesibilisering på 2b-va) | 2 900 |
| Lymfocytttransformasjonstest (Deteksjon av sesibilisering på 3b-va) | 3 900 |
| Lymfocytttransformasjonstest (immunologisk undersøkelse for infertilitet) | 3 200 |
| Utvidet immunogram med aktiveringsmarkører | 4 625 |
| Omfattende studie av immunstatus | 4 125 |
| Vaksinasjon (alloimmunisering med partnerens lymfocytter 1 dose) | 1 900 |
| Vaksinasjon (alloimmunisering med partnerens lymfocytter, 2. dose) | 2 750 |
| Vaksinasjon (alloimmunisering med partnerens lymfocytter, 3. dose) | 3 400 |
| Studie av CD16+/CD56+ lymfocytter (immunologisk undersøkelse for infertilitet kun NK-celler) | 1 250 |
| Studie av makrofagaktivitet (kondisjonerte makrofagmedier) | 9 400 |
| Studie av makrofagaktivitet (kondisjonerte medier) | 1 500 |
| Kryokonservering av mononukleære celler for alloimmunisering | 650 |
SCL = blandet lymfocyttkultur = MLC = blandet lymfocyttkultur Denne testen består av et sett med kulturer som bestemmer i hvilken grad ektefeller gjenkjenner hverandres histokompatibilitetsantigener En lymfocytt er den sentrale cellen i immunsystemet. Hva er SCL? I. I. Guzov, Ph.D., Ch. lege ved Senter for immunologi og reproduksjon SCL = blandet lymfocyttkultur = MLC = blandet lymfocyttkultur Denne testen består av et sett med kulturer som bestemmer i hvilken grad ektefeller gjenkjenner hverandres histokompatibilitetsantigener Lymfocytter er den sentrale cellen i immunsystemet . Lymfocyttsystemet kan sammenlignes med en tilstand hvor det er sjefer og underordnede, og hver ansatt utfører en spesialisert funksjon.Hvis en lymfocytt møter noen gjenstander som er fremmede for kroppen (bakterier, virus, fremmede celler, etc.), så en immunrespons utvikler. Hvis vi snakker om om fremmede vev eller celler, vil graden av immunresponsen avhenge av likheten i konfigurasjonen av histokompatibilitetsantigener (HLA, humane leukocyttantigener, eller MHC, major histocompatibility complex, (disse er synonymer) antigener) Immunresponsen uttrykkes i utseendet til kloner (etterkommere av en celle) celler strengt spesialiserte til spesifikke fremmede faktorer). Med andre ord, hvis immunceller begynner å reagere på noe, begynner de å dele seg. Og celledeling kan vurderes ved hastigheten på DNA-syntese. Jo mer DNA som syntetiseres, jo flere celler deler seg, og jo mer aktiv utvikler immunresponsen seg. Graden av DNA-syntese kan bestemmes ved inkludering i cellekulturen av det radioaktive nukleotidet tymidin - "byggesteinen" til DNA. Evalueringen av en blandet lymfocyttkultur er basert på dette prinsippet, teknisk sett gjøres dette som følger. Blod tas fra ektefellene, hvorfra lymfocytter isoleres. Disse lymfocyttene er plassert i et næringsmedium som er gunstig for deling. Hvis du blander lymfocytter forskjellige folk, vil de begynne å reagere på hverandre. Men hvis du bare registrerer aktiviteten til en blandet kultur av forskjellige mennesker, er det umulig å forstå hvordan en spesifikk person reagerer, fordi cellene til alle deltakerne i den blandede kulturen "kommer i kamp." For å vurdere den individuelle reaksjonen av hver deltaker i kulturen er cellene til en av ektefellene utsatt for en påvirkning som umuliggjør celledeling. Imidlertid er de antigene egenskapene til lymfocytter bevart. I en slik kultur vil all celleaktivitet kun være assosiert med de levende cellene til den andre ektefellen. Ved å sammenligne ulike kombinasjoner av levende og inaktiverte cellekulturer kan man få viktig informasjon om graden av immunologisk likhet mellom ektefellene. Faktisk, i denne analysen, som er svært arbeidskrevende, testes 12 forskjellige kulturer, og reaksjonen vurderes på 3. og 5. dag av kulturen. De resulterende 24 sifrene tillater oss for å få viktig informasjon om hvordan en kvinne vil reagere på antigener vev kompatibilitet av mannen under graviditet Faktum er at opprettholdelse av graviditet er en aktiv prosess. Akkurat som med avvisningsreaksjonen er tilstrekkelig immunologisk gjenkjennelse av inntrengeren viktig for utviklingen av immunologisk toleranse i det første stadiet. Hvis denne gjenkjennelsen er treg, eller hvis den skjer for sent, blir embryoet angrepet av morens naturlige drepeceller og dør.SCL lar ikke bare vurdere tilstanden av immunologisk gjenkjennelse av ektefellenes lymfocytter av hverandre, men også å kontrollere behandlingsprosessen ved hjelp av immunisering med lymfocytter, for å velge metode og dose for immunisering, vurdere utsiktene for å bruke en eller annen korreksjonsmetode. Derfor, når en "dårlig" konfigurasjon av tall i SCL oppdages, er det ofte nødvendig å gjenta det etter terapeutiske intervensjoner Bruken av SCL, som startet i vårt senter våren 2000, har betydelig forbedret kvaliteten på behandlingen for pasienter med infertilitet, spontanabort og mislykkede forsøk IVF.
