В момента се обръща голямо внимание на изследването на ролята имунни механизмив репродуктивния процес, тъй като нарушението им води до развитие на безплодие и ранно прекъсванебременност. Изследванията на имунологичните параметри и връзката им с репродуктивните процеси доведоха до заключението за необходимостта от преструктуриране имунна системапри подготовката на тялото на майката за бременност, като се започне от периода на овулация, по време на имплантирането на ембриона и по време на ранен периодбременност.
Една от най-сложните и трудни за диагностициране причини за безплодие и повтарящи се спонтанни аборти е имунната дисфункция.
С цел своевременно откриване на имунологично безплодие, лабораторията по имунология на репродукцията провежда изследване на семейни двойки с помощта на следните методидиагностика:
- изследване на нивото на пролиферативен отговор на лимфоцитите на жената към антигените на партньора (в смесена култура на лимфоцити)
- определяне на активността на блокиращите фактори в кръвния серум на жената.
- оценка на количественото съдържание на субпопулации от естествени цитотоксични клетки в периферната кръв на жената.
- разширена имунограма
- изследване на съдържанието на регулаторни клетки с супресорна активност в периферната кръв.
- при идентифициране на клинични и лабораторни признациПрепоръчва се имунологично изследване на пациенти с безплодие медицинска процедура– алоимунизация с лимфоцити на съпруга, която се извършва по индивидуална схема.
Необходима консултация:
- ако при липса на гинекологични и ендокринни заболяванияПри редовна полова активност в продължение на една година няма бременност.
- при повтарящи се (повече от веднъж) спонтанни прекъсвания на бременността (спонтанен аборт).
- при неуспешно IVFв анамнезата.
- когато има заплаха от прекъсване на истинска бременност.
Ако се открият нарушения, се предписва процедура за имунокорекция на нарушенията алоимунизация с партньорски лимфоцити (AIL). Този методлечението е одобрено за използване от Федералната служба за надзор в здравеопазването (лиценз FS № 2009/179 от 02.07.2009 г.)
Процедурата се извършва само ако партньорът има отрицателни резултати от тестове за HIV инфекция, сифилис и вирусен хепатит(B, C). Не са установени усложнения при AIL. Методът AIL има изразен имунокорективен ефект и повишава ефективността на лечението на безплодието, както в естествения цикъл, така и при ин витро оплождане (IVF). Също така се предписва при неуспешни опити за ин витро оплождане.
AIL се провежда веднъж на всеки 28-30 дни (в съответствие с менструален цикължени) в първата фаза на цикъла. Първият курс включва 3 AIL процедури. След 2-рата процедура двойката отново се явява на контролен тест. Ако има положителна динамика, третата процедура на AIL е последна. Ако няма динамика, дозата на клетките за имунизация се увеличава и се провежда 2-ри курс, включващ 2 процедури. След контролен анализв някои случаи е необходимо да се предпише 3-ти курс на имунизация с нарастваща доза клетки. След достигане на стандартни стойности положителен ефекттрае 6-8 месеца.
За периода от 2003 до 2013г. В лабораторията по клетъчна имунотерапия са извършени около 3000 алоимунизационни процедури с партньорски лимфоцити. За тази процедура от кръвта на партньора се изолират само лимфоцити, които винаги присъстват в семенната течност. В други страни* от 20 години също се провежда процедурата по алоимунизация, която помага на жената да износи и роди здраво дете.
