Akkurat som under Southern blot nukleotidprober brukes til å identifisere DNA-fragmenter; cytogenetikere kan bruke lignende prober for analyse kromosomavvik. For å gjøre dette hybridiseres fluorescerende fargestoffmerkede prober med DNA inneholdt i fikserte kromosomer på glassplater.
Denne teknikken kalles Fluorescens in situ hybridisering (FISK), siden , inneholdt i interfasekromatin- eller metafasekromosomer, er fiksert og denaturert på glasset på ett sted (dvs. in situ), for behandling med en merket probe som hybridiserer med kromosomalt DNA. Sonden fluorescerer når kromosomene belyses med lys med en bølgelengde som eksiterer det fluorescerende fargestoffet. Posisjonen til hybridiseringssignalet og dermed posisjonen til DNA-segmentet med den hybridiserte proben bestemmes mikroskopisk.
Vanligvis for FISK analyse prober brukes - DNA-fragmenter som har en unik posisjon i kromosomet. Slike prober gjennomgår hybridisering og markerer plasseringen på hvert homologt kromosom som tilsvarer den normale posisjonen til probesekvensen. FISH-sonden kan også være en kompleks blanding av DNA hentet fra en hel arm eller til og med et helt kromosom. Avhengig av sammensetningen av sonden merkes hele kromosomet eller en del av det under hybridisering med det.
Slike blandinger sonder kjent som kromosomale prober. Til slutt kan 24 forskjellige kromosomale prober kombineres, merket med forskjellige kombinasjoner av fluorescerende fargestoffer som sender ut lys. forskjellige lengder bølger, for hvert av de 24 menneskelige kromosomene. Hvert kromosom er merket med en sonde med sin egen karakteristiske kombinasjon av lysbølgelengder. Alle de 24 kromosomprobene kombineres og brukes til FISH-analyse av metafasekromosomer. Denne teknikken er kjent som spektral karyotyping (SKY).
Siden hver kromosomspesifikk sonde har fluorescens med sin egen kombinasjon av bølgelengder skilles mutante kromosomer som består av deler av forskjellige kromosomer godt ved SKY-analyse, og kromosomer inkludert i omorganiseringen kan lett identifiseres. FISH, som bruker en enkelt sammenhengende nukleotidsekvens, kromosomspesifikke prober og SKY-metoden med en kombinasjon av prober for alle kromosomer, er mye brukt i klinisk cytogenetikk for å oppdage kromosomavvik som slettinger, innsettinger og translokaliseringer.
Bestemmelse av HER-2-tumorstatus med FISH- studie av predisposisjon for tumorutvikling og valg av rettidig tilstrekkelig behandling for brystkreft (BC) eller magekreft (GC).
HER-2 (HER-2/nev)- human epidermal vekstfaktor reseptor-2 er et protein som kan påvirke veksten av kreftceller. Det er laget av et spesielt gen kalt HER-2/neu-genet. HER-2 er en reseptor for en viss vekstfaktor kalt human epidermal vekstfaktor som forekommer naturlig hos mennesker. Når human epidermal vekstfaktor fester seg til HER-2-reseptorer på brystkreftceller, kan det stimulere disse cellene til å vokse og dele seg. I sunt vev overfører HER-2 signaler som regulerer celleproliferasjon og overlevelse, men overekspresjon av HER-2 kan forårsake ondartet transformasjon av celler.
Overekspresjon av HER-2 i noen undertyper av brystkreft fører til økt spredning og angiogenese, dysregulering av apoptose (genetisk programmert selvdestruksjon av celler). Det er vist at ved brystkreft er overekspresjon av denne reseptoren i tumorvev assosiert med mer aggressiv kurs sykdom, økt metastatisk potensial av svulsten og en mindre gunstig prognose. Oppdagelse av sammenhengen mellom HER-2-overuttrykk og ugunstig prognose for brystkreft førte til søket etter behandlingstilnærminger som er rettet mot spesifikt blokkering av HER-2/neu-onkogenet (målrettet anti-HER2-terapi).
