Avo декодиране на кръвна група. Генетика на кръвните групи и техните полиморфизми. Грешки при определяне на членство в група

АВО кръвногрупова системае основната кръвногрупова система, използвана при кръвопреливания на хора. Свързани анти-А и анти-В антитела (имуноглобулини) , обикновено принадлежат към типа IgM, които като правило се образуват през първите години от живота в процеса на сенсибилизация към вещества, които са наоколо, главно като храна, бактерии и вируси. Системата за кръвна група ABO присъства и при някои животни, като маймуни (шимпанзета, бонобо и горили).

История на откритието

Смята се, че системата за кръвни групи ABO е открита за първи път от австрийски учен Карл Ландщайнер(Карл Ландщайнер), който идентифицира и описва три различни вида кръв в 1900 гЗа работата си той е удостоен с Нобелова награда за физиология или медицина през 1930 г. Чрез недостатъчно тесни връзки между учени от онова време много по-късно се установява, че чешкият серолог (лекар, специализиран в изследването на свойствата на кръвния серум) Ян Янски(Jan Janský) за първи път, независимо от изследванията на K. Landsteiner, идентифицира 4 човешки кръвни групи. Откритието на Ландщайнер обаче е прието от тогавашния научен свят, докато изследванията на Й. Янски са относително неизвестни. Днес обаче класификацията на Я. Янски все още се използва в Русия, Украйна и страните от бившия СССР. В САЩ Маус публикува свой собствен, много подобен труд през 1910 г.

* К. Ландщайнер описва A, B и O групи;

* Алфред фон Декастело (Алфред фон Декастело) и Адриано Стурла (Адриано Стурли) открива четвъртата група – АВ, през 1902г.

* Лудвиг Хиршфелд (Hirszfeld) и Е. фон Дунгерн (E. von Dungern) описва наследствеността на кръвногруповата система ABO през 1910-11 г.

*През 1924г Феликс Бърнстейн (Феликс Бърнстейн) изследва и определя точните механизми на унаследяване на кръвни групи въз основа на няколко в едно.

* Уоткинс (Уоткинс) и Морган (Morgan), английски учени откриха, че ABO епитопите транспортират специфични захари - N-ацетилгалактозамин в случая на група А и галактоза в случая на група В.

*След публикуване голямо количествоВ материалите, свързани с тази информация, през 1988 г. е установено, че всички ABH вещества са прикрепени към гликосфинголипиди. И така, група, водена от Лейн (Laine) откриха, че свързването на 3 протеина води до образуването на дълга верига от полилактозоамин, съдържащ голямо количество ABH вещества. По-късно, група Ямамото потвърждава наличието на голям брой гликозилтрансферази, които съответно принадлежат към А, В и О епитопи.

АВО антигени

Антиген Н е важен предшественик на антигените на кръвногруповата система АВО. Н локусът се намира на Състои се от 3 екзона, които обхващат повече от 5 Kb от генома и кодира активността на ензима фукозилтрансфераза, който е отговорен за производството на Н антигена върху еритроцитите. Антиген Н е въглехидратна последователност, в която въглехидратите са свързани главно с протеин (малка част от тях е свързана с церамидната функционална група). Антигенът се състои от верига от β-D-галактоза, β-DN-ацетилглюкозамин, β-D-галактоза и 2-свързани молекули, α-L-фукоза, които са свързани с протеинови или серамидни молекули.

Алел I A съответства на кръвна група A, I B на кръвна група B и i на кръвна група O. Алелите I A и I B са доминиращи за i.

Само хората с тип ii имат кръвна група O. Хората с тип I A I A или I A i имат кръвна група A, а тези с тип I B I B или I B i имат кръвна група B. Докато хората с I A I B имат и двете, тъй като доминирането е между групи A и B - специална - нарича се, това означава, че родителите с кръвни групи А и В могат да имат деца с група АВ. В допълнение, дете или семейна двойка с кръвни групи A и B може да има тип O, ако и двамата родители са I B i, I A i. При цис-АВ фенотипа човек има само един ензим, отговорен за образуването на А и В антигени. В резултат на това червените кръвни клетки обикновено не произвеждат А или В антигени нормално ниво, което е характерно за групи А1 или В, което може да помогне да се обясни проблемът с появата на генетично невъзможна кръвна група.

Разпространение и еволюционна история

Разпределението на кръвните групи A, B, O и AB варира в целия свят и варира според характеристиките на определена популация. Съществуват и някои разлики в разпределението на кръвните групи в субпопулациите.

Във Великобритания разпределението на честотите на кръвните групи сред населението все още показва известна връзка с разпределението на имената на места, войнствените нашествия и миграциите на викингите, датчаните, саксонците, келтите и норманите, които доведоха до формирането на определени генетични характеристики сред населението.

Сред кавказката раса са известни шест алела на гена ABO, които са отговорни за кръвната група:

А A101 (A1) A201 (A2)

б B101 (B1)

О O01 (O1) O02 (O1v) O03 (O2)

Освен това, много редки варианти на тези алели са открити сред различни народи по света. Някои еволюционни биолози предполагат това алел I Aвъзникна по-рано с O чрез изтриване на едно, в резултат на изместване на рамката за четене, докато алел I Bсе появи по-късно. Именно на тази теория се основава изчисляването на броя на хората в света с всяка кръвна група, което е в съответствие с възприетия модел на миграция на населението и разпространението на различни кръвни групи в различни части на света.

Например, група Б много често сред Азиатско население, докато сред населението Западна Европа, тази група е доста рядка. Според друга теория, има четири основни линии на гена ABO и в които се формира тип О, се среща в човешкото тяло поне три пъти. Алел A101 се появи по-рано, последван от хронология - A201/O09, B101, O02 и O01. Дългосрочното присъствие на О алели се обяснява с резултата от стабилизиращата селекция. Тези две теории по-горе противоречат на широко разпространената преди това теория, че кръвната група О е възникнала първа.