| Вид услуга | цена, търкайте. |
| Тест за трансформация на лимфоцити (откриване на сесибилизация на 1 век) | 1650 |
| Тест за трансформация на лимфоцити (Откриване на сесибилизация на 2b-va) | 2 900 |
| Тест за трансформация на лимфоцити (Откриване на сесибилизация на 3b-va) | 3 900 |
| Тест за лимфоцитна трансформация (имунологично изследване за безплодие) | 3 200 |
| Разширена имунограма с маркери за активиране | 4 625 |
| Цялостно изследване на имунния статус | 4 125 |
| Ваксинация (алоимунизация с лимфоцити на партньора 1 доза) | 1 900 |
| Ваксинация (алоимунизация с лимфоцити на партньора, 2-ра доза) | 2 750 |
| Ваксинация (алоимунизация с лимфоцити на партньора, 3-та доза) | 3 400 |
| Изследване на CD16+/CD56+ лимфоцити (имунологично изследване за безплодие само NK клетки) | 1 250 |
| Изследване на активността на макрофагите (кондиционирана среда на макрофагите) | 9 400 |
| Изследване на активността на макрофагите (кондиционирана среда) | 1 500 |
| Криоконсервация на мононуклеарни клетки за алоимунизация | 650 |
SCL = смесена лимфоцитна култура = MLC = смесена лимфоцитна култура. Този тест се състои от набор от култури, които определят степента, до която съпрузите разпознават взаимно антигените на хистосъвместимостта. Лимфоцитът е централната клетка на имунната система. Какво е SCL? I. д-р И. Гузов, гл. лекар в Центъра за имунология и репродукция SCL = смесена лимфоцитна култура = MLC = смесена лимфоцитна култура Този тест се състои от набор от култури, които определят степента, до която съпрузите разпознават взаимно антигените на хистосъвместимостта Лимфоцитът е централната клетка на имунната система . Лимфоцитната система може да се сравни със състояние, в което има началници и подчинени и всеки служител изпълнява специализирана функция.Ако лимфоцитът се сблъска с чужди за тялото обекти (бактерии, вируси, чужди клетки и др.), Тогава имунен отговор се развива. Ако ние говорим заза чужди тъкани или клетки, степента на имунния отговор ще зависи от сходството на конфигурацията на антигените на хистосъвместимостта (HLA, човешки левкоцитни антигени или MHC, основен комплекс на хистосъвместимост, (това са синоними) антигени). Имунният отговор се изразява при появата на клонинги (потомци на една клетка) клетки, строго специализирани към специфични чужди фактори). С други думи, ако имунните клетки започнат да реагират на нещо, те започват да се делят. А клетъчното делене може да се оцени по скоростта на синтеза на ДНК. Колкото повече ДНК се синтезира, толкова повече клетки се делят и толкова по-активен е имунният отговор. Степента на синтез на ДНК може да се определи чрез включването в клетъчната култура на радиоактивния нуклеотид тимидин - "градивния елемент" на ДНК. На този принцип се основава оценката на смесена лимфоцитна култура.Технически това се прави по следния начин. От съпрузите се взема кръв, от която се изолират лимфоцити. Тези лимфоцити се поставят в хранителна среда, благоприятна за делене. Ако смесите лимфоцити различни хора, те ще започнат да реагират един на друг. Въпреки това, ако просто запишете активността на смесена култура от различни хора, е невъзможно да разберете как реагира конкретен човек, тъй като клетките на всички участници в смесената култура „влизат в битка“. За да се оцени индивидуалната реакция на всеки участник в културата, клетките на един от съпрузите са изложени на въздействие, което прави клетъчното делене невъзможно. Антигенните свойства на лимфоцитите обаче се запазват. В такава култура цялата клетъчна активност ще бъде свързана само с живите клетки на другия съпруг. Чрез сравняване на различни комбинации от живи и инактивирани клетъчни култури може да се получи важна информацияотносно степента на имунологично сходство на съпрузите.Всъщност при този анализ, който е много трудоемък, се тестват 12 различни култури и реакцията се оценява на 3-ия и 5-ия ден от културата.Получените 24 цифри позволяват за да получим важна информация за това как жената ще реагира на антигени тъканна съвместимост на съпруга по време на бременност Факт е, че поддържането на бременността е активен процес. Точно както при реакцията на отхвърляне, адекватното имунологично разпознаване на натрапника е важно за развитието на имунологична толерантност на първия етап. Ако това разпознаване е бавно или ако се случи твърде късно, ембрионът се атакува от естествените клетки убийци на майката и умира.SCL позволява не само да се оцени състоянието на имунологичното разпознаване на лимфоцитите на съпрузите един от друг, но и да се контролира процеса на лечение с помощта на имунизация с лимфоцити, за да изберете метода и дозата на имунизацията, да оцените перспективите за използване на един или друг метод за корекция.Следователно, ако се открие „лоша“ конфигурация на числата в SCL, често е необходимо да се повтори след терапевтични интервенции Използването на SCL, което започна в нашия център през пролетта на 2000 г., значително подобри качеството на лечение на пациенти с безплодие, спонтанен аборт и неуспешни опитиИН ВИТРО.
Ко-култивирането на лимфоцити, притежаващи МНС-II молекули от различни хаплотипове, предизвиква тяхната бластна трансформация и пролиферация. Отговарящите клетки принадлежат към Т-лимфоцитите и се стимулират от чужди MHC-II детерминанти, разположени върху В-лимфоцити и макрофаги. Силата на реакцията зависи от степента на разлика между антигените на хистосъвместимостта. За да се оцени реактивността на индивида към MHC алелен вариант, се приготвя еднопосочна лимфоцитна култура. За да направите това, стимулиращите клетки се третират предварително с митомицин или се облъчват, докато стимулиращите клетки губят способността си да се делят, но остават жизнеспособни.