Brystkreft (BC)- en ondartet svulst i kjertelvevet i brystkjertelen. Brystkreft rangerer først blant alle ondartede sykdommer hos kvinner.
Avhengig av tilstedeværelsen av biologiske markører for svulsten - uttrykket av hormonelle reseptorer (østrogen og/eller progesteron), skilles uttrykket av HER-2 - hormonreseptor-positiv, HER-2-positiv og trippel negativ brystkreft.
HER-2/neu-positive (HER-2+) typer brystkreft er preget av høy ekspresjon av HER-2/neu-proteinet.
HER=2/neu-negative (HER-2-) brystkrefttyper er preget av lavt uttrykk eller fravær av HER-2/neu-protein.
En av fem kvinner med brystkreft antas å ha en HER-2-positiv svulst. Flertall kreftsvulster brystkjertler er hormonavhengige: østrogener og progesteron har en stimulerende effekt på dem (proliferativ og neoplastisk). Ved HER-2-positiv brystkreft er det et overskudd av HER-2-reseptorer på overflaten av tumorceller. Dette fenomenet kalles "positiv HER-2-status" og diagnostiseres hos 15–20 % av kvinnene som lider av brystkreft.
HER-2- reseptor for human epidermal vekstfaktor type 2, som er tilstede i vev normalt, og deltar i reguleringen av celledeling og differensiering. Dets overskudd på overflaten av tumorceller (overekspresjon) bestemmer den raske ukontrollerte veksten av svulsten, høy risiko metastase, lav effektivitet av noen typer behandling. HER-2 positiv brystkreft er en spesielt aggressiv form av denne sykdommen Derfor er nøyaktig bestemmelse av HER-2-status nøkkelen for valg av behandlingstaktikk.
Magekreft (GC)- en ondartet svulst som stammer fra epitelet i mageslimhinnen.
GC rangerer 4. i strukturen for kreftforekomst og 2. plass i strukturen for kreftdødelighet i verden. Forekomsten av magekreft hos menn er 2 ganger høyere enn hos kvinner. Russland tilhører regionene med høy level GC forekomst og dødelighet fra denne sykdommen. Diagnose av magekreft på tidlige stadier vanskelig på grunn av det lange asymptomatiske sykdomsforløpet. GC oppdages ofte på sene stadier, når 5-års overlevelsesraten ikke overstiger 5–10 %, og kjemoterapi fortsatt er den eneste behandlingsmetoden.
Hovedmetoden for behandling av magekreft er kirurgi. Men i de fleste pasienter, på tidspunktet for diagnose, utbredt svulstprosess, som gjør det umulig å utføre radikal kirurgi og krever en systematisk medikamentell behandling. Kjemoterapi øker statistisk signifikant den totale overlevelsen til pasienter med metastatisk kreft, og forbedrer livskvaliteten deres.
HER-2 (erbB-2) onkogenet ble opprinnelig identifisert i brystsvulster. Amplifikasjon og overekspresjon av dette genet er en relativt spesifikk hendelse for brystkarsinomer og forekommer praktisk talt ikke i svulster andre steder. Magekreft ser ut til å være et av få unntak: aktivering av HER-2 er observert i omtrent 10–15 % av ondartede neoplasmer i dette organet og korrelerer med det aggressive sykdomsforløpet.
Overekspresjon av HER-2 er en faktor for dårlig prognose. I følge ulike studier korrelerer amplifikasjon av HER-2-genet hos pasienter med kreft med lav ytelse total overlevelse.
For å vurdere HER-2-status ved kreft og brystkreft brukes FISH-metoden.
FISK- forskning lar deg bestemme kvalitative og kvantitative endringer i kromosomer for diagnostisering av ondartede blodsykdommer og solide svulster.
I dag er FISH-studier mye brukt over hele verden.
FISH-metoden (fluorescerende in situ hybridisering) er en studie av antall HER-2/neu-gener inne i kreftceller.
Indikasjoner:
- brystkreft - med det formål å prognose og valg av terapi;
- magekreft - med det formål å prognose og valg av terapi.
Fastsettes av behandlende lege.
