Napapanahong pagsusuri Ang impeksyon sa HIV ay nagiging lubhang mahalagang panukala, dahil ang mas maagang pagsisimula ng paggamot ay maaaring higit na matukoy karagdagang pag-unlad sakit at pahabain ang buhay ng pasyente. Sa nakalipas na mga taon, nagkaroon ng makabuluhang pag-unlad sa pagtukoy sa kakila-kilabot na sakit na ito: ang mga mas lumang sistema ng pagsubok ay pinapalitan ng mga mas advanced, ang mga paraan ng pagsusuri ay nagiging mas naa-access, at ang kanilang katumpakan ay tumataas nang malaki.
Sa artikulong ito ay pag-uusapan natin ang tungkol sa mga modernong pamamaraan para sa pag-diagnose ng impeksyon sa HIV, ang kaalaman kung saan ay kapaki-pakinabang para sa napapanahong paggamot problemang ito at pagpapanatili ng normal na kalidad ng buhay ng pasyente.
Mga pamamaraan ng diagnostic ng HIV
Sa Russia, ang isang karaniwang pamamaraan ay isinasagawa upang masuri ang impeksyon sa HIV, na kinabibilangan ng dalawang antas:
- ELISA sistema ng pagsubok(pagsusuri ng screening);
- immunoblotting (IB).
Ang iba pang mga pamamaraan ay maaari ding gamitin para sa diagnosis:
- mabilis na pagsusulit.
Mga sistema ng pagsubok ng ELISA
Sa unang yugto ng diagnosis, ginagamit ang isang screening test (ELISA) upang makita ang impeksyon sa HIV, na batay sa mga protina ng HIV na nilikha sa mga laboratoryo na kumukuha ng mga partikular na antibodies na ginawa sa katawan bilang tugon sa impeksiyon. Matapos ang kanilang pakikipag-ugnayan sa mga reagents (enzymes) ng sistema ng pagsubok, nagbabago ang kulay ng indicator. Susunod, ang mga pagbabago sa kulay na ito ay pinoproseso gamit ang mga espesyal na kagamitan, na tumutukoy sa resulta ng pagsusuri na isinagawa.
Ang ganitong mga pagsusuri sa ELISA ay maaaring magpakita ng mga resulta sa loob ng ilang linggo pagkatapos ng pagpapakilala ng impeksyon sa HIV. Ang pagsubok na ito ay hindi tumutukoy sa pagkakaroon ng virus, ngunit nakikita ang paggawa ng mga antibodies dito. Minsan, sa katawan ng tao, ang paggawa ng mga antibodies sa HIV ay nagsisimula pagkatapos ng 2 linggo ng impeksyon, ngunit sa karamihan ng mga tao, ang mga ito ay ginawa para sa higit pa. mamaya, pagkatapos ng 3-6 na linggo.
Mayroong apat na henerasyon ng mga pagsusulit sa ELISA na may iba't ibang sensitivity. Sa mga nagdaang taon, ang mga sistema ng pagsubok sa ikatlo at ikaapat na henerasyon ay lalong ginagamit, na nakabatay sa mga sintetikong peptide o mga recombinant na protina at may higit na pagtitiyak at katumpakan. Magagamit ang mga ito upang masuri ang impeksyon sa HIV, subaybayan ang pagkalat ng HIV, at tiyakin ang kaligtasan kapag sinusuri ang donasyong dugo. Ang katumpakan ng henerasyon III at IV ELISA test system ay 93-99% (ang mga pagsubok na ginawa sa mga bansa ay mas sensitibo Kanlurang Europa – 99%).
Upang magsagawa ng ELISA test, 5 ml ng dugo ang kinuha mula sa ugat ng pasyente. sa pagitan ng huling appointment ang pagkain at pagsusuri ay dapat tumagal ng hindi bababa sa 8 oras (bilang panuntunan, ito ay ginaganap sa umaga sa walang laman na tiyan). Inirerekomenda na kumuha ng naturang pagsusuri nang hindi mas maaga kaysa sa 3 linggo pagkatapos ng pinaghihinalaang impeksyon (halimbawa, pagkatapos ng hindi protektadong pakikipagtalik sa isang bagong sekswal na kasosyo).
Ang mga resulta ng pagsusulit sa ELISA ay makukuha sa loob ng 2-10 araw:
- negatibong resulta: nagpapahiwatig ng kawalan ng impeksyon sa HIV at hindi nangangailangan ng pakikipag-ugnayan sa isang espesyalista;
- maling negatibong resulta: maaaring maobserbahan sa maagang yugto impeksyon (hanggang 3 linggo), na may mga huling yugto AIDS na may malubhang immunosuppression at hindi tamang paghahanda ng dugo;
- maling positibong resulta: maaaring maobserbahan sa ilang mga sakit at sa kaso ng hindi tamang paghahanda ng dugo;
- positibong resulta: nagpapahiwatig ng impeksyon impeksyon sa HIV, ay nangangailangan ng pagsasagawa ng IB at ang pasyente na makipag-ugnayan sa isang espesyalista sa AIDS center.
Bakit maaaring magbigay ng maling positibong resulta ang pagsusuri sa ELISA?
Ang maling positibong resulta ng pagsusuri sa HIV ELISA ay maaaring mangyari dahil sa hindi tamang pagproseso ng dugo o sa mga pasyenteng may mga sumusunod na kondisyon at sakit:
- multiple myeloma;
- mga nakakahawang sakit na dulot ng Epstein-Barr virus;
- estado pagkatapos ;
- mga sakit sa autoimmune;
- laban sa background ng pagbubuntis;
- kondisyon pagkatapos ng pagbabakuna.
Para sa mga kadahilanang inilarawan sa itaas, ang mga nonspecific na cross-reacting antibodies ay maaaring naroroon sa dugo, na ang paggawa nito ay hindi pinukaw ng impeksyon sa HIV.