Реактивността в смесена култура от лимфоцити е един от критериите за оценка на клетъчния имунитет. SCL позволява HLA типизиране, избор на двойки донор-реципиент за трансплантация на тъкани и органи и корелация между HLA антигени и определени заболявания.
За поставяне на реакцията се използва суспензия от лимфоцити, изолирани от кръвта на пациенти (донор и реципиент). Промитите реагиращи клетки се суспендират в малко количество среда 199 (0.5 ml) и след преброяване на броя на клетките се регулира до 0.6 * 106 клетки/ml. Суспензия от стимулиращи клетки ще бъде приготвена по подобен начин с добавяне на разтвор на митомицин С (500 μg митомицин С в 1 ml буфериран физиологичен разтвор) със скорост 0,1 ml на 1 ml суспензия. Клетъчната смес се инкубира в продължение на 40 минути при 37 °C във водна баня, като се разбърква, след това към суспензията се добавя студена среда 199 и клетките се промиват три пъти чрез центрофугиране. Утайката се суспендира в хранителна културална среда, довеждайки броя на клетките до 0,6 * 106 клетки/ml.
0.1 ml клетъчна суспензия в разтвор на Ханкс се добавя към ямките на стерилна облодънна имунологична плака и се добавя 0.1 ml клетъчна суспензия, носеща МНС алелни варианти. Същото количество разтвор на Ханкс се добавя към контролата.
Резултатите се записват след инкубиране на клетките при 37 °C в продължение на 3-5 дни, в зависимост от настройката на реакцията, като се използва морфологичен или изотопен метод (вижте RBTL).
По време на трансплантация костен мозъкизборът на хистосъвместим донор се извършва въз основа на резултатите от HLA типизирането на донора и реципиента, както и при определяне на съвместимостта на избрани HLA-идентични двойки донор-реципиент в SCL, което е последният етап от оценката на съвместимостта. За тази цел се използва двупосочна SCL реакция, като се използва културен микрометод в 96-ямкова плака с оценка на количеството на пролиферация чрез включването на радиоактивен Н3-тимидин в ДНК на пролифериращи лимфоцити.
MCL (смесена култура на лимфоцити) е тест, който ви позволява да определите степента, до която имунната система на съпрузите разпознава взаимно антигените на хистосъвместимостта.
Един вид кръвни клетки, лимфоцитите, са в основата на имунната система. В същото време има определена йерархия сред левкоцитните клетки, има основни клетки, има подчинени клетки, всяка от които изпълнява своя собствена функция.
Когато лимфоцитът се сблъска с чужди за тялото обекти (клетки на друг организъм, вируси, бактерии и т.н.), се развива имунен отговор. Силата на имунния отговор ще зависи от сходството в структурата на антигените на хистосъвместимостта ( HLA-антигени).
Имунният отговор се изразява в появата на потомствени клонове на една клетка, а това са клетки, строго специализирани към специфични чужди фактори, към които е необходим отговор. С други думи, реакцията имунни клеткинещо се изразява с това, че започват да се делят. Клетъчното делене може да се оцени по скоростта на синтеза на ДНК. Колкото повече ДНК се синтезира, толкова по-интензивно се делят клетките, колкото повече от тях има, толкова по-активно е развитието на имунния отговор. Интензивността на образуване на ДНК може да бъде открита чрез включване на радиоактивен нуклеотид на един от „градивните елементи“ на ДНК, тимидин, в клетъчната култура. Точно така се оценява смесената култура от лимфоцити.
Технически може да се направи така. Взема се кръв от двамата съпрузи, от която се изолират лимфоцити, които след това се поставят в хранителна среда, благоприятна за разделяне. Когато лимфоцитите от различни хора се смесят, те започват да реагират един на друг. Въпреки това, ако просто запишете активността на образуване на ДНК в смесена култура от различни хора, е невъзможно да разберете как конкретен човек реагира на друг конкретен човек, защото клетките на всички тези хора, чиито лимфоцити са поставени в средата, започват да "битка".
За да се оцени индивидуалният отговор, клетките на един от съпрузите се подлагат на въздействие, което прави невъзможно тяхното делене. Антигенните свойства на лимфоцитите обаче се запазват. В този случай цялата клетъчна активност в културата ще бъде свързана само с живите клетки на другия съпруг. Чрез сравняване на различни комбинации от култури от живи клетки и клетки, лишени от способността за активно действие, е възможно да се получи необходимата информация за степента на имунологично сходство на съпрузите.
Анализът включва изследване на 12 различни култури, оценката на реакцията при които се извършва на 3-ия и 5-ия ден.