En histologisk protokoll og en immunhistokjemisk protokoll, IHC-glass, kreves.
Tolking av resultater
Resultatene av FISH-testen er uttrykt som følger:
1. Positiv ( økt innhold, det er amplifikasjon av HER-2-genet):
- HER-2 positiv brystkreft;
- HER-2 negativ brystkreft.
I noen tilfeller er en cytogenetisk studie ikke nok til å gi en konklusjon om karyotypen, i disse tilfellene brukes molekylære cytogenetiske metoder, spesielt fluorescens in situ hybridisering (FISH).
Fremveksten av nye molekylære cytogenetiske teknologier basert primært på in situ hybridisering nukleinsyrer, utvidet mulighetene for kromosomal diagnostikk betydelig. In situ hybridiseringsmetoden ble utviklet for å lokalisere spesifikke DNA-sekvenser direkte på cytologiske preparater. Det har vært en overgang i identifikasjon av kromosomer og kromosomregioner fra analysen av den cytologiske organiseringen av kromosomet til analysen av DNA-sekvensene inkludert i deres sammensetning. En sammenligning av effektiviteten til klassiske cytogenetiske metoder for å oppdage og analysere kromosomale omorganiseringer, som differensiell farging av kromosomer, med moderne molekylær cytogenetiske teknologier viste at ved hematologiske lidelser cytologisk analyse kromosom oppdager og korrekt identifiserer bare omtrent en tredjedel av de kromosomale omorganiseringene som er oppdaget ved bruk av spektral karyotyping (SKY). Omtrent en tredjedel av omorganiseringene identifiseres feil ved hjelp av cytologiske metoder, og en tredjedel går helt ubemerket hen. Klassiske metoder Cytogenetisk analyse lar oss oppdage bare omtrent 15 % av kromosomomorganiseringer identifisert ved bruk av SKY.
FISH-metoden bruker fluorescerende molekyler for å farge gener eller kromosomer in vivo. Metoden brukes til genkartlegging og identifikasjon av kromosomavvik.
Teknikken begynner med fremstilling av korte DNA-sekvenser, kalt prober, som er komplementære til DNA-sekvensene som representerer målet av interesse. Probene hybridiserer (binder) til komplementære regioner av DNA og, på grunn av det faktum at de er merket med en fluorescerende markør, gjør det mulig å se lokaliseringen av genene av interesse i DNA eller kromosomer. I motsetning til andre metoder for å studere kromosomer, som krever aktiv celledeling, kan FISH utføres på ikke-delte celler, noe som gir metoden fleksibilitet.
FISH kan brukes til en rekke formål ved å bruke tre forskjellige typer sonder:
- * locus-spesifikke prober som binder seg til spesifikke regioner av kromosomer. Disse probene brukes til å identifisere den eksisterende korte sekvensen av isolert DNA, som brukes til å forberede en merket probe og dens påfølgende hybridisering med et sett med kromosomer;
- *alfoide eller sentromere gjentatte prober er repeterende sekvenser av de sentromere regionene til kromosomene. Med deres hjelp kan hvert kromosom males i en annen farge, noe som lar deg raskt bestemme antall kromosomer og avvik fra deres normale antall;
- * sonder for hele kromosomet er et sett med små prober som er komplementære til enkeltområder kromosomer, men dekker vanligvis hele lengden. Ved å bruke et bibliotek med slike prober er det mulig å "farge" hele kromosomet og få en differensiell spektral karyotype av et individ. Denne typen analyse brukes til å analysere kromosomavvik, for eksempel translokasjoner, når en del av ett kromosom overføres til armen til et annet.
Fluorescerende in situ hybridisering (FISH)
Materialet for studien er blod, benmarg, tumorbiopsi, placenta, fostervev eller fostervann. Prøver for testing skal leveres til laboratoriet innen fersk. Objektglass tilberedes direkte fra vevsprøver eller etter at de har blitt dyrket. Både metafase- og interfasecellepreparater kan brukes. Spesifikke DNA-prober merket med fluorescerende merker hybridiserer med kromosomalt DNA, og flere prober for forskjellige loki kan brukes samtidig.