Sa mga nagdaang taon, ang dalas ng mga maling-positibong resulta ay makabuluhang nabawasan dahil sa paggamit ng mga sistema ng pagsubok sa henerasyon III at IV, na naglalaman ng mas sensitibong peptide at mga recombinant na protina (sila ay synthesize gamit ang genetic engineering sa vitro). Matapos ang pagpapakilala ng mga naturang pagsusuri sa ELISA, ang dalas ng mga maling positibong resulta ay bumaba nang malaki at humigit-kumulang 0.02-0.5%.
Mali ang pagtuklas positibong resulta ay hindi nangangahulugan na ang isang tao ay nahawaan ng HIV. Sa ganitong mga kaso, inirerekomenda ng WHO ang pagsasagawa ng isa pang ELISA test (kinakailangang IV generation).
Ang dugo ng pasyente ay ipinadala sa isang reference o arbitration laboratory na may markang "repeat" at sinuri gamit ang IV generation ELISA test system. Kung ang resulta ng bagong pagsusuri ay negatibo, ang unang resulta ay itinuturing na mali (false positive) at ang IS ay hindi isinasagawa. Kung ang resulta ay positibo o kaduda-dudang sa panahon ng ikalawang pagsusuri, ang pasyente ay dapat sumailalim sa IB pagkatapos ng 4-6 na linggo upang kumpirmahin o pabulaanan ang impeksyon sa HIV.
Immune blotting
Ang isang tiyak na diagnosis ng impeksyon sa HIV ay maaari lamang gawin pagkatapos makakuha ng isang positibong resulta ng immunoblotting (IB). Upang maisakatuparan ito, isang nitrocellulose strip ang ginagamit, kung saan inilalapat ang mga viral protein.
Ang blood sampling para sa IB ay isinasagawa mula sa isang ugat. Susunod, sumasailalim ito sa espesyal na pagproseso at ang mga protina na nakapaloob sa suwero nito ay pinaghiwalay sa isang espesyal na gel ayon sa kanilang singil at molekular na timbang (ang pagmamanipula ay isinasagawa gamit ang mga espesyal na kagamitan sa ilalim ng impluwensya ng isang electric field). Ang isang nitrocellulose strip ay inilalapat sa serum gel ng dugo at ang blotting ("blotting") ay isinasagawa sa isang espesyal na silid. Ang strip ay pinoproseso at kung ang mga materyales na ginamit ay naglalaman ng mga antibodies sa HIV, sila ay nagbubuklod sa mga antigenic na banda sa IB at lumilitaw bilang mga linya.
Ang IB ay itinuturing na positibo kung:
- ayon sa pamantayan ng American CDC - mayroong dalawa o tatlong linya na gp41, p24, gp120/gp160 sa strip;
- ayon sa pamantayan ng American FDA, ang strip ay may dalawang linya na p24, p31 at isang linya na gp41 o gp120/gp160.
Sa 99.9% ng mga kaso, ang isang positibong resulta ng IB ay nagpapahiwatig ng impeksyon sa HIV.
Kung walang mga linya, ang IB ay negatibo.
Kapag tinutukoy ang mga linya na may gr160, gr120 at gr41, nagdududa ang IB. Maaaring mangyari ang resultang ito kapag:
- mga sakit sa oncological;
- pagbubuntis;
- madalas na pagsasalin ng dugo.
Sa ganitong mga kaso, inirerekumenda na ulitin ang pag-aaral gamit ang isang kit mula sa ibang kumpanya. Kung pagkatapos ng karagdagang IB ang resulta ay nananatiling nagdududa, kung gayon ang pagmamasid ay kinakailangan para sa anim na buwan (Isinasagawa ang IB tuwing 3 buwan).
Polymerase chain reaction
Maaaring makita ng PCR test ang RNA ng virus. Ang pagiging sensitibo nito ay medyo mataas at nagbibigay-daan ito sa pagtuklas ng impeksyon sa HIV sa loob ng 10 araw pagkatapos ng impeksyon. Sa ilang mga kaso, ang PCR ay maaaring magbigay ng mga false-positive na resulta, dahil ang mataas na sensitivity nito ay maaari ring tumugon sa mga antibodies sa iba pang mga impeksiyon.
Ang diagnostic technique na ito ay mahal, nangangailangan ng espesyal na kagamitan at mataas na kwalipikado mga espesyalista. Ang mga kadahilanang ito ay hindi ginagawang posible na magsagawa ng mass testing sa populasyon.
Ginagamit ang PCR sa mga sumusunod na kaso:
- upang makita ang HIV sa mga bagong silang na ipinanganak mula sa mga ina na nahawaan ng HIV;
- upang matukoy ang HIV sa "panahon ng window" o sa kaso ng pagdududa IB;
- upang makontrol ang konsentrasyon ng HIV sa dugo;
- para sa pag-aaral ng donor blood.
Ang PCR test lamang ay hindi gumagawa ng diagnosis ng HIV, ngunit isinasagawa bilang a karagdagang pamamaraan diagnostic upang malutas ang mga kontrobersyal na sitwasyon.
Ipahayag ang mga pamamaraan
Ang isa sa mga inobasyon sa HIV diagnostics ay ang mabilis na pagsusuri, ang mga resulta nito ay maaaring masuri sa loob ng 10-15 minuto. Ang pinaka-epektibo at tumpak na mga resulta ay nakuha gamit ang mga immunochromatographic na pagsusuri batay sa prinsipyo ng daloy ng capillary. Ang mga ito ay mga espesyal na piraso kung saan inilapat ang dugo o iba pang mga likido sa pagsubok (laway, ihi). Kung ang mga antibodies sa HIV ay naroroon, pagkatapos ng 10-15 minuto isang kulay at control strip ang lilitaw sa pagsusuri - isang positibong resulta. Kung negatibo ang resulta, ang control strip lang ang lalabas.
Tulad ng mga pagsusulit sa ELISA, ang mga resulta ng mabilis na pagsusuri ay dapat kumpirmahin ng pagsusuri ng IB. Pagkatapos lamang nito ay maaaring gawin ang diagnosis ng impeksyon sa HIV.