Разпределение на ABO кръвни групи и Rh фактори по страни по света

Разпределение на ABO кръвни групи и Rh фактори по страни по света (дял от населението)
Страна	Население
Австралия
Бразилия
Финландия
Германия
Исландия
Ирландия
Холандия
Нова Зеландия

Кръвна група ВПо-често се среща сред жителите на Северна Индия и други страни от Централна Азия, докато делът му намалява както при преместване на запад, така и при преместване на изток, а броят на жителите на Испания, които имат кръвна група В, е само 1%. Смята се, че тази кръвна група не е съществувала сред населението на американските индианци и австралийските аборигени преди европейската колонизация.

Пропорция на населението с кръвна група А- най-големият сред европейското население, тази цифра е особено висока сред жителите на Скандинавия и Централна Европа, въпреки че тази кръвна група често се среща сред австралийските аборигени и етническите групи от индианци Blackfoot, живеещи в Монтана (САЩ).

Асоциация с фактора на фон Вилебранд

Антигените на системата ABO също се образуват във фактор, гликопротеин, който участва в хемостазата (спиране на кървенето). Така при хора с кръвна група О рискът от внезапно кървене се увеличава, тъй като около 30% от общата генетична вариабилност в плазмата на фактора на фон Вилебранд се обяснява с влиянието на кръвногруповата система АВО, а при лица с кръвна група О ниво на фактора на фон Вилебранд (и фактор VIII) в кръвната плазма - по-ниска, отколкото при хора с други кръвни групи.

В допълнение, нивото на VWF в общата популация постепенно намалява, което се обяснява с преобладаването на кръвна група О с Cys1584 варианта на VWF (аминокиселина в структурата на VWF) на гена ADAMTS13 (кодиращ активността на протеаза, която разгражда VWF). На хромозома 9 той заема същия локус (9q34) като кръвногруповата система ABO. | Повече ▼ високо нивоФакторът на von Willebrand се среща при хора, които са имали първия си исхемичен инсулт (от съсирване на кръвта). Резултатите от това проучване показват, че дефицитът на VWF не се дължи на появата на полиморфизъм ADAMTS13 и човешката кръвна група.

Асоциация с болести

В сравнение с хората с други кръвни групи (A, AB и B), хората с кръвна група O имат 14% по-нисък риск от развитие на плоскоклетъчен карцином и 4% по-нисък риск от базалноклетъчен карцином. Тази кръвна група също се свързва с нисък риск от рак на панкреаса. B антигените са свързани с повишен риск от рак на яйчниците. Ракът на стомаха е най-често срещан при хора с кръвна група А и по-рядко при хора с кръвна група О.

Подгрупи на кръвногруповата система АВО

А1 и А2

Кръвна група А съдържа около двадесет подгрупи, от които най-често срещаните са А1 и А2 (повече от 99%). А1 представлява около 80% от всички случаи на кръвна група А. Двете подгрупи се използват взаимозаменяемо, когато става дума за кръвопреливане, но е много рядко да възникнат усложнения при преливане на различни подтипове кръв.

Бомбайски фенотип

При хора с редки Бомбайски фенотип (HH) червените кръвни клетки не произвеждат антиген Н. Тъй като антигенът Н действа като прекурсор за производството на антигени А и В, липсата му означава, че хората нямат нито антигени А, нито В (явление, подобно на кръвна група О). Въпреки това, за разлика от групата О, няма Н антиген, т.е. В човешкото тяло се образуват изоантитела към Н антигена, както и към А и В антигените. Ако на тези хора се прелее кръв от тип О, анти-Н антителата се свързват с Н антигена на червените кръвни клетки на донора и унищожават техните собствени червени кръвни клетки чрез процес на лизис, медииран от комплемента. Ето защо хората с бомбайски фенотип могат да получат кръвопреливане само от други ч.ч.

Обозначение в Европа и страните от бившия СССР.

В някои европейски страни "О" в кръвногруповата система АВО се заменя с "0" (нула), което означава липса на А или В антиген. В страните от бившия СССР римската нумерология се използва за обозначаване на кръвни групи, а не букви. Това е оригиналът Класификация на кръвните групи на Jansky според която има четири кръвни групи I, II, III, IV, използвайки системата за кръвни групи ABO, тези числа означават съответно O, A, B и AB. Лудвиг Хирсфелд е първият, който обозначава кръвните групи като А и В.

Примери за метод за тестване на ABO и Rh-D

При използване на този метод се вземат три капки кръв за изследване и се поставят върху предметно стъкло заедно с течни реактиви. Процесът на аглутинация показва наличието или отсъствието на кръвногрупови антигени в изследвания материал.

Създаване универсална кръвот всички видове кръв и изкуствена кръв

IN април 2007 гА, международен екип от изследователи публикува в списанието Nature Biotechnology евтин и ефективен методПревръщане на кръвни групи A, B и AB в кръвна група O. Този процес се осъществява с помощта на ензими гликозидаза, получени от специфична бактерия, които позволяват освобождаването на антигени на кръвна група от червените кръвни клетки.

Премахването на антигени А и В все още не решава проблема с Rh антигените, съдържащи се в кръвните клетки. Преди да се използва този метод, е необходимо да се проведат задълбочени изследвания и експерименти с участието на голям брой хора. Друг подход за решаване на проблема с кръвните антигени е създаването на изкуствена кръв, която може да се използва като заместител в спешни ситуации.

Хипотези

Има много популярни хипотези, свързани със системата за кръвни групи ABO. Те възникват веднага след откриването на кръвногруповата система АВО и могат да бъдат намерени в различни култури по света. Например през 30-те години на миналия век теориите, свързващи кръвните групи и типа на личността, стават популярни в Япония и някои други части на света.

Популярност на книгата Питър д'Адамо(Питър Дж. Д'Адамо) "Яжте това, от което се нуждае кръвта ви" и неговата концепция за група 4 - 4 пътища към здравето, показва, че подобни теории остават популярни днес. Според книгата на този автор можете да определите оптималната диета въз основа на системата за кръвни групи ABO (диета за кръвни групи).