FISK er nyttig og sensitiv metode cytogenetisk analyse for å identifisere kvantitative og kvalitative kromosomavvik, som slettinger (inkludert mikrodelesjoner), translokasjoner, duplisering og aneuploidi. FISH på interfase kromosomer tjener rask metode prenatal diagnostikk trisomier på kromosom 21, 18 eller 13 eller kjønnskromosomavvik. I onkologi kan FISH brukes til å oppdage en rekke translokasjoner (bcr/abl, MLL, PML/RARA, TEL/AML1) assosiert med hematologiske ondartede neoplasmer. Metoden kan også brukes til overvåking resteffekter kreft etter kjemoterapi og transplantasjon beinmarg og identifikasjon av oppregulerte onkogener (c-myc/n-myc) assosiert med dårlig prognose i visse svulster. FISH brukes også til å overvåke overlevelsen av benmargsallograft fra et individ av det motsatte kjønn.
FISH er en sensitiv metode for identifikasjon av kromosomavvik og rask analyse av store (>500) antall celler om gangen. Metoden er svært nøyaktig når det gjelder å identifisere arten av kromosomer og ukjente fragmenter av kromosomalt DNA.
FISH - Fluorescent in situ hybridiseringsteknikk ble utviklet på midten av 1980-tallet og brukes til å oppdage tilstedeværelse eller fravær av spesifikke DNA-sekvenser på kromosomer, samt alfa-satellitt-DNA lokalisert på sentromeren til kromosom 6, CEP6(6p11. 1-q11. 1).
Dette har gjort en betydelig forskjell i diagnostikk. onkologiske sykdommer melanocytisk genese skjedde i forbindelse med oppdagelsen av tumorantigener. Mot en ondartet bakgrunn bestemmes en mutasjon i tre antigener: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) og CMM1(1p). I denne forbindelse muligheten for objektiv differensialdiagnose, basert på å bestemme de genetiske egenskapene til melanocytiske hudsvulster, har veldig viktig V tidlig diagnose melanom og dets forløpere. I kjernen med et normalt sett av de studerte genene og kromosom 6, observeres to RREB1-gener, farget i rødt, to MYB-gener, farget i gult, to CCND1-gener, uthevet grønn, og to sentromerer av kromosom 6, utpekt blå. Fluorescerende tester brukes til diagnostiske formål.
Evaluering av reaksjonsresultater: mengden røde, gule, grønne og blå signaler i 30 kjerner av hver prøve telles, fire parametere identifiseres ulike alternativer genetiske lidelser der prøven er genetisk konsistent med melanom. For eksempel er en prøve konsistent med melanom hvis gjennomsnittlig antall CCND1-gen per kjerne er ≥2,5. Kopitallet til andre gener vurderes etter samme prinsipp. Et legemiddel anses som FISH-positivt hvis minst én av fire betingelser er oppfylt. Prøver der alle fire parameterne er under grenseverdiene regnes som FISH negative.
Bestemmelse av spesifikke DNA-sekvenser på kromosomer utføres på seksjoner av biopsier eller kirurgisk materiale. I praktisk implementering ser FISH-reaksjonen slik ut: materialet som studeres, som inneholder DNA i kjernene til melanocytter, behandles for å delvis ødelegge molekylet for å bryte den dobbelttrådete strukturen og derved lette tilgangen til ønsket region av genet. Prøver er klassifisert etter hvor de er festet til DNA-molekylet. Materiale for FISH-reaksjon i klinisk praksis Parafinsnitt av vev, utstryk og utskrifter brukes.
FISH-reaksjonen lar deg oppdage endringer som har skjedd i DNA-molekylet som et resultat av en økning i antall genkopier, tap av gent, endringer i antall kromosomer og kvalitative endringer - bevegelsen av gen-loci begge i samme kromosom og mellom to kromosomer.
For å behandle dataene som er oppnådd ved bruk av FISH-reaksjonen og studere forholdet mellom kopiantallet av gener fra de tre studiegruppene, brukes Spearman-korrelasjonskoeffisienten.