Samdyrking av lymfocytter med MHC-II-molekyler av forskjellige haplotyper forårsaker deres blasttransformasjon og spredning. De reagerende cellene tilhører T-lymfocytter og stimuleres av fremmede MHC-II-determinanter lokalisert på B-lymfocytter og makrofager. Styrken på reaksjonen avhenger av graden av forskjell mellom histokompatibilitetsantigener. For å vurdere et individs reaktivitet til en MHC-allelvariant, tilberedes en enveis lymfocyttkultur. For å gjøre dette blir stimulerende celler forhåndsbehandlet med mitomycin eller bestrålet, mens de stimulerende cellene mister evnen til å dele seg, men forblir levedyktige.
Reaktivitet i en blandet kultur av lymfocytter er et av kriteriene for å vurdere cellulær immunitet. SCL gir mulighet for HLA-typing, valg av donor-mottaker-par for vev- og organtransplantasjoner, og korrelasjon mellom HLA-antigener og visse sykdommer.
For å iscenesette reaksjonen brukes en suspensjon av lymfocytter isolert fra blodet til pasienter (giver og mottaker). Vaskede reagerende celler suspenderes i en liten mengde medium 199 (0,5 ml) og, etter telling av antall celler, justeres til 0,6 * 106 celler/ml. En suspensjon av stimulerende celler vil bli tilberedt på samme måte ved tilsetning av en løsning av mitomycin C (500 μg mitomycin C i 1 ml bufret saltvann) med en hastighet på 0,1 ml per 1 ml suspensjon. Celleblandingen inkuberes i 40 minutter ved 37 °C i et vannbad under omrøring, deretter tilsettes kaldt medium 199 til suspensjonen og cellene vaskes tre ganger ved sentrifugering. Sedimentet er suspendert i et næringskulturmedium, noe som bringer antall celler til 0,6 * 106 celler/ml.
0,1 ml cellesuspensjon i Hanks-løsning tilsettes til brønnene på en steril rundbunnet immunologisk plate og 0,1 ml cellesuspensjon som bærer MHC-allelvarianter tilsettes. Samme mengde Hanks-løsning tilsettes kontrollen.
Resultatene registreres etter inkubering av cellene ved 37 °C i 3-5 dager, avhengig av reaksjonsoppsettet ved bruk av den morfologiske eller isotopmetoden (se RBTL).
Under transplantasjon beinmarg valget av en histokompatibel donor utføres basert på resultatene av HLA-typing av giveren og mottakeren, samt ved bestemmelse av kompatibiliteten til utvalgte HLA-identiske donor-mottaker-par i SCL, som er det siste stadiet av kompatibilitetsvurderingen. For dette formålet brukes en toveis SCL-reaksjon ved bruk av en kulturmikrometode i en 96-brønns plate med en vurdering av mengden av proliferasjon ved inkludering av radioaktivt H 3 -tymidin i DNAet til prolifererende lymfocytter.
MCL (blandet kultur av lymfocytter) er en test som lar deg bestemme i hvilken grad ektefellers immunsystem gjenkjenner hverandres histokompatibilitetsantigener.