Друго интересно прозрение е, че наличието на кръвна група А причинява тежък махмурлук, тип О се свързва с отлични зъби, а хората с тип А2 имат най-високо ниво на IQ. Към днешна дата обаче няма научни доказателства за тези твърдения.

Следователно диета (хранене), базирана на кръвни групи, връзка с характер, тип личност или връзка с тежестта на махмурлука, е малко вероятно да бъде достатъчно обоснована и не си струва да свързвате тези признаци или характеристики с наличието на определена кръвна група.

Тест за антитела по системата ABO– общо клинично изследване, насочено към идентифициране на алфа- или бета-изохемаглутинини в кръвта - естествени антитела от клас IgG към липсващи антигени А или В. Те се определят в случай на несъвместимост на майката и плода според антигените на системата ABO. Откриването на анти-групови антитела в кръвта на бременна жена е необходимо за диагностициране на междугрупов конфликт и своевременно терапевтични меркиза предотвратяване на спонтанен аборт, преждевременно раждане, хемолитична болестплод (новородено). Кръвта се взема от вена. Методът на изследване е реакцията на аглутинация. Обикновено (с малка вероятност за междугрупов конфликт) резултатът е отрицателен. Готовност на резултатите от анализа – един работен ден.

ABO антителата или антигруповите антитела са имуноглобулини, които се произвеждат, когато в кръвта се появи групово несъвместим антиген. Кръвната група зависи от присъстващите на навънеритроцитни мембрани от специални протеини - аглутиногени. В медицинската практика се определят аглутиногени А, В и D. При хора с кръвна група I червените кръвни клетки нямат протеини А и В, в група II - с протеини тип А, в група III - с протеини тип В, в група IV - с протеини тип В А и В. Наличието или отсъствието на аглутиноген D определя положителния или отрицателния Rh фактор. Антигруповите антитела се произвеждат от тялото, когато в кръвта навлязат червените кръвни клетки, съдържащи непознати аглутиногени А или В. Реакцията на тези антитела води до унищожаване на чужди червени кръвни клетки.

Производството на антитела чрез системата ABO е възможно чрез кръвопреливания, при смесване на кръвта на плода и майката. Теоретично груповата несъвместимост на кръвта се определя в следните случаи: ако реципиентът (майката) има I или III кръвна група, а донорът (плодът) има II; ако реципиентът (майката) има кръвна група I или II, а донорът (плодът) има кръвна група III; ако реципиентът (майката) има I, II или III кръвна група, а донорът (плодът) има IV. На практика производството на антигрупови антитела най-често се наблюдава при жени с кръвна група I, тъй като тя не съдържа аглутиногени А и В и в същото време е най-често срещаната. Имуноконфликтът по време на бременност може да доведе до еритробластоза на новороденото, а при кръвопреливания - до интраваскуларна хемолиза на червените кръвни клетки. В риск са реципиентите след няколко кръвопреливания, както и бременните жени, претърпели кръвопреливания, изкуствени и естествени аборти и които имат деца с хемолитична болест.

За изследване на кръвта за антитела с помощта на системата ABO се взема кръв от вена. Най-често срещаният метод за изследване е реакцията на аглутинация с помощта на дифузионен гел. Резултатите се използват в акушерството и гинекологията при планиране и проследяване на бременността, както и в хирургията и реанимацията при извършване на кръвопреливания.

Показания

Кръвен тест за антитела, използващ системата ABO, е показан за жени по време на бременност, ако има възможност за развитие на имунологичен групов конфликт. При определяне на риска се взема предвид комбинацията от родителски кръвни групи. Наличието на антитела в кръвта най-често се определя при бременни жени с I група, ако бащата е предал II, III или IV на детето. Също така вероятностно конфликтни са комбинациите II майчина + III или IV бащина, III майчина + II или IV бащина. При предписване на анализ се вземат предвид други рискови фактори: нарушена плацентарна пропускливост, коремна травма, инвазивни диагностични процедури (например амниоцентеза). Във всички тези случаи е възможно червените кръвни клетки на плода да навлязат в кръвта на майката с последващо производство на анти-групови антитела. Невъзможно е клинично да се определи наличието на имунологичен конфликт от този тип - жената не усеща никакви промени. Но ако не наблюдавате титъра на антителата, тогава съществува риск детето да развие хемолитична болест, която се проявява с оток, жълтеница, анемия, увеличение на далака и черния дроб, а в тежки случаи - изоставане в развитието.

Друга индикация за изследване на кръвта за антитела с помощта на системата ABO са усложнения след кръвопреливане. По време на групов конфликт често се развива остра интраваскуларна хемолиза - реакцията на разрушаване на червените кръвни клетки от инжектирана кръв. Проявява се с усещане за парене на мястото на инфузия, треска, втрисане, болка в гърба и торса, паническа атака. При наблюдение на бременността решението за провеждане на анализ се взема от лекаря, като се вземат предвид съвкупността от рискови фактори за развитието на групов конфликт. Кръвният тест за антитела по системата ABO не е скрининг тест, за разлика например от теста за антиеритроцитни антитела. Това се дължи на факта, че имунологичен конфликт от този тип се развива рядко, а хемолитичната болест протича в лека форма и се проявява главно с неонатална жълтеница

Подготовка за анализ и събиране на материал

Материалът за изследване на антитела по системата ABO е деоксигенирана кръв. Процедурата за събиране обикновено се извършва сутрин. Няма специални изисквания за подготовка, препоръчително е да дарите кръв 4-6 часа след хранене. Последните 30 минути трябва да преминат в спокойна обстановка, без физически и емоционален стрес. Кръвта се взема от кубиталната вена с помощта на вакуумна система без антикоагулант или с активатор на съсирването. Съхранява се при температура от 2 до 8° C, доставя се в лабораторията за 2-3 часа.