Melanom er preget av en økning i kopiantall sammenlignet med nevus og dysplastisk nevus.
En enkel nevus, sammenlignet med en dysplastisk nevus, har færre abnormiteter i kopiantall (dvs. mer normale kopitall).
For å konstruere beslutningsregler som gjør det mulig å forutsi om en prøve tilhører en eller annen klasse (differensialdiagnose av enkle og dysplastiske nevi), brukes det matematiske apparatet til "beslutningstrær". Denne tilnærmingen har vist seg godt i praksis, og resultatene av å bruke denne metoden (i motsetning til mange andre metoder, for eksempel nevrale nettverk) kan tydelig tolkes for å konstruere beslutningsregler for å skille mellom enkle, dysplastiske nevi og melanom. De første dataene i alle tilfeller var kopinummeret til fire gener.
Oppgaven med å konstruere en beslutningsregel for differensialdiagnose er delt inn i flere stadier. På det første stadiet differensieres melanom og nevus, uten å ta hensyn til typen nevus. På neste trinn konstrueres en beslutningsregel for å skille enkle og dysplastiske nevi. Til slutt, på det siste stadiet, er det mulig å konstruere et "beslutningstre" for å bestemme graden av dysplasi av en dysplastisk nevus.
Denne inndelingen av oppgaven med å klassifisere nevi i underoppgaver gjør det mulig å oppnå høy nøyaktighet av spådommer på hvert trinn. Inndataene for å konstruere et "beslutningstre" er data om kopiantallet av fire gener for pasienter diagnostisert med melanom og pasienter diagnostisert med ikke-melanom (pasienter med forskjellige typer nevus - enkel og dysplastisk). For hver pasient er det data om genkopinummer for 30 celler.
Å dele problemet med å forutsi en diagnose i flere stadier gjør det derfor mulig å konstruere svært nøyaktige beslutningsregler ikke bare for å skille mellom melanom og nevi, men også for å bestemme typen nevi og forutsi graden av dysplasi for en dysplastisk nevus. De konstruerte "beslutningstrærene" er en visuell måte å forutsi en diagnose basert på informasjon om genkopiantall og kan enkelt brukes i klinisk praksis for å skille benigne, pre-maligne og ondartede melanocytiske neoplasmer i huden. Foreslått tilleggsmetode differensialdiagnose er spesielt viktig ved eksisjon av gigantisk medfødt pigmentert nevi og dysplastiske nevi hos pasienter barndom, siden når slike pasienter kontakter medisinske institusjoner det er en høy prosentandel av diagnostiske feil. Resultatene av bruk av den beskrevne metoden er svært effektive; det anbefales å bruke den til diagnostisering av pigmenterte hudsvulster, spesielt hos pasienter med FAMM-syndrom.
Tilbys av Assuta Clinic. Fluorescenshybridisering, ellers kalt FISH - genetisk test, som gir en ide om svulstens natur. Ved å studere en svulst ved hjelp av FIS vil legen vite om kreften er positiv eller negativ for HER2-genet. Kopier av genet som finnes i kroppens celler stimulerer veksten av atypiske kreftceller. Etter at diagnosen er ferdigstilt, vil legen kunne lage en mer detaljert behandlingsplan.
Det moderne laboratoriekomplekset til Assuta-klinikken utfører FISH-analyse for å evaluere brystkreftpatologier:
- Unik testing gir nøyaktig representasjon om svulstens natur, dens egenskaper.
- Et privat sykehus har kraftige ressurser for å oppnå resultater.
- De jobber for oss beste legene Israel, diagnostikk og terapi utføres i henhold til individuelle ordninger.
Ring for å finne ut hvordan du søker behandling. Gjenopprett helsen din på det største sykehuset i Midtøsten.
Meld deg på en konsultasjon
Fisketest for brystkreft - mekanismen for onkologisk utvikling
HER2-genreseptorene er ansvarlige for produksjonen av HER2-proteiner, som er reseptorer som finnes på kreftceller. Når reseptorer aktiveres i kreftceller det mottas et signal om behovet for å dele og reprodusere. Normalt regulerer HER 2-reseptorer veksten av brystceller, og opprettholder en helsebalanse i vevet.