May available na mga rapid home testing kit. Ang OraSure Technologies1 test (USA) ay inaprubahan ng FDA, available over the counter at maaaring magamit upang tuklasin ang HIV. Pagkatapos ng pagsusuri, kung positibo ang resulta, inirerekomenda ang pasyente na sumailalim sa pagsusuri sa isang dalubhasang sentro upang kumpirmahin ang diagnosis.
Iba pang mga pagsubok para sa gamit sa bahay ay hindi pa naaaprubahan ng FDA at ang kanilang mga resulta ay maaaring napakaduda.
Sa kabila ng katotohanan na ang mga mabilis na pagsusuri ay mas mababa sa katumpakan sa IV generation na mga pagsubok sa ELISA, ang mga ito ay malawakang ginagamit para sa karagdagang pagsusuri ng populasyon.
Maaari kang kumuha ng mga pagsusuri upang matukoy ang impeksyon sa HIV sa anumang klinika, central district hospital o mga espesyal na sentro ng AIDS. Sa teritoryo ng Russia ang mga ito ay ganap na kumpidensyal, o hindi nagpapakilala. Ang bawat pasyente ay maaaring asahan na makatanggap ng medikal o sikolohikal na konsultasyon bago o pagkatapos ng pagsusulit. Kakailanganin mo lamang magbayad para sa mga pagsusuri sa HIV sa komersyal mga institusyong medikal, at sa mga pampublikong klinika at ospital ay isinasagawa ang mga ito nang walang bayad.
Basahin ang tungkol sa mga paraan kung saan maaari kang mahawaan ng HIV at kung anong mga alamat ang umiiral tungkol sa mga posibilidad na mahawa.
Natatanging registry entry number
Numero ng pagpaparehistro kagamitang medikal
FSR 2011/10182
Petsa ng pagpaparehistro ng estado ng medikal na aparato
Pangalan ng produktong medikal
Set ng mga reagents "MilaLab-IFA-HIV-AGAT" enzyme immunoassay test system para sa pag-detect ng mga antibodies sa mga human immunodeficiency virus type 1 at 2 (HIV-1 at HIV-2), HIV-1 group O at HIV-1 p24 antigen ayon sa TU 9398 -187-05941003-2017
na binubuo ng: - Immunosorbent - isang polystyrene 96-well na dismountable tablet sa mga strips (o mga balon), sa mga balon kung saan ang mga artipisyal na antigens ay nasorbed - gp160, gp41, p31 HIV-1, gp41 HIV-1 group O, gp36 HIV-2 at antibodies sa HIV-1 p24 antigen: set 1 (1 tablet), set 2 (2 tablets), set 3 (5 tablets), - Conjugate-1: set 1 (1 vial 1.2 ml), set 2 (1 vial. 1.2 ml), set 3 (1 vial 3.6 ml o 3 vial 1.2 ml bawat isa), - Conjugate-2: set 1 (1 vial 2.0 ml), set 2 (1 vial 2.0 ml). 2.0 ml), set 3 (1 vial ng 4.0 ml o 2 vial ng 2.0 ml), - RRK-1 - solusyon para sa diluting Conjugate-1: set 1 (1 vial of 12.0 ml), set 2 (1 vial 12.0 ml), set 3 (3 vials 12.0 ml bawat isa), - RRK-2 - solusyon para sa diluting Conjugate-2: set 1 (1 vial 20.0 ml), set 2 (1 vial 20.0 ml), set 3 (2 vials 20.0 ml each), - K+AT - control positive sample na naglalaman ng mga antibodies sa HIV: set 1 (1 vial 2.0 ml), set 2 (1 vial 2.0 ml), set 3 (1 vial 4.0 ml o 2 vial 2.0 ml each), - K+AG - control positive sample na naglalaman ng artipisyal na HIV -1 p24 antigen : set 1 (1 fl. 2.0 ml), set 2 (1 vial 2.0 ml), set 3 (1 vial 4.0 ml o 2 vial 2.0 ml bawat isa), - K- - negative control sample: set 1 ( 1 bottle 2.5 ml), set 2 (1 bottle 2.5 ml), set 3 (1 bote 5.0 ml o 2 bote 2.5 ml bawat isa), - PR - washing solution: set 1 (1 bote 50.0 ml), set 2 (1 bote 120.0 ml), set 3 (2 bote 120.0 ml bawat isa), - Itigil ang reagent: set 1 (1 bote 25.0 ml ), set 2 (2 bote ng 25.0 ml), set 3 (2 bote ng 50.0 ml o 4 bote ng 25.0 ml), - SB - substrate buffer solution: set 1 (1 bote ng 25 .0 ml), set 2 (1 bote 25.0 ml), set 3 (2 bote 50.0 ml o 3 bote 25.0 ml), - TMB - solusyon na naglalaman ng 3.3", 5.5"-tetramethylbenzidine: set 1 ( 1 bote ng 2.5 ml), set 2 (1 bote ng 2.5 ml), set 3 (2 bote ng 3.5 ml o 3 bote ng 2.5 ml). Mga accessories: - mga takip para sa polystyrene 96-well plates: set 1 (1 pc.), set 2 (2 pcs.), set 3 (5 pcs.) o - protective films para sa ELISA plates: set 1 (2 pcs.) , set 2 (4 pcs.), set 3 (10 pcs.), - disposable tips: set 1 (16 pcs.), set 2 (32 pcs.), set 3 (80 pcs.), - plastic trays para sa liquid reagents : set 1 (2 pcs.), set 2 (4 pcs.), set 3 (10 pcs.), - mga plastic bag na may Zip-Lock: set 1 (1 pc.), set 2 (2 pcs.) , set 3 (3 mga PC.).