Антителата според системата ABO се определят в кръвта чрез метода на аглутинация. Изследователската процедура се състои от няколко етапа. Първо, тестовата проба се добавя към микроепруветки с филтриращ гел. След това се поставят за известно време в инкубатор, а след това в центрофуга. Червените кръвни клетки, които са свързани с анти-групови антитела, са с по-голям размер и следователно не преминават през гела, а остават на повърхността му. В резултат на центрофугирането свободните червени кръвни клетки се утаяват на дъното на епруветката. Разпределението на червените кръвни клетки оценява наличието на антитела в пробата. Подготовката на резултатите от изследването отнема 1 ден.

Нормални стойности

Антителата на системата ABO са представени от два вида - α и β. Първите се произвеждат в аглутиноген А, вторият - в аглутиноген В. И двата вида антитела могат да бъдат естествени и имунни, т.е. придобити в резултат на сенсибилизация. Обикновено титърът на естествените α-антитела е от 1:8 до 1:256, титърът на естествените β-антитела е от 1:8 до 1:128. Имунните анти-групови антитела обикновено не се откриват. При деца и възрастни хора може да се установи физиологично намаляване на нивото на естествените антитела.

Увеличаване на стойностите

Причината за повишаване на стойностите на теста за антитела според системата ABO е сенсибилизация на тялото, причинена от приема на антиген, който е несъвместим на групова основа. В тези случаи се повишават титрите на естествените антигрупови антитела и понякога се определят пълни и непълни форми на имунни антигрупови антитела. Най-често отклонения от това естество се диагностицират при бременни жени с кръвна група I, тъй като червените кръвни клетки нямат аглутиногени от тип А или тип В, ​​а честотата на поява на групата е 45%.

Намаляване на стойностите

Намаляване на стойностите на теста за антитела според системата ABO няма диагностична стойност, неговите причини могат да бъдат някои патологии, например агамаглобулинемия, болест на Ходжкин, хронична лимфоцитна левкемия. При липса на изоимунизация със специфични фактори липсват имунни антигрупови антитела и естествените титри са ниски.

Лечение на аномалии

Кръвният тест за антитела по системата ABO има най-голямо прогностично значение при проследяване на бременност при жени с I кръвна група. Резултатите от него позволяват да се идентифицира състоянието на чувствителност към групови фактори и да се предотврати развитието на имунологичен конфликт, водещ до еритробластоза на новороденото. Ако се открие повишен титър на естествени анти-групови антитела, определят се имунни антитела, тогава е необходимо да се потърси съвет от акушер-гинеколога, водещ бременността. Решението за необходимостта и тактиката на терапията се взема индивидуално от специалист.

ОБЩИ ПОЛОЖЕНИЯ

Кръвногруповата система АВО се състои от две групи аглутиногени – А и В и два съответни аглутинина в плазмата – алфа (анти-А) и бета (анти-В). Различни комбинации от тези антигени и антитела образуват четири кръвни групи: група 0(1) - и двата антигена отсъстват; група А (II) - върху червените кръвни клетки присъства само антиген А; група B (III) - върху еритроцитите присъства само антиген B; група АВ (IV) - антигени А и В присъстват върху червените кръвни клетки.

Уникалността на системата АВО е, че в плазмата на неимунизираните хора има естествени антитела към антиген, който не присъства в червените кръвни клетки: при хора от група 0(1) - антитела към А и В; при лица от група А (II) - анти-В антитела; при лица от група B(III) - анти-А антитела; лица от група AB(IV) нямат антитела към антигени на системата ABO.

В следващия текст анти-А и анти-В антителата ще се наричат ​​анти-А и анти-В.

Определянето на кръвната група ABO се извършва чрез идентифициране на специфични антигени и антитела (двойна или кръстосана реакция). Анти-А и анти-В се откриват в серума с помощта на стандартни червени кръвни клетки A(II) и B(III). Наличието или отсъствието на антигени А и В върху еритроцитите се определя с помощта на моноклонални или поликлонални антитела (стандартни хемаглутиниращи серуми) с подходяща специфичност.

Определянето на кръвната група се извършва два пъти: първичното изследване - в медицинско отделение(екип за вземане на кръв); потвърдителни изследвания - в лабораторния отдел. Алгоритъм за имунохематологични лабораторни изследванияпо време на кръвопреливане е показано на фиг. 18.1.

Резултатът от определянето на кръвната група се записва в горния десен ъгъл на предния лист на медицинската история или в донорския дневник (карта), като се посочва датата и се подписва от лекаря, който е направил определянето.

В северозападната част на Русия разпределението на кръвните групи ABO в населението е както следва: група 0(I) - 35%; група A(II) - 35-40%; група B(III) - 15-20%; група АВ (IV) - 5-10%.

Трябва да се отбележи, че има различни видове(слаби варианти) както на антиген А (в по-голяма степен), така и на антиген В. Най-често срещаните видове антиген А са А 1 и А 2. Разпространението на антигена А 1 при лица от групи А (II) и АВ (IV) е 80%, а антигенът А 2 е около 20%. Кръвни проби, съдържащи А2, може да съдържат анти-А1 антитела, които реагират със стандартните червени кръвни клетки от група А(II). Наличие на анти-А 1 се открива при кръстосано определяне на кръвни групи и при индивидуален тест за съвместимост.

За диференцирано определяне на варианти на антиген А (А 1 и А 2) е необходимо да се използват специфични реагенти (фитохемаглутинини или моноклонални антитела анти-А 1. Пациентите от групи А 2 (II) и А 2 В (IV) трябва да бъдат трансфузия с хемокомпоненти, съдържащи еритроцити, съответно от групи A 2 (II) и A 2 B (IV). Могат да се препоръчат и трансфузии на промити червени кръвни клетки: 0 (I) - пациенти с кръвна група A 2 (II); 0(I) и B(III) - пациенти с кръвна група A 2 B(II).