Резултатът е 24 цифри, които предоставят информация за реакцията на конкретна жена към антигените на хистосъвместимостта на нейния съпруг по време на имплантиране и по време на бременност.
Не само имунното отхвърляне, но и имунна защитабременността е активен процес. За развитието на имунологична толерантност на първия етап е важно правилното имунологично разпознаване на ДНК на съпруга, съдържаща се в ембриона. Ако това разпознаване е бавно, бавно и се случи твърде късно, тогава ембрионът е атакуван от естествените клетки убийци на майката и умира.
SCL анализът позволява не само да се оцени състоянието на имунологичното разпознаване на лимфоцитите на съпрузите един от друг, но и да се наблюдава процеса на лечение с помощта на имунизация с лимфоцити, да се избере методът и дозата на имунизацията и да се оценят перспективите за използване на един или друг метод за коригиране на ситуацията. Следователно, след имунизация, тестът за SCL трябва да се повтори.
Втората част ще бъде излъчена на 2 юли.
HLA гени и имунология на репродукцията. Кожно капче. Лимфоцитна имунизация (LIT). SCL - смесена култура на лимфоцити. Имунологичен факторв случай на спонтанен аборт.
HLA гени и имунология на репродукцията
И така, коя система е най-разнообразна в тялото и какво осигурява защита срещу инфекции? Това е система от гени на имунитета - HLA гени. Всички тези гени са разположени на хромозома 6 и определят индивидуалността на имунния отговор и чувствителността към определени стимули.
Това е мястото, където говорим имунология на репродукцията, за това какво прави нашият център. Ако разгледате нашия сайт, можете да видите, че има т.нар алоимуннифактор за безплодие и спонтанен аборт. Свързва се с антиген на хистосъвместимост, със сходство или различие в антигените на хистосъвместимост. Рискове в репродуктивния процес от професор-имунолог Валентин Иванович Гавало, който е основоположник на репродуктивната имунология у нас.
Имунологията на репродукцията не се развива веднага като отделна област. Имунолозите винаги са се интересували от много други неща, а имунологията на възпроизводството е била най-малко интересна. Но все пак в процеса на развитие в тази област на медицината имунологията на репродукцията се оформи в отделна посока. В един момент беше открито, че има определени вещества, които бяха наречени антигени на хистосъвместимостили основен комплекс на хистосъвместимост, или човешка левкоцитна антигенна система. Ако тези компоненти са еднакви при хората, тогава органите могат да бъдат трансплантирани и те ще се вкоренят в новото тяло.
Кожно капче
Оказва се, че ако по време на бременност има разлика между плода и майката по отношение на антигените на хистосъвместимостта, тогава в тялото на майката възниква отговор на тези антигени. Тогава в кръвта на майката (и като цяло в кръвта на раждащите жени) може да се открие огромно количество антитела срещу антигени на хистосъвместимост, които плодът е наследил от бащата. И докато е в утробата, плодът предизвиква имунен отговор от тялото на майката.
Изследователите предполагат, че ефектът на тези антитела върху плода е много вреден, тъй като в някои случаи те го увреждат и убиват. Такива случаи се наричат "повтарящ се спонтанен аборт".
За да лекуват тези случаи и свързаните с тях усложнения, те откриха следния метод: те взеха парче кожа от съпруга и го поставиха върху жената, така че това парче да бъде имуносорбентвредни антитела, образувани по време на предишни бременности. Тогава плодът е имал възможност да се развива спокойно. Това лечение на спонтанен аборт започва да се провежда в Америка, в Чехословакия и по-нататък в Европа и наистина работи.
В един момент в Русия, в Москва, решиха да се занимават с такова лечение. В Института по акушерство и гинекология е създадена лаборатория по клинична имунология, чийто ръководител е Лидия Сергеевна Волкова. Тя се обръща към младия тогава Валентин Иванович Говало с предложение за сътрудничество, който е бил стажант в Чехословакия при Хашек, известен имунолог по трансплантации; и посети лабораторията на Dasse в Париж. Гавало започва да разработва системи за типизиране на тъкани, докато е още в Института по травматология и ортопедия, и провежда експерименти за трансплантация на кожни клапи върху мишки.
Един от първите пациенти е жена, която преди това е имала 15 спонтанни аборта. Самата бременност й дошла леко, но после не издържала. И тя претърпя гореописаното лечение с присаждане на кожно ламбо на съпруга си, което също беше успешно. И след тази бременност пациентката имаше още две успешни бременности. И по това време този случайНаправо шокирах лекарите, които извършваха това лечение. Оттогава тази техника започна да се използва широко в Русия и съседните страни.