Pangalan ng organisasyon - aplikante ng medikal na aparato
Lokasyon ng organisasyon ng aplikante para sa medikal na aparato
Legal na address ng organisasyon ng aplikante para sa medikal na aparato
603014, Russia, Nizhny Novgorod, st. Comintern, 47
Pangalan ng tagagawa ng aparatong medikal o tagagawa ng aparatong medikal
LLC "NPO "Diagnostic Systems"
Lokasyon ng organisasyon-manufacturer ng medikal na device o organisasyon-manufacturer ng medical device
603093, Russia, Nizhny Novgorod, st. Yabloneva, 22, PO Box 69
Legal na address ng organisasyon-manufacturer ng medical device o organisasyon-manufacturer ng medical device
1 Layunin ng pag-dial
1.1 Ang kit ay inilaan para sa sabay-sabay na pagtuklas ng mga antibodies sa human immunodeficiency virus type 1 at 2 (HIV-1 at HIV-2) at ang HIV-1 p24 antigen sa serum ng tao at plasma ng dugo "in vitro" gamit ang paraan ng hindi direktang enzyme. -linked immunosorbent assay.
2 Mga katangian at prinsipyo ng pagpapatakbo ng set
2.1 Itakda ang mga nilalaman:
|
Pangalan ng bahagi |
Dami |
|
Immunosorbent |
2 tableta |
|
Positibong control sample AT (K + AT) |
1 bote, 3 ml |
|
Positibong AG control sample (K + AG) |
3 bote, lyophilized na paghahanda |
|
Negatibong control sample (SA -) |
2 bote ng 3 ml |
|
Conjugate solution No. 1 (RK-1) |
1 bote, 12 ml |
|
Conjugate No. 2 (Kg-2) |
1 bote, 1 ml |
|
Solusyon para sa diluting conjugate No. 2 (RR-K2) |
2 bote ng 18 ml |
|
Buffer solution para sa substrate ( BRS) |
2 bote ng 18 ml |
|
Chromogen TMB |
1 bote, 1 ml |
|
Phosphate Buffer Saline Concentrate na may Tween (FSB-T×25) |
2 bote ng 50 ml |
|
Itigil ang reagent |
1 bote, 12 ml |
|
Reagent bath kit na may mga tip sa multichannel na pipette |
1 kit |
|
Malagkit na pelikula |
2.2 Ang mga pangunahing bahagi ng "ELISA-HIV 1,2 AGAT" kit ay immunosorbent, conjugate solution No. 1 at conjugate No. 2.
Immunosorbent ay isang polystyrene plate sa mga balon kung saan ang pinaghalong mga recombinant antigens na HIV-1 (gp41) at HIV-2 (gp36) ay na-sorbed at monoclonal antibodies sa HIV-1 p24 antigen.
Conjugate solution No. 1 ay isang pinaghalong biotin na may label na mga monoclonal antibodies laban sa HIV-1 p24 antigen at biotin-label na recombinant na HIV-1 at HIV-2 na protina.
Conjugate No. 2 ay streptavidin conjugated sa malunggay peroxidase.
Positibong control sample AT– serum ng dugo ng tao na naglalaman ng mga antibodies sa HIV-1 at HIV-2, hindi naglalaman ng mga antibodies sa hepatitis C virus at Treponema pallidum, HIV-1 p24 antigen at HBs antigen, na hindi aktibo sa pamamagitan ng pag-init sa loob ng 3 oras sa temperatura na 56 ºC.
Positibong AG control sample– serum ng dugo ng tao na naglalaman ng katutubong HIV-1 p24 antigen, hindi naglalaman ng mga antibodies sa HIV-1, HIV-2, hepatitis C virus at Treponema pallidum at HBs antigen, na hindi aktibo sa pamamagitan ng pag-init sa loob ng 3 oras sa temperatura na 56 ºC.
Negatibong control sample– serum ng dugo ng tao na hindi naglalaman ng mga antibodies sa HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24 antigen at HBs antigen, na hindi aktibo sa pamamagitan ng pag-init sa loob ng 3 oras sa temperatura na 56 ºC.
Prinsipyo ng pagpapatakbo ng set. Kapag ang isang solusyon ng conjugate No. 1 at mga sample ng nahawaang blood serum ay idinagdag sa mga balon ng isang plato, ang p24 antigen ay nagbubuklod kapwa sa mga partikular na antibodies sa solid phase at sa monoclonal biotinylated anti-p24 antibodies na bahagi ng solusyon ng conjugate No. 1; Ang mga antibodies na partikular sa HIV ay nagbubuklod sa mga recombinant na antigen ng HIV-1 at HIV-2 na na-adsorb sa solid phase, at sa mga antigen na kasama sa conjugate solution No. 1, na bumubuo ng mga antigen-antibody complex. Mga immune complex Ang mga anti-p24 na tiyak na antibodies at p24 antigen ay nakita ng conjugate No. 2. Pagkatapos hugasan ang hindi nakatali na mga bahagi, isang solusyon ng peroxidase substrate (hydrogen peroxide) at TMB chromogen ay idinagdag sa mga balon ng plato.
Ang reaksyon ng peroxidase ay itinigil sa pamamagitan ng pagdaragdag ng isang stop reagent (0.9 M sulfuric acid solution), at ang intensity ng kulay ng solusyon sa mga balon ay sinusukat sa isang spectrophotometer bilang ang optical density (OD) na halaga sa wavelength na 450 nm.
Ang halaga ng OD ay direktang proporsyonal sa konsentrasyon ng mga tiyak na antibodies at/o p24 antigen sa serum o plasma sample. Kung mas mataas ang nilalaman ng antibody at/o p24 antigen sa sample ng serum, mas mataas ang intensity ng paglamlam.
2.3 Ang set ay idinisenyo upang isakatuparan 24 na produksyon ELISA: 1 set – 1 strip (8 butas). Kabuuan - 192 mga kahulugan, kasama ang mga control sample.