Det er imidlertid bevist at HER 2-genet er overprodusert i ett av fem tilfeller av kreft. Dette betyr at i stedet for å ha én kopi av genet, har en person et gen fra hver forelder. Dette forklarer overskuddet av HER-reseptorer i kroppen, og forårsaker ukontrollert og aggressiv tumorvekst.
Det er nødvendig å gjennomgå en fisketest for brystkreft for å finne ut i hvilken grad årsaken til utviklingen av patologi i kroppen er relatert til unormal produksjon av reseptorer. Du må vite om krefttypen er HER2 positiv eller negativ. Det finnes behandlinger spesielt utviklet for HER 2-reseptorer positiv kreft brystene Analyse lar deg ikke kaste bort tid på å søke effektive metoder innvirkning.
Når det utføres en fiskereaksjon for brystkreft, bruker legen profilfargingsstoffer for å visualisere kromosomavvik. Løsningen påført vevet som studeres gjør det mulig å se abnormiteter. Fordelen med FIS-analyse er at den kan oppdage genetiske abnormiteter som er for små til å undersøkes i mikroskop ved hjelp av alternative metoder.
En annen fordel med testing er at pasienten får resultatene i løpet av noen dager, mens andre metoder gir resultater først etter noen uker. I tillegg til å definere ondartet svulst brystkjertel fisk test brukes i diagnostisering av kreft patologi av blæren, ved bestemmelse av leukemi.
Typer analyser
For å fastslå den positive eller negative karakteren til HER2, henviser leger ved Assuta-klinikken pasienten for testing til sitt eget laboratorium. Det er to typer tester:
- Immunhistokjemi – IHC avslører et stort nummer av ekorn. Under testen undersøker en patolog vev under et mikroskop ved hjelp av spesielle fargemidler. Ingen ytterligere testing er nødvendig for et resultat på 1+ eller en poengsum på 0. Et resultat på 2+ anses som ubestemt og krever ytterligere testing. Et resultat på 3+ bekrefter det negative scenarioet.
- MOG-test (hybridisering) er neste trinn hvis det er mistanke om kreft. Det er viktig at analysen utføres av en erfaren patolog, som vil eliminere feil ved tolkning av de oppnådde resultatene. Det er to hovedtyper av tester - fisketesting for brystkreft og lysfelttesting. En positiv fisketest er den definitive diagnostiske metoden.
Svært sjelden er fiskeanalyse vag eller tvetydig. I slike tilfeller kreves det en ny biopsi og en ny fisketest for brystkreft for å bekrefte diagnosen.
Hvordan fisketesten utføres for brystkreft - en veiledning for pasienten
For riktig diagnostisering av HER 2-status, utfører legen en biopsi, hvor prøver av vev som er endret av patologien fjernes. I de fleste tilfeller brukes det lokalbedøvelse for å nøytralisere ubehag. Deretter sendes det ekstraherte vevet for undersøkelse til laboratoriet, hvor en patolog jobber med det. Det er svært viktig at laboratoriet er autoritativt i det medisinske miljøet, fordi pasientens liv er direkte avhengig av riktig diagnose. Det er bevist at fisketesten for brystkreft - sikker prosedyre. Det krever ikke mye tid, separate prosedyrer enn biopsi og ekstra vevstraumer.
Hvorfor utføres IHC-testing i utgangspunktet? Det er enklere og mer tilgjengelig. Men hvis testene ikke er konklusive, er FISH-testing obligatorisk. I sjeldne tilfeller kan en gjentatt biopsi med prøvetaking være mulig. Men dette skjer faktisk ekstremt sjelden. Dersom fisketesten for brystkreft viser positivt HER2-resultat, vil du bli foreskrevet effektiv behandling HER2 positiv kreft. Selv om det er en aggressiv form for tilstanden, har utsiktene for personer som er diagnostisert med den forbedret seg betydelig de siste årene. Dette skyldes nye og effektive metoder brystkreftbehandling i Israel rettet mot HER 2-reseptorer.
Søk om behandling