Таблица 18.4. Резултати от определяне на кръвна група АВО
Резултати от изследванията						Групова принадлежност на изследваната кръв
червени кръвни клетки с реактив			серум (плазма) със стандартни червени кръвни клетки
анти-AV	анти-А	анти-В	0 (I)	A(II)	B (III)
-	-	-	-	+	+	0 (I)
+	+	-	-	-	+	A(II)
+	-	+	-	+	-	B(III)
+	+	+	-	-	-	AB(IV)
Наименования: + - наличие на аглутинация, - - липса на аглутинация

Определяне на кръвна група по системата ABO

Кръвните групи се определят с помощта на стандартни серуми (обикновена реакция) и стандартни еритроцити (двойна или кръстосана реакция).

Кръвната група се определя чрез проста реакция, като се използват две серии стандартни изохемаглутиниращи серуми.

• Напредък на решимостта [покажи] .

  Определянето на кръвна група се извършва при добро осветление и температура от + 15 до + 25 ° C на таблетки. От лявата страна на таблета пишат 0(1), в средата - A(II), на правилната страна- B(III). В средата на горния край на таблета отбележете името на донора или номера на изследваната кръв. Използвайте активни стандартни серуми от три групи (O, A, B) с титър най-малко 1:32, в две серии. Серумите се поставят в специални стелажи на два реда. Всеки серум има етикетирана пипета. За допълнителен контрол се използва серум от група AB(IV).

  Една или две капки стандартни серуми се нанасят върху таблетката в два реда: серум от група 0 (1) - отляво, серум от група А (II) - в средата, серум от група В (III) - от точно.

  Капки кръв от пръст или епруветка се нанасят с пипета или стъклена пръчица близо до всяка капка серум и се смесват с пръчка. Количеството кръв трябва да бъде 8-10 пъти по-малко от серума. След смесване плочата или таблетката се разклащат леко в ръцете, което спомага за по-бърза и по-прецизна аглутинация на червените кръвни клетки. При настъпване на аглутинация, но не по-рано от 3 минути, към капките серум с червени кръвни клетки, където е настъпила аглутинация, се добавя една капка 0,9% разтвор на натриев хлорид и наблюдението продължава до изтичане на 5 минути. След 5 минути прочетете реакцията в пропусната светлина.

  Ако аглутинацията е неясна, към сместа от серум и кръв се добавя допълнително една капка 0,9% разтвор на натриев хлорид, след което се дава заключение за груповата принадлежност (Таблица 18.4).

• Резултати от реакцията [покажи] .
  1. Липсата на аглутинация и в трите капки показва, че в изследваната кръв няма аглутиноген, т.е. кръвта принадлежи към група 0 (I).
  2. Началото на аглутинация в капки със серуми 0(I) и B(III) показва, че в кръвта има аглутиноген А, т.е. кръвта принадлежи към група А(II).
  3. Наличието на аглутинация в капки със серуми от група 0(I) и A(II) показва, че изследваната кръв съдържа аглутиноген B, т.е. кръв от група B(III).
  4. Аглутинацията и в трите капки показва наличието на аглутиногени А и В в изследваната кръв, т.е. кръвта принадлежи към група АВ (IV). Въпреки това, в този случай, като се има предвид, че аглутинацията с всички серуми е възможна поради неспецифична реакция, е необходимо да се приложат две или три капки стандартен серум от група AB (IV) върху таблетката или плаката и да се добави 1 капка от теста кръв за тях. Серумът и кръвта се смесват и резултатът от реакцията се наблюдава в продължение на 5 минути.

     Ако не настъпи аглутинация, тогава изследваната кръв се класифицира като група AB(IV). Ако се появи аглутинация със серум от група АВ (IV), тогава реакцията е неспецифична. При слаба аглутинация и при всички съмнителни случаи кръвта се изследва повторно със стандартни серуми от други серии.

Определяне на кръвна група АВО чрез двойна реакция
(на базата на стандартни серуми и стандартни еритроцити)

Стандартните червени кръвни клетки са 10-20% суспензия от пресни естествени червени кръвни клетки (или тестови клетки, измити от консерванти) от групи 0(I), A(II) и B(III) в 0,9% разтвор на натриев хлорид или цитрат - физиологичен разтвор. Нативните стандартни червени кръвни клетки могат да се използват в рамките на 2-3 дни, ако се съхраняват в изотоничен физиологичен разтвор при температура +4°C. Консервираните стандартни червени кръвни клетки се съхраняват при +4°C в продължение на 2 месеца и се измиват от консервиращия разтвор преди употреба.

Ампули или флакони със стандартни серуми и стандартни червени кръвни клетки се поставят в специални стелажи с подходяща маркировка. За работа с типизиращи реактиви използвайте сухи, чисти пипети, отделни за всеки реагент. За да измиете стъклени (пластмасови) пръчици и пипети, пригответе чаши с 0,9% разтвор на натриев хлорид.

За да определите групата, вземете 3-5 ml кръв в епруветка без стабилизатор. Кръвта трябва да престои 1,5-2 часа при температура от + 15-25 ° C.

• Напредък на решимостта [покажи] .

  Две капки (0,1 ml) стандартни серуми от групи 0(I), A(II), B(III) от две серии се нанасят върху таблетката. Съответно на всяка група серуми се дава една малка капка (0,01 ml) стандартни еритроцити от групи 0(I), A(II), B(III). Една капка тестова кръв се добавя към стандартните серуми и две капки тестов серум се добавят към стандартните еритроцити. Количеството кръв трябва да бъде 8-10 пъти по-малко от серума. Капките се смесват със стъклена пръчка и, разклащайки таблетката в ръцете си в продължение на 5 минути, наблюдавайте началото на аглутинацията. Ако аглутинацията е неясна, към сместа от серум и кръв се добавя допълнителна капка 0,9% разтвор на натриев хлорид (0,1 ml), след което се прави заключение за груповата принадлежност (Таблица 18.4).