3 Mga pag-iingat kapag nagtatrabaho sa kit
3.1 Ang lahat ng mga bahagi ng kit ay hindi nakakalason sa mga konsentrasyon na ginamit. Gayunpaman, makipagtulungan sa lahat ng mga sample ng pagsubok ng serum ng dugo ng tao (plasma), na dapat ituring bilang potensyal na nahawaan, may kakayahang mag-imbak at magpadala ng HIV, hepatitis B virus o anumang iba pang pathogen. impeksyon sa viral, na may mga solusyon sa basura at likido, iba't ibang kagamitan na maaaring kontaminado sa panahon ng proseso ng pagsusuri, ay nangangailangan ng ilang mga hakbang sa kaligtasan kapag ginagamit ang kit:
Ang gawain ay dapat isagawa sa isang espesyal na kagamitan na silid;
Kinakailangang magtrabaho gamit ang paraan Personal na proteksyon at pagsasagawa ng mga pag-iingat alinsunod sa mga kinakailangan ng , , at .
3.2 Itigil ang reagent na naglalaman sulpuriko acid, ay may nakakairita na epekto. Sa kaso ng pagkakadikit sa balat at mauhog na lamad, banlawan kaagad malaking halaga tubig.
3.3 Kapag nagtatrabaho sa kit, ang mga lugar ng trabaho ay dapat bigyan ng supply at exhaust ventilation.
3.4 Ang lahat ng mga taong nagtatrabaho sa laboratoryo na may mga kit ay dapat sumailalim sa isang mandatoryong medikal na pagsusuri alinsunod sa mga kinakailangan.
3.5 Ang pagtatapon ng mga medikal na basura at/o mga hindi nagamit na kit na nag-expire ay dapat isagawa alinsunod sa mga kinakailangan.
4 Mga panuntunan para sa pagtatrabaho sa set
4.1 Upang ibukod maling resulta Ang mga sample ng pagsubok ay dapat ihanda at itago sa ilalim ng mga kondisyon na pumipigil sa paglaki ng bacterial. Ang mga sample ng serum na naglalaman ng mga pinagsama-samang bahagi ng serum o sediment ay dapat linawin sa pamamagitan ng centrifugation sa loob ng (5-10) minuto sa 3000 rpm. Ang mga sample ng serum ay maaaring itago sa temperatura na (2-8) °C nang hindi hihigit sa 5 araw. Ang mga frozen na sample (mas mabuti sa temperatura na hindi bababa sa minus 20 °C) ay maaaring iimbak nang hindi hihigit sa 1 taon. Dapat na iwasan ang paulit-ulit na freeze-thaw cycle ng mga sample.
Dapat alalahanin na ang mga sample na may hemolysis, hyperlipidemia, paglaki ng bakterya, pati na rin ang mga nakaimbak nang mahabang panahon nang walang pagyeyelo ay hindi angkop para sa pagsusuri.
Ang pagiging maaasahan ng mga resulta ay nakasalalay sa mga sumusunod na patakaran:
Hindi pinapayagan na gamitin ang kit pagkatapos ng petsa ng pag-expire, pati na rin ang paghahalo ng mga bahagi ng mga kit mula sa iba't ibang serye;
Ang isang hiwalay na lalagyan ay dapat gamitin upang ihanda ang bawat reagent;
Huwag gamutin ang lahat ng kagamitang ginagamit para sa paghahanda ng mga reagents na may mga disinfectant at detergent. Kung kinakailangan, banlawan ng inuming tubig na tumatakbo at pagkatapos ay banlawan ng limang beses ng distilled water;
Upang gumana sa TMB at PX chromogen, kinakailangang gumamit ng magkahiwalay na lalagyan para sa mga solusyon, mga tip sa pipette, at mga pinggan.
Kinakailangan na bigyang-pansin ang masusing paghahalo ng mga reagents;
Ang oras sa pagitan ng pagpuno at pag-alis ng laman ng mga balon ng plato na may mga solusyon at reagents ay dapat na hindi bababa sa 30 s. Ang pagpapatuyo ng mga balon ay hindi pinapayagan sa lahat ng yugto ng ELISA;
Kapag gumagamit ng washer, subaybayan ang kondisyon ng lalagyan para sa solusyon para sa paghuhugas ng tablet at ang mga hose sa pagkonekta: hindi sila dapat magpakita ng mga palatandaan ng paglaki ng bacterial o fungal;
Kinakailangang gumamit ng mga awtomatikong pipette na may mga palitan na tip, na sertipikado para sa average na dosis at ang pagkakapare-pareho ng mga resulta ng pipetting (error na hindi hihigit sa 3%);
Tratuhin ang mga dispenser at gumaganang ibabaw na may solusyon na naglalaman ng 70% ethyl alcohol ayon sa dami. Huwag gumamit ng chloramine o iba pang mga sangkap na naglalaman ng chlorine;
Inirerekomenda na gumamit ng mga disposable pipette na tip para sa pagtatrabaho sa mga sample ng pagsubok at kontrol. Ang bawat sample ng serum, pati na rin ang mga kit reagents, ay dapat kolektahin na may hiwalay na tip.
Kapag nagdaragdag ng RK-1 sa mga balon, huwag hawakan ang ibabaw ng plato at ang solusyon sa mga balon na may dulo ng pipette.
Sa panahon ng pagsusuri, dapat na iwasan ang direktang pakikipag-ugnay. sinag ng araw papunta sa ibabaw ng trabaho.
4.2 Kapag binubuksan at natutunaw ang mga lyophilized na sangkap, kinakailangan upang matiyak na walang tuyong bagay na nananatili sa takip at dingding ng mga bote.