En type blodceller, lymfocytter, er grunnlaget for immunsystemet. Samtidig er det et visst hierarki blant leukocyttcellene, det er hovedceller, det er underordnede celler, som hver utfører sin egen funksjon.
Når en lymfocytt møter gjenstander som er fremmede for kroppen (celler fra en annen organisme, virus, bakterier, etc.), utvikles en immunrespons. Styrken på immunresponsen vil avhenge av likheten i strukturen til histokompatibilitetsantigener ( HLA- antigener).
Immunresponsen kommer til uttrykk i utseendet til etterkommerkloner av én celle, og disse er celler som er strengt spesialiserte til spesifikke fremmede faktorer som det kreves respons på. Med andre ord, reaksjonen immunceller noe kommer til uttrykk ved at de begynner å dele seg. Celledeling kan vurderes ved hastigheten på DNA-syntese. Jo mer DNA som syntetiseres, jo mer intensivt cellene deler seg, jo flere av dem er det, jo mer aktiv er utviklingen av immunresponsen. Intensiteten av DNA-dannelsen kan påvises ved å inkludere et radioaktivt nukleotid av en av "byggesteinene" til DNA, tymidin, i cellekulturen. Det er akkurat slik en blandingskultur av lymfocytter vurderes.
Teknisk kan det gjøres slik. Blod tas fra begge ektefellene, hvorfra lymfocytter isoleres, som deretter plasseres i et næringsmedium som er gunstig for deling. Når lymfocytter fra forskjellige mennesker blandes, begynner de å reagere på hverandre. Men hvis du bare registrerer aktiviteten til DNA-dannelse i en blandet kultur av forskjellige mennesker, er det umulig å forstå hvordan en spesifikk person reagerer på en annen spesifikk person, fordi cellene til alle de menneskene hvis lymfocytter er plassert i mediet begynner å "slåss".
For å vurdere individuell respons blir cellene til en av ektefellene utsatt for en påvirkning som gjør det umulig for dem å dele seg. Imidlertid er de antigene egenskapene til lymfocytter bevart. I dette tilfellet vil all celleaktivitet i kulturen bare være assosiert med de levende cellene til den andre ektefellen. Ved å sammenligne ulike kombinasjoner av kulturer av levende celler og celler fratatt evnen til aktivt å handle, er det mulig å få nødvendig informasjon om graden av immunologisk likhet mellom ektefellene.
Analysen involverer studiet av 12 forskjellige kulturer, vurderingen av reaksjonen der utføres på 3. og 5. dag.
Resultatet er 24 sifre som gir informasjon om reaksjonen til en bestemt kvinne på ektemannens histokompatibilitetsantigener under implantasjon og under graviditet.
Ikke bare immunavvisning, men også immunforsvar graviditet er en aktiv prosess. For utvikling av immunologisk toleranse i det første stadiet er korrekt immunologisk gjenkjennelse av mannens DNA i embryoet viktig. Hvis denne gjenkjennelsen er treg, langsom og skjer for sent, blir embryoet angrepet av morens naturlige drepeceller og dør.
SCL-analyse gjør det ikke bare mulig å vurdere tilstanden til immunologisk gjenkjennelse av ektefelles lymfocytter av hverandre, men også å overvåke behandlingsprosessen ved å bruke immunisering med lymfocytter, velge metode og dose for immunisering og vurdere utsiktene for bruk av en eller annen metode å rette opp situasjonen. Derfor, etter immunisering, må testen for SCL gjentas.
Den andre delen sendes 2. juli.
HLA-gener og immunologi for reproduksjon. Hudlapp. Lymfocyttimmunisering (LIT). SCL - blandet kultur av lymfocytter. Immunologisk faktor ved spontanabort.
HLA-gener og immunologi for reproduksjon
Så hvilket system er det mest mangfoldige i kroppen og hva gir beskyttelse mot infeksjoner? Dette er et system av immunitetsgener – HLA-gener. Alle disse genene er lokalisert på kromosom 6 og bestemmer individualiteten til immunresponsen og følsomheten for visse stimuli.