• Оценка на резултатите от определянето на кръвната група ABO [покажи] .
  1. Наличието на аглутинация със стандартни еритроцити А и В и липсата на аглутинация в три стандартни серума от две серии показва, че тест серумът съдържа и двата аглутинина - алфа и бета, и няма аглутиногени в тестовите еритроцити, т.е. принадлежи към група 0 (I).
  2. Наличието на аглутинация със стандартни серуми от групи 0(I), B(III) и със стандартни еритроцити от група B(III) показва, че тестваните еритроцити съдържат аглутиноген А, а тестваният серум съдържа аглутинин бета. Следователно кръвта принадлежи към група А (II).
  3. Наличието на аглутинация със стандартни серуми от групи 0(I), A(II) и със стандартни еритроцити от група A(II) показва, че тестовите еритроцити съдържат аглутиноген В, а тестовият серум съдържа аглутинин алфа. Следователно кръвта принадлежи към група В (III).
  4. Наличието на аглутинация с всички стандартни серуми и липсата на аглутинация с всички стандартни еритроцити показва, че изследваните еритроцити съдържат и двата аглутинина, т.е. кръвта принадлежи към група АВ (IV).

Определяне на кръвна група
използвайки анти-А и анти-В золиклони

Анти-А и анти-В золиклони (моноклонални антитела към антигени А и В) са предназначени за определяне на кръвната група на човешката ABO система вместо стандартни изохемаглутиниращи серуми. За всяко определяне на кръвна група се използва една серия от анти-А и анти-В реагенти.

• Напредък на решимостта [покажи] .

  Една голяма капка анти-А и анти-В золиклони (0,1 ml) се нанася върху таблетката (плаката) под съответните надписи: "Анти-А" или "Анти-В". Една малка капка от кръвта, която се тества, се поставя наблизо (съотношението на кръвния реагент е 1:10), след това реагентът и кръвта се смесват и протичането на реакцията се наблюдава чрез леко разклащане на таблетката или плаката.

  Аглутинацията с анти-А и анти-В коликлони обикновено настъпва през първите 5-10 s. Наблюдението трябва да се проведе в продължение на 2,5 минути, поради възможността за по-късно начало на аглутинация с червени кръвни клетки, съдържащи слаби типове антигени А или В.

• Оценка на резултатите от реакцията на аглутинация с анти-А и анти-В циклони е представена в таблица. 18.4, който също включва резултатите от определянето на аглутинини в донорен серум с помощта на стандартни еритроцити.

При съмнение за спонтанна аглутинация при лица с кръвна група AB(IV) се извършва контролно изследване с 0,9% разтвор на натриев хлорид. Реакцията трябва да е отрицателна.

Коликлони анти-А (розови) и анти-В ( от син цвят) се предлагат както в нативна, така и в лиофилизирана форма в ампули от 20, 50, 100 и 200 дози с разтворител, прикрепен към всяка ампула от съответно 2, 5, 10, 20 ml.

Допълнителен контрол за правилното определяне на кръвната група ABO с помощта на анти-А и анти-В реагенти е моноклоналният анти-АВ реагент (Хематолог, Москва). Препоръчително е да използвате анти-AB реагента успоредно с поликлонални имунни серуми и моноклонални реагенти. В резултат на реакцията с анти-АВ реагента се развива аглутинация на еритроцити от групи А (II), В (III) и АВ (IV); еритроцитите от група 0(I) нямат аглутинация.

ГРЕШКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ЧЛЕНСТВОТО В ГРУПАТА

Грешките при определяне на кръвните групи могат да зависят от три причини:

1. технически;
2. непълноценност на стандартните серуми и стандартните еритроцити;
3. биологични характеристики на изследваната кръв.

Грешките поради технически причини включват:

• а) неправилно поставяне на серуми върху плаката;
• б) неправилно количествено съотношение на серум и еритроцити;
• в) използването на недостатъчно чисти таблетки и други предмети, влизащи в контакт с кръвта. Трябва да има отделна пипета за всеки серум; За измиване на пипети трябва да се използва само 0,9% разтвор на натриев хлорид;
• г) неправилно записване на изследваната кръв;
• д) неспазване на необходимото време за реакцията на аглутинация; в случай на бързане, когато реакцията се вземе предвид преди изтичането на 5 минути, аглутинацията може да не настъпи, ако има слаби аглутиногени в изследваната кръв; ако реакцията е преекспонирана за повече от 5 минути, капчиците могат да изсъхнат от краищата, симулирайки аглутинация, което също ще доведе до погрешно заключение;
• е) липса на аглутинация поради висока (над 25°C) температура на околната среда. За да избегнете тази грешка, препоръчително е да използвате специално приготвени серуми за работа в горещ климат; извършете определянето на кръвните групи върху чиния или пластмасова тава, външната повърхност на дъното на която е потопена в студена вода.
• ж) неправилно центрофугиране: недостатъчното центрофугиране може да доведе до фалшиво отрицателен резултат, а прекомерното центрофугиране може да доведе до фалшиво положителен резултат.

Грешки в зависимост от използването на по-ниски стандартни серуми и стандартни еритроцити:

• а) слаби стандартни серуми с титър по-нисък от 1:32 или с изтекъл срок на годност могат да причинят късна и слаба аглутинация;
• б) използването на неподходящи стандартни серуми или нестерилно приготвени и недостатъчно консервирани еритроцити води до възникване на неспецифична „бактериална” аглутинация.

Грешки в зависимост от биологичните характеристики на изследваната кръв:

Грешки в зависимост от биологичните характеристики на изследваните червени кръвни клетки:

• а) късната и слаба аглутинация се обяснява със "слаби" форми на антигени, еритроцити и по-често с наличието на слаб аглутиноген А 2 в групи А и АВ. В същото време, в случай на определяне на кръвната група без тестване на серума за наличие на аглутинини (проста реакция), могат да възникнат грешки, в резултат на което кръвта от група A 2 B се определя като група B (III) , а кръв А 2 - като група 0 (I). Следователно, за да се избегнат грешки, определянето на кръвната група както на донорите, така и на реципиентите трябва да се извърши с помощта на стандартни червени кръвни клетки (двойна или кръстосана реакция). За идентифициране на аглутиноген А 2 се препоръчва да се повтори изследването с други видове (серии) реактиви, като се използва друга лабораторна стъклария, като се увеличи времето за регистриране на реакцията.