5 Mga kagamitan at materyales na kailangan para sa pagsusuri
5.1 Vertical scanning spectrophotometer, na nagpapahintulot sa mga sukat ng optical density ng mga solusyon sa mga balon ng isang plato sa wavelength na 450 nm;
Semi- o awtomatikong aparato para sa paghuhugas ng mga tablet (washer);
Dry air thermostat type TS-80 M2, pinapanatili ang temperatura na (37±1) °C, o mga katangiang katulad nito;
Single-channel na mga awtomatikong pipette na may mga palitan na tip, na nagpapahintulot sa iyo na mag-withdraw ng mga dami ng likido mula 0.01 hanggang 5.0 ml;
8-channel na mga awtomatikong pipette na may mga palitan na tip, na nagbibigay-daan sa iyo upang bawiin ang mga dami ng likido hanggang sa 0.5 ml;
Pagsukat ng silindro na may kapasidad na 2000 ML;
Laboratory flask na may kapasidad na 2000 ml;
Mga bote ng salamin na may kapasidad na 20 ML;
Mga tray para sa mga reagents o Petri dish (diameter 100 mm);
Medikal na hygroscopic cotton wool;
Pangsalang papel;
Mga guwantes na pang-opera ng goma;
Volume fraction solusyon ethyl alcohol 70 %;
Isang solusyon na may mass fraction ng hydrogen peroxide 6%;
Deionized o distilled na tubig;
Lalagyan para sa pagkolekta ng solidong basura;
Lalagyan para sa pag-draining ng likidong basura.
6 Paghahanda para sa pagsusuri
6.1 Bago isagawa ang pagsusuri, alisin ang reagent kit mula sa refrigerator, buksan ang takip ng kahon at panatilihin ang mga bahagi ng kit sa temperatura. (18-25) °C sa loob ng 30 min.
Paghaluin nang maigi ang lahat ng serum (plasma) sample at reagents bago subukan.
Ang pagkonsumo ng mga reagents sa test kit, na tinutukoy ng bilang ng mga strip na ginamit, ay ibinibigay sa Talahanayan A.1 ng Appendix A.
6.2 Paghahanda ng solusyon para sa paghuhugas ng plato
Pansin! Ihanda ang solusyon para sa paghuhugas ng plato 15 minuto bago magsimula ang pagsusuri!
Kung ang bote na may FSB-T×25 ay naglalaman ng sediment, dapat itong painitin bago gamitin sa temperatura na (37±1) °C hanggang sa tuluyang matunaw ang sediment. Idagdag ang mga nilalaman ng bote na may FSB-T×25 sa isang silindro ng pagsukat na may kapasidad na 2000 ml, pagkatapos ay idagdag ang distilled water sa marka. 1250 ml at maingat na paghaluin ang solusyon. Ang solusyon ay maaaring itago sa (2-8) °C sa loob ng 72 oras.
Kung ang isa o higit pang mga piraso ay ginagamit, kalugin ang mga nilalaman ng bote na may FSB-T×25 nang masigla para sa (20-30) s, dalhin ang kinakailangang dami ng solusyon (Talahanayan A.1) sa isang tasa o silindro, idagdag ang kinakailangang dami ng distilled water at paghaluin ang solusyon. Ang hindi nagamit na FSB-T×25 ay maaaring itago sa saradong bote sa temperatura na (2-8) °C sa panahon ng shelf life ng kit.
6.3 Paghahanda ng immunosorbent
Ang immunosorbent ay handa nang gamitin.
Buksan ang pakete at i-install ang kinakailangang bilang ng mga piraso sa frame. Itago ang natitirang mga strip sa isang mahigpit na saradong bag na may desiccant sa temperatura na (2-8) °C sa loob ng 3 buwan.
6.4 Paghahanda ng K + AT, K –, RK-1, RR-K2, BRS at stop reagent
K + AT, K – , RK-1, RR-K2, BRS at stop reagent ay handa nang gamitin.
Pansin! Maaaring mabuo ang ulan sa bote na may RK-1. Dapat gumamit ng supernatant liquid para sa pagsusuri.
Ang hindi nagamit na RK-1, RR-K2, BRS at stop reagent pagkatapos buksan ang mga vial ay maaaring maimbak sa mga saradong vial sa temperatura na (2-8) °C sa panahon ng shelf life ng kit.
Ang natitira sa K + AT at K - pagkatapos buksan ang vial ay maaaring maimbak sa mga saradong vial sa temperatura na (2-8) °C sa panahon ng shelf life ng kit.
6.5 Paghahanda ng K + AG solution
Pansin! Ihanda ang K + AG solution 15 minuto bago magsimula ang pagsusuri!
Para ibalik ang lyophilized K + AG, bago buksan ang bote, bahagyang tapikin para mawala ang mga particle na dumidikit sa mga dingding ng bote o stopper. Buksan ang bote at ilagay ang takip sa isang tuyong ibabaw. Magdagdag ng 0.8 ml ng distilled water sa bote. Isara ang bote gamit ang isang takip, hawakan ng 10 minuto sa temperatura na (18-25) °C at maingat na ikiling at paikutin ang bote, paghaluin ang mga nilalaman nito hanggang sa ganap na matunaw, maiwasan ang pagbuo ng bula.
Ang pinababang K + AG ay maaaring itago sa isang saradong bote sa temperatura na (2-8) °C sa loob ng isang buwan, sa temperaturang minus 20 °C sa loob ng anim na buwan. Pinapayagan ang solong pagyeyelo-pagtunaw ng pinababang K + AG.
6.6 Paghahanda ng Kg-2 solution sa working dilution
Mula sa bote na may Kg-2, kunin ang volume na nakasaad sa Talahanayan A.1 at ilipat ito sa bote na may PP-K2. Paghaluin ang mga nilalaman ng bote nang lubusan, pag-iwas sa pagbuo ng bula.
Kung gumagamit ka ng isa o higit pang mga piraso, dalhin ang kinakailangang halaga ng PP-K2 sa isang malinis na bote, idagdag ang Kg-2 alinsunod sa Talahanayan A.1 at paghaluin ang solusyon, maiwasan ang pagbuo ng bula.
Pansin! Ang Kg-2 solution sa working dilution ay inihanda kaagad bago gamitin! Ang Kg-2 solution sa working dilution ay maaaring itago ng 15 minuto sa temperatura na (18-25) °C. Gumamit lamang ng bagong reagent bath at mga bagong tip!
Ang natitira sa Kg-2 ay maaaring itago sa isang saradong vial sa temperatura na (2-8) °C sa panahon ng shelf life ng kit.