Имунизация с лимфоцити
И имунологията на възпроизводството продължи да се развива. Те скоро разбраха, че споменатите кожни клапи не са сорбенти, а имуностимуланти,предизвиквайки реакция на отхвърляне. И тази техника е точно същата имунизация, по време на която се образуват антитела. И тези антитела не са увреждащи, а защитни. Те помагат да се разпознае навреме бременността в маточната кухина и да се започне адекватен отговор на тази бременност, насочен към запазване и оцеляване на плода. Последва по-нататъшно усъвършенстване на тази техника. Някъде в началото на 70-80-те години V.I. Govallo на конференция в Новосибирск зададе въпроса за необходимостта от трансплантация на кожен капак. Много по-лесно е, каза той, да го вземеш от кръвта на съпруга си. лимфоцити(клетки, които имат висока концентрацияклас 2 антигени на хистосъвместимост) и просто ги инжектирайте в жената. И по-нататъшният резултат ще бъде същият. След конференцията проф. Сиделникова, началник на отделението по спонтанни аборти, се свърза с него и предложи да започне имунизация на пациентите по предложения от него метод.
И те започнаха да извършват такива процедури и техните пациенти започнаха успешно да носят бременност. И тогава се случи така, че Валентин Иванович се скара с професор Сиделникова, те започнаха да работят поотделно и възникнаха два метода на лимфоцитоимунизация.
В Центъра по акушерство и гинекология процедурата е извършена чрез многократно прилагане на лекарството в малки количества.
По метода Govallo лимфната суспензия се инжектира еднократно в количество от 200-250 милиона клетки и нашият център избра този метод, въпреки че и двата метода работят добре.
SCL - смесена култура на лимфоцити
Валентин Иванович беше наш основен консултант по време на създаването и откриването на клиниката и ни помогна да пуснем неговия метод. Сега типизираме пациенти за клас 2 гени за хистосъвместимост. Ако се открие такова сходство, ние имунизираме с лимфоцитите на съпруга, само че ние също добавихме тук смесена култура на лимфоцити (MSC).
Ще обясня защо. Когато все още работех в катедрата и учех в аспирантура, някъде в края на 80-те години, нашата клинична база беше 7-ми родилен дом, най-близкият до Кремъл, на Воздвиженка. След часовете отидох в библиотеката на Ленин и прегледах всички нови елементи в публикациите от различни странимир.
Един от тях беше интересен многотомен „Наръчник по акушерство и гинекология“ от Германия, където отделен том беше посветен на спонтанния аборт. И в този том имаше цяла глава за имунологията на спонтанния аборт, която предлагаше използването на смесени култури от лимфоцити за идентифициране на двойки, които наистина се нуждаят от имунизация, и за отрязване на тези, които не се нуждаят от тази процедура. Така знаех за тази допълнителна техника и започнах да я използвам в нашите клиники, въпреки че мнозина не я използват поради известна сложност. В нашия център това е отделна програма за алоимунно безплодие.
Имунологичен фактор при спонтанен аборт: ролята на HLA съвпаденията
Но отбелязвам, че не трябва да преувеличавате проблема с имунологичния фактор в случай на спонтанен аборт. Да, значителен е, но не е единственият проблем на спонтанния аборт.
Тук нека се върнем малко назад към произхода на генетиката. В някакъв момент от развитието на теориите за половото размножаване възниква тази идея за съвместимостта с тъканните антигени. Тъй като сексуалното размножаване създава разнообразие главно в антигените на хистосъвместимостта, в антигените на протеините на имунната система. И тогава те решиха да намерят население, където се насърчават големите семейства, където не се използва контрацепция и къде здрав образживот. За по-лесно идентифициране на факторите, влияещи върху настъпването и протичането на бременността. И те намериха подходящо население под формата на Хатеритската християнска общност (Хутеритско братство).
В такава популация съпрузите са напълно сходни по отношение на втори клас антигени на хистосъвместимост. И сред техните семейни двойки беше установено, че периодът между началото на сексуалната активност и раждането на първото дете е увеличен; броят на случаите на спонтанен аборт се е увеличил; и интервалите между ражданията са се увеличили. Няма случаи на безплодие. И почти всички такива семейни двойки имат повече от 10 деца.
От това изследване можем да заключим, че влиянието на фактора на хистосъвместимост все още е ограничено. Ето защо, когато имаме двойка с подобни гени на хистосъвместимост (а такива двойки са само около 15%), съчетани със спонтанен аборт, трябва да проведем по-задълбочени изследвания във всички области, свързани със спонтанния аборт. Тогава може точно да се установи необходимостта от процедура за лимфоцитоимунизация.