  Специфични реагенти за изясняване на кръвната група при наличие на слаби варианти на антигена А (А 1, А 2, А 3) с помощта на реакцията на директна аглутинация са анти-А cl золикон и анти-А реагент).

• б) „панаглутинация“ или „автоаглутинация“, т.е. способността на кръвта да дава същата неспецифична аглутинация с всички серуми и дори със собствения си. Интензивността на такава реакция отслабва след 5 минути, докато истинската аглутинация се увеличава. Най-често се среща при хематологични, онкологични пациенти, обгорени пациенти и др. За контрол се препоръчва да се прецени дали настъпва аглутинация на изследваните еритроцити в стандартен серум от група АВ (IV) и физиологичен разтвор.

  Кръвната група по време на „панаглутинация“ може да се определи след трикратно измиване на червените кръвни клетки. За да се елиминира неспецифичната аглутинация, таблетката се поставя в термостат при температура +37 ° C за 5 минути, след което неспецифичната аглутинация изчезва, но истинската остава. Препоръчително е определянето да се повтори с помощта на моноклонални антитела и тест на Coombs.

  В случай, че измиването на червените кръвни клетки не дава желан резултат, е необходимо повторно вземане на кръвна проба в предварително затоплена епруветка, поставяне на пробата в термоконтейнер за поддържане на температура от +37°C и доставка в лабораторията за изследване. Определянето на кръвна група трябва да се извършва при температура +37°C, за което се използват предварително загряти реактиви, физиологичен разтвор и таблетка.

• в) червените кръвни клетки на изследваната кръв образуват "монетни колони", които могат да бъдат сбъркани с аглутинати при макроскопско изследване. Добавянето на 1-2 капки изотоничен разтвор на натриев хлорид, последвано от леко разклащане на таблетката, като правило, унищожава "монетните колони".
• г) смесена или непълна аглутинация: някои от червените кръвни клетки аглутинират, а други остават свободни. Наблюдава се при пациенти от групи A(II), B(III) и AB(IV) след трансплантация на костен мозък или през първите три месеца след кръвопреливане от група 0(I). Хетерогенността на периферните кръвни еритроцити е ясно потвърдена в теста DiaMed gel.

Грешки в зависимост от биологичните характеристики на тествания серум:

• а) откриването на антитела с различна специфичност по време на рутинно изследване е резултат от предишна сенсибилизация. Препоръчително е да се определи специфичността на антителата и да се изберат типизирани червени кръвни клетки без антигена, към който е открита имунизацията. От имунизирания реципиент се изисква индивидуално да избере съвместима донорска кръв;
• б) ако се установи образуването на "монетни колони" от стандартни еритроцити в присъствието на тест серум, препоръчително е да се потвърди анормалният резултат с помощта на стандартни еритроцити от група 0 (I). За разграничаване на „монетни колони“ от истински аглутинати, добавете 1-2 капки изотоничен разтвор на натриев хлорид и разклатете таблетката, докато „монетните колони“ се унищожат;
• в) липса на анти-А или анти-В антитела. Възможно при новородени и пациенти с потиснат хуморален имунитет;
общо страници: 10

ЛИТЕРАТУРА [покажи] .

1. Имунологичен подбор на донор и реципиент за кръвопреливания, неговите компоненти и трансплантации на костен мозък / Comp. Шабалин В.Н., Серова Л.Д., Бушмарина Т.Д. и др. - Ленинград, 1979. - 29 с.
2. Kaleko S. P., Serebryannaya N. B., Ignatovich G. P. и др.Алосенсибилизация по време на хемокомпонентна терапия и оптимизиране на подбора на хистосъвместими двойки донор-реципиент във военномедицински институции / Методология. препоръки - Санкт Петербург, 1994. - 16 с.
3. Практическа трансфузиология / Изд. Козинец Г.И., Бирюкова Л.С., Горбунова Н.А. и др. - Москва: Триада-Т, 1996. - 435 с.
4. Ръководство по военна трансфузиология / Изд. Е. А. Нечаев. - Москва, 1991. - 280 с.
5. Ръководство по трансфузионна медицина / Изд. Е. П. Сведенцова. - Киров, 1999.- 716 с.
6. Румянцев А. Г., Аграненко В. А. Клинична трансфузиология - М.: ГЕОТАР МЕДИЦИНА, 1997. - 575 с.
7. Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б., Безопасно кръвопреливане: Ръководство за лекари , - Санкт Петербург: Питър, 2000. - 320 с.
8. Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б., Серебряная Н.Б. Имунологична и инфекциозна безопасност на хемокомпонентната терапия - Санкт Петербург: Наука, 1998. - 232 с.
9. Шифман Ф. Дж. Патофизиология на кръвта / Превод. от английски - М. - Санкт Петербург: Издателство БИНОМ - Невски диалект, 2000. - 448 с.
10. Кръвопреливане в клиничната медицина / Ed. P.L.Mollison, C.P. Engelfriet, M. Contreras.- Оксфорд, 1988.- 1233 p.