6.7 Paghahanda ng gumaganang solusyon sa substrate
Ang bote na may TMB chromogen ay dapat magpainit bago gamitin sa temperatura na (37±1)° Hanggang sa tuluyang matunaw ang mga kristal.
Mula sa bote na may TMB chromogen, kunin ang volume na nakasaad sa Talahanayan A.1 at ilipat ito sa bote na may BRS. Paghaluin ang mga nilalaman ng bote nang lubusan, pag-iwas sa pagbuo ng bula.
Kung ang isa o higit pang mga piraso ay ginagamit, dalhin ang kinakailangang halaga ng BRS sa isang malinis na bote, magdagdag ng TMB chromogen alinsunod sa Talahanayan A.1 at paghaluin ang solusyon, upang maiwasan ang pagbuo ng foam.
Pansin! Ang gumaganang solusyon ng substrate ay inihanda kaagad bago gamitin sa isang lugar na protektado mula sa liwanag! Ang solusyon ay maaaring itago ng 20 minuto sa temperatura na (18-25) °C sa isang lugar na protektado mula sa liwanag.
Ang solusyon ay dapat na protektado mula sa liwanag at pakikipag-ugnay sa mga metal o metal ions. Ang solusyon sa substrate ay dapat na walang kulay bago gamitin. Ang mga pinggan na makakadikit sa substrate solution sa panahon ng reaksyon ay dapat hugasan nang hindi gumagamit ng mga sintetikong detergent. mga detergent. Gumamit lamang ng bagong reagent bath at mga bagong tip!
Ang natitirang bahagi ng TMB chromogen ay maaaring maimbak sa isang saradong vial sa (2-8) °C hanggang sa petsa ng pag-expire ng kit.
7 Mga kinakailangan para sa paghuhugas ng plato
Sa lahat ng mga yugto ng paghuhugas ay kinakailangan upang kontrolin ang pagpuno ng lahat ng mga balon at kumpletong pagtanggal(aspiration) ng likido mula sa kanila;
Sa bawat paghuhugas, kinakailangang punan ang lahat ng mga balon ng solusyon hanggang sa labi (0.30-0.35 ml bawat balon), nang hindi umaapaw o tumutulo ang likido mula sa mga katabing balon;
Kinakailangan na panatilihin ang mga balon na puno ng isang solusyon para sa paghuhugas ng plato sa loob ng 30 s;
Sa bawat aspirasyon, maingat na alisin ang natitirang likido mula sa mga balon sa pamamagitan ng pagtapik sa frame na may mga piraso sa isang baligtad na posisyon sa filter na papel na nakatiklop nang maraming beses, na inilagay sa isang sheet ng polyethylene;
Ang mahinang paghuhugas ng plato ay humahantong sa mga hindi tamang resulta.
8 Pagsasagawa ng pagsusuri
8.1 Ibuhos sa alinmang dalawang balon ng plato 0.07 ml(70 µl) K + AT, sa iba pang dalawang butas - bawat isa 0.07 ml(70 µl) K + AG, sa iba pang tatlong butas - bawat isa 0.07 ml(70 µl) SA - .
Pansin! Kapag nagsasagawa ng ELISA sa isang strip, pinapayagang gumamit ng dalawang balon para sa K – -, isang balon para sa K + AT, at isang balon para sa K + AG.
Ibuhos sa natitirang mga balon ng plato 0.07 ml(70 µl) ng mga pinag-aralan na sample ng human blood serum (plasma).
Pansin! Ang bawat sample ay dapat kolektahin gamit ang isang disposable tip!
8.2 Sa lahat ng mga balon ng plato sa ibabaw ng mga control sample at test sample ng blood serum (plasma) kaagad deposito sa pamamagitan ng 0.05 ml(50 µl) RK-1. Paghaluin ang mga nilalaman ng mga balon sa pamamagitan ng malumanay na pagtapik sa mga gilid ng plato.
8.3 (37 ± 1) ° Mula sa loob 60 min.
Pansin!(1-2) minuto bago matapos ang pagpapapisa ng itlog, maghanda ng solusyon ng Kg-2 sa isang gumaganang pagbabanto (seksyon 6.6).
8.4 Alisin ang mga nilalaman ng mga balon gamit ang isang washer, pagkatapos ay hugasan ang mga balon ng plato na may solusyon para sa paghuhugas ng plato (seksyon 6.2) pitong beses.
8.5 Ibuhos sa lahat ng mga balon ng plato 0.15 ml(150 µl) solusyon Kg-2 sa gumaganang pagbabanto (sugnay 6.6).
8.6 Takpan ang plato ng pelikula o isara gamit ang isang takip at i-incubate sa isang thermostat sa isang temperatura (37 ± 1) ° Mula sa loob 10 min.
8.7 Alisin ang mga nilalaman ng mga balon gamit ang isang washer, pagkatapos ay hugasan ang mga balon ng plato gamit ang isang solusyon sa paghuhugas ng plato (seksyon 6.2) pitong beses.
8.8 Ibuhos sa lahat ng mga balon ng plato 0.15 ml(150 µl) solusyon sa pagtatrabaho ng substrate(sugnay 6.7).
Kapag naghahanda ng isang gumaganang solusyon ng substrate (sugnay 6.7) f Ang lacquer na may TMB chromogen ay dapat magpainit bago gamitin sa loob ng (3-5) minuto sa temperatura na (37).± 1) ° C hanggang sa ganap na matunaw ang mga kristal.
8.9 Takpan ang plato ng pelikula o isara gamit ang isang takip at i-incubate sa isang thermostat sa isang temperatura (37 ± 1) ° SA sa isang lugar na protektado mula sa liwanag para sa 15 minuto.
Pansin! Sa pagtatapos ng pagpapapisa ng itlog sa mga balon na may mga sample ng serum na naglalaman ng mga antibodies sa HIV-1 at/o HIV-2, at/o HIV-1 p24 antigen, ang kulay ng solusyon ay magbabago mula sa walang kulay hanggang sa asul. iba't ibang intensity depende sa konsentrasyon ng mga antibodies at/o antigen sa serum sample na sinusuri.