Det er her vi snakker om immunologi av reproduksjon, om hva senteret vårt gjør. Hvis du ser på nettsiden vår kan du se at det er en såkalt alloimmun faktor for infertilitet og spontanabort. Det er assosiert med et histokompatibilitetsantigen, med likhet eller ulikhet i histokompatibilitetsantigener. Risikoer i reproduksjonsprosessen av professor-immunolog Valentin Ivanovich Gavallo, som er grunnleggeren av reproduktiv immunologi i vårt land.
Immunologien til reproduksjon utviklet seg ikke umiddelbart som et eget felt. Immunologer har alltid vært interessert i mange andre ting, og immunologien til reproduksjon var minst interessant. Men fortsatt, i prosessen med utvikling innen dette feltet av medisin, har immunologien til reproduksjon dannet seg i en egen retning. På et tidspunkt ble det oppdaget at det var visse stoffer som ble kalt histokompatibilitetsantigener eller stort histokompatibilitetskompleks, eller humant leukocyttantigensystem. Hvis disse komponentene er de samme hos mennesker, kan organer transplanteres og de vil slå rot i den nye kroppen.
Hudlapp
Det viser seg at hvis det under graviditeten er en ulikhet mellom fosteret og moren når det gjelder histokompatibilitetsantigener, oppstår en respons på disse antigenene i mors kropp. Så i mors blod (og generelt i blodet til kvinner som føder) kan en enorm mengde antistoffer mot histokompatibilitetsantigener, som fosteret arvet fra faren, påvises. Og mens det var i livmoren, fremkalte fosteret en immunrespons fra morens kropp.
Forskere har antydet at effekten av disse antistoffene på fosteret er svært skadelig, siden de i noen tilfeller skadet og drepte det. Slike tilfeller kalles "gjentatt spontanabort".
For å behandle disse tilfellene og tilknyttede komplikasjoner fant de følgende metode: de tok en hudflik fra mannen og plantet den på kvinnen slik at denne fliken skulle bli immunosorbent skadelige antistoffer dannet under tidligere svangerskap. Da fikk fosteret mulighet til å utvikle seg rolig. Denne behandlingen for spontanabort begynte å bli utført i Amerika, i Tsjekkoslovakia og videre i Europa, og det fungerte virkelig.
På et tidspunkt, i Russland, i Moskva, bestemte de seg for å delta i slik behandling. Et laboratorium for klinisk immunologi ble opprettet ved Institutt for obstetrikk og gynekologi, hvis leder var Lidia Sergeevna Volkova. Hun henvendte seg til den da unge Valentin Ivanovich Govallo med tilbud om samarbeid, som hadde internert i Tsjekkoslovakia med Hasek, en kjent transplantasjonsimmunolog; og besøkte Dasses laboratorium i Paris. Gavallo begynte å utvikle vevstypesystemer mens han fortsatt var ved Institutt for traumatologi og ortopedi, og utførte eksperimenter på transplantasjon av hudfliker på mus.
En av de første pasientene var en kvinne som tidligere hadde hatt 15 spontanaborter. Selve graviditeten gikk lett for henne, men så orket hun ikke. Og hun gjennomgikk den ovenfor beskrevne behandlingen med poding av ektemannens hudflik, som også var vellykket. Og etter dette svangerskapet hadde pasienten ytterligere to vellykkede svangerskap. Og på den tiden denne saken Jeg sjokkerte rett og slett legene som utførte denne behandlingen. Siden den gang har denne teknikken begynt å bli mye brukt i Russland og nabolandene.
Vaksinasjon med lymfocytter
Og immunologien til reproduksjon fortsatte å utvikle seg. De skjønte snart at de nevnte hudflikene ikke var sorbenter, men immunstimulerende midler, forårsaker en reaksjon med avvisning. Og denne teknikken er nøyaktig den samme immuniseringen der antistoffer dannes. Og disse antistoffene er ikke skadelige, men beskyttende. De hjelper til med å gjenkjenne graviditet inne i livmorhulen i tide og sette i gang en adekvat respons på denne graviditeten med sikte på å bevare og overleve fosteret. Ytterligere forbedring av denne teknikken fulgte. Et sted på begynnelsen av 70-80-tallet stilte V.I. Govallo, på en konferanse i Novosibirsk, spørsmålet om behovet for å transplantere en hudflik. Det er mye lettere, sa han, å ta det fra mannens blod. lymfocytter(celler som har høy konsentrasjon klasse 2 histokompatibilitetsantigener) og injiser dem ganske enkelt inn i kvinnen. Og det videre resultatet vil være det samme. Etter konferansen tok professor Sidelnikova, leder for spontanabortavdelingen, kontakt med ham og tilbød seg å begynne å vaksinere pasienter ved hjelp av metoden han foreslo.