8.10 Itigil ang reaksyon ng peroxidase sa pamamagitan ng pagdaragdag 0.05 ml(50 µl) itigil ang reagent.
Pansin! Sa mga balon na may mga sample ng serum na naglalaman ng mga antibodies sa HIV-1 at/o HIV-2, at/o HIV-1 p24 antigen, ang solusyon ay magbabago ng kulay mula sa asul patungo sa dilaw na may iba't ibang intensity.
8.11 Hindi lalampas sa (1-2) minuto pagkatapos ihinto ang reaksyon, tukuyin ang OD sa mga balon sa single-wave mode sa wavelength 450 nm.
9 Pagproseso ng mga resulta ng pagsusuri
9.2 Ang mga resulta ay isinasaalang-alang lamang kung:
Ang halaga ng OPsr K - ay hindi lalampas sa 0.2 OE;
Ang bawat indibidwal na halaga ng OP K - ay hindi dapat lumihis mula sa OPsr K - ng higit sa 30%. Kung ang isa sa tatlong halaga ng OP K - ay lumampas sa limitasyong ito, dapat itong hindi kasama sa pagkalkula ng OPsr K - . Kung ang dalawa sa tatlong OD K - mga halaga ay nasa labas ng limitasyong ito, ang pagsusuri ay dapat na ulitin gamit ang mga reagents ng isang bagong hanay;
Ang halaga ng OPsr K + AT ay higit sa 1.0 OE;
Ang halaga ng OPsr K + AG ay higit sa 1.0 OU.
9.3 Kung natugunan ang mga kundisyon sa itaas, kalkulahin ang kritikal na halaga (OPcrit.), OE, gamit ang formula (1):
OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).
10 Analytical at diagnostic na mga katangian
Pagkamapagdamdam hanay ng mga reagents ELISA-HIV 1.2 AGAT para sa pagtuklas ng HIV-1 p24 antigen -
Pagtitiyak hanay ng mga reagents ELISA-HIV 1.2 AGAT– 100% AT(-)HIV standard. Standard panel ng sera na hindi naglalaman ng mga antibodies sa human immunodeficiency virus type 1 at 2 (HIV-1,2) at HIV-1 (p24) antigen. OCO42-28-214-02P.CatNo.INS-20. CJSC "MBS"
11 Itakda ang release form
11.1 Ang set ay magagamit sa limang mga pagpipilian sa pagsasaayos:
1 set ng 1P – manu-manong pagsusuri. Ang kit ay idinisenyo upang magsagawa ng 12 ELISA setup sa isang collapsible plate: 1 run – 1 strip (8 wells). Kabuuan – 96 na pagpapasiya, kabilang ang mga control sample;
2 set 2M - manu-manong pagsusuri. Ang kit ay idinisenyo upang magsagawa ng 2 ELISA test sa monolithic plates: 1 test – 1 plate. Kabuuan – 192 determinasyon, kabilang ang mga control sample;
3 itakda ang 2P– mano-manong pagsasagawa ng pagsusuri. Ang set ay idinisenyo upang isakatuparan 24 na produksyon ELISA para sa 2 dismountable x tablet: 1 setting – 1 strip (8 well). Kabuuan - 192 mga kahulugan, kabilang ang mga control sample;
4 set A2M – pagsusuri sa isang awtomatikong analyzer. Ang kit ay idinisenyo upang magsagawa ng 2 ELISA test sa monolithic plates: 1 test – 1 plate. Kabuuan – 192 determinasyon, kabilang ang mga control sample;
5 set A2P – pagsusuri sa isang awtomatikong analyzer. Ang kit ay idinisenyo upang magsagawa ng 24 ELISA setup sa 2 collapsible plates: 1 run – 1 strip (8 wells). Isang kabuuan ng 192 pagpapasiya, kabilang ang mga control sample.
12 Mga kondisyon para sa pag-iimbak at paggamit ng kit
12.1 Ang kit ay dapat na nakaimbak sa isang malinis na silid, protektado mula sa kahalumigmigan at liwanag, sa temperatura na (2-8) ° C sa buong buhay ng istante. Huwag i-freeze ang mga bahagi ng kit.
12.2 Upang makakuha ng maaasahang mga resulta ito ay kinakailangan mahigpit na pagsunod mga tagubilin para sa paggamit ng kit.
12.3 Petsa ng pag-expire ng set - 12 buwan.
Apendiks A
Talahanayan A.1 - Pagkonsumo ng mga reagents para sa ELISA kit
|
reagent, ml |
Bilang ng mga piraso na ginamit, mga pcs. |
|||||||||||
|
Paghahanda ng solusyon para sa paghuhugas ng tableta |
||||||||||||
|
FSB-T×25 |
||||||||||||
|
Distilled tubig |
||||||||||||
|
Paghahanda ng Kg-2 solution sa working dilution |
||||||||||||
|
RR-K2 |
||||||||||||
|
Paghahanda ng gumaganang solusyon sa substrate |
||||||||||||
|
Chromogen TMB |
||||||||||||
Bibliograpiya
|
Mga tuntunin sa kalusugan |
Kautusan ng Ministri ng Kalusugan ng Republika ng Belarus na may petsang Disyembre 16, 1998 No. 351 Sa rebisyon ng mga regulasyon ng departamento na nagre-regulate ng mga isyu na may kaugnayan sa HIV/AIDS |
|
|
Order ng Ministry of Health ng Republika ng Belarus na may petsang Nobyembre 25, 2002 No. 165 Sa pagdidisimpekta at isterilisasyon ng mga institusyong pangkalusugan |
||
|
Resolusyon ng Ministri ng Kalusugan ng Republika ng Belarus na may petsang Abril 28, 2010 No. 47 Sa pag-apruba ng Mga Tagubilin sa pamamaraan para sa pagsasagawa ng mandatory mga medikal na pagsusuri pagtatrabaho at pagpapawalang-bisa ng ilang mga resolusyon ng Ministri ng Kalusugan ng Republika ng Belarus |
||