Og de begynte å utføre slike prosedyrer, og pasientene deres begynte å lykkes med å gjennomføre graviditeter. Og så skjedde det at Valentin Ivanovich kranglet med professor Sidelnikova, de begynte å jobbe separat og to metoder for lymfocytoimmunisering oppsto.
Ved Senter for obstetrikk og gynekologi ble prosedyren utført ved å administrere stoffet gjentatte ganger i små mengder.
I henhold til Govallo-metoden ble lymfesuspensjonen injisert én gang i mengden 200-250 millioner celler, og vårt senter valgte denne metoden, selv om begge metodene fungerer bra.
SCL - blandet kultur av lymfocytter
Valentin Ivanovich var vår hovedkonsulent under opprettelsen og åpningen av klinikken, og hjalp oss med å lansere metoden hans. Vi skriver nå pasienter for klasse 2 histokompatibilitetsgener. Hvis en slik likhet oppdages, immuniserer vi med mannens lymfocytter, bare vi har også lagt til her blandet kultur av lymfocytter (MSC).
Jeg skal forklare hvorfor. Da jeg fortsatt jobbet ved avdelingen og studerte på forskerskolen, et sted på slutten av 80-tallet, var vår kliniske base det 7. fødesykehuset, nærmest Kreml, på Vozdvizhenka. Etter timene dro jeg til Lenin-biblioteket og så gjennom alle de nye elementene i publikasjoner fra forskjellige land fred.
En av dem var en interessant flerbinds "Manual of Obstetrics and Gynecology" fra Tyskland, der et eget bind ble viet spontanabort. Og i dette bindet var det et helt kapittel om immunologien til spontanabort, som foreslo bruk av blandede kulturer av lymfocytter for å identifisere par som virkelig trenger immunisering, og for å avskjære de som ikke trenger denne prosedyren. Dermed visste jeg om denne tilleggsteknikken og begynte å bruke den i våre klinikker, selv om mange ikke bruker den på grunn av kompleksitet. Ved vårt senter er dette et eget program om alloimmun infertilitet.
Immunologisk faktor i spontanabort: rollen til HLA-matcher
Men jeg bemerker at du ikke bør overdrive problemet med den immunologiske faktoren i tilfelle spontanabort. Ja, det er betydelig, men det er ikke det eneste problemet med spontanabort.
La oss her gå litt tilbake til genetikkens opprinnelse. På et tidspunkt i utviklingen av teorier om seksuell reproduksjon oppsto denne ideen om kompatibilitet med vevsantigener. Fordi seksuell reproduksjon produserer mangfold primært i histokompatibilitetsantigener, i antigener til immunsystemproteiner. Og så bestemte de seg for å finne en befolkning der store familier oppmuntres, hvor prevensjon ikke brukes, og hvor sunt bilde liv. For å gjøre det lettere å identifisere faktorer som påvirker begynnelsen og forløpet av svangerskapet. Og de fant en passende befolkning i form av det Hatterite kristne fellesskapet (Hutterite Brotherhood).
I en slik populasjon er ektefellene helt like når det gjelder annenklasses histokompatibilitetsantigener. Og blant deres ektepar ble det funnet at perioden mellom begynnelsen av seksuell aktivitet og fødselen av det første barnet ble økt; antall tilfeller av spontanabort har økt; og intervallene mellom fødsler har økt. Det er ingen tilfeller av infertilitet. Og nesten alle slike ektepar har mer enn 10 barn.
Fra denne studien kan vi konkludere med at påvirkningen av histokompatibilitetsfaktoren fortsatt er begrenset. Derfor, når vi har et par med lignende histokompatibilitetsgener (og slike par er bare ca. 15%) kombinert med spontanabort, må vi gjennomføre mer inngående undersøkelser på alle områder relatert til spontanabort. Da kan behovet for en lymfocytoimmuniseringsprosedyre identifiseres nøyaktig.