Източник: Медицинска лабораторна диагностика, програми и алгоритми. Изд. проф. Карпищенко А. И., Санкт Петербург, Интермедика, 2001 г

Тази система е основната, която определя съвместимостта или несъвместимостта на прелятата кръв. Той включва два генетично определени важни антигена: А и В - и два вида антитела към тях, аглутинини a и b. Комбинациите от аглутиногени и аглутинини определят 4 групи на системата ABO. Тази система е единствената, при която хората без имунитет имат естествени антитела срещу липсващия антиген в тяхната плазма. Аглутиноген А при повечето хора е добре изразен (има голяма антигенна сила): с анти-А антитела (а) той дава изразена реакция на аглутинация на еритроцитите. При приблизително 12% от индивидите от групи A(11) и AB(IV) антигенът има слаби антигенни свойства, той се обозначава като антиген А2. По този начин има група антигени А: А1 (силен) и по-слаби А2, А3, А4 и т.н. Наличието на слаби А антигени трябва да се помни при определяне на кръвни групи, тъй като червените кръвни клетки с такива антигени са способни да дават само късна и слаба аглутинация, което може да доведе до грешки. Слабите варианти на В антигена са много редки. Антителата на системата ABO a (анти-A) и b (анти-B) са нормално свойство на кръвната плазма, което не се променя качествено по време на живота на човека, и b са пълни, студени антитела. В повечето случаи те не се срещат при новородени и се появяват през първите три месеца от живота или дори една година. Груповите аглутинини достигат пълно развитие до 18-годишна възраст, а в напреднала възраст техният титър (ниво) намалява, което се наблюдава и при имунодефицитни състояния. В допълнение към нормално съществуващите (естествени) антитела от групата a и b, в някои случаи възникват имунни антитела anti-A и anti-B. Най-честата причина за това е бременността, при която майката и плодът имат различни групикръв, по-често ако майката е група 1(0), плодът е 11(А) или Ш(В). Определянето на кръвната група е необходимо за съвместимо кръвопреливане. В този случай е необходимо да се придържате към правилото: червените кръвни клетки на донора не трябва да съдържат антиген, съответстващ на антителата на реципиента, т.е. A и a, B и c, тъй като в противен случай ще има масово унищожаване на инжектираната червена кръв. клетки от антителата на пациента - хемолиза, която може да доведе до смърт на реципиента. Груповите антитела на донора могат да бъдат пренебрегнати, тъй като те се разреждат от плазмата на реципиента. Следователно кръв тип O(I), която не съдържа аглутиногени, може да се прелива на хора от всяка кръвна група. Лицата с кръвна група 0(1) се считат за „универсални донори“. Кръв от група A(P) може да се прелива в реципиенти от група A(P) и група AB(IV), които нямат аглутинини в плазмата. Кръв от група B(III) може да се прелива на лица с група B(III) и AB(IV).

Определянето на кръвните групи на системата ABO се извършва по следните методи.

I. Определяне на кръвна група с помощта на стандартни изохемаглутиниращи серуми. С този метод се определя наличието или отсъствието на аглутиногени в кръвта и въз основа на това се прави заключение за груповата принадлежност на изследваната кръв.

2. Определяне на кръвна група чрез кръстосан метод, т.е. едновременно използване на стандартни изохемаглутиниращи серуми и стандартни еритроцити. С този метод, както и с първия, се определя наличието или отсъствието на аглутиногени и в допълнение, като се използват стандартни червени кръвни клетки, се определя наличието или отсъствието на групови аглутинини.

3. Определяне на кръвна група с помощта на моноклонални антитела (COLICLONS).

ГРЕШКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЯНЕ НА КРЪВНИ ГРУПИ

Технически грешки. Нарушаването на посочените правила за определяне на кръвни групи може да доведе до неправилна оценка на резултатите от реакцията. Отклоненията от правилата могат да включват:

Използване на нискокачествени стандартни серуми или червени кръвни клетки (изтекъл срок на годност, замърсяване с тях, изсъхване на серуми);

Смесване на кръвни проби;

Неправилно поставяне на стандартни серуми или фоцити в стелажи;

Неправилен ред на прилагане на стандартни реактиви върху плаката;

Неправилно съотношение серум към червени кръвни клетки (не 10:1);

Проучване при температура под 15 ° C (настъпва студена аглутинация) или над 25 ° C (аглутинацията се забавя);

Неспазване на необходимото време за реакция (5 минути);

Не добавяйте физиологичен разтвор, последвано от разклащане на чинията;

Не използвайте контролна реакция със серум от ABo(IV) група;

Използване на мръсни или мокри пипети, пръчки, чинии.

Във всички случаи на неясни или съмнителни резултати е необходимо повторно определяне на кръвната група чрез кръстосано изследване с използване на стандартни серуми от други серии.

Грешки, свързани с биологични особеностиизследвана кръв.

Неправилно идентифициране на група A 2 и A 2 B. Червените кръвни клетки със слаб антиген А образуват малки, бавно появяващи се аглутинати с антисерум. Реакцията може да се приеме като отрицателна, т.е. група A 2 погрешно е регистрирана като O(1), а A 2 B като B(III). Рискът от такава грешка е особено висок при едновременно наличие на технически грешки (съотношението на серума към червените кръвни клетки е 10:1, температурата е над 25 ° C, резултатите се вземат предвид по-рано от 5 минути).

Грешки, свързани с наличието на неспецифична аглутинация на изследваните еритроцити. Това явление се наблюдава при пациенти злокачествени тумори, левкемия, сепсис, изгаряния, чернодробна цироза, автоимунна хемолитична анемия и се причинява от диспротеинемия. Открива наличието на неспецифична аглутинация чрез контрол със серум от група ABO (IV). В тези случаи е необходимо да се преопредели членството в групата, като се използва метод на напречно сечение. В капки, където се наблюдава аглутинация, можете да добавите физиологичен разтвор, загрят до 37 ° C. Ако е необходимо, можете да измиете изследваните червени кръвни клетки с топъл (37°C) физиологичен разтвор и да определите отново кръвната група.

Грешки, свързани с наличието на екстрааглутинини. В кръвния серум на индивиди от групи A2 (P) и A2B (IV) антитела срещу антигена А1 - a1 - се откриват в приблизително 1% от случаите. Това усложнява определянето на кръвната група чрез кръстосания метод, тъй като серумът на такива индивиди аглутинира стандартни червени кръвни клетки от група A (P), т.е. се проявява като серум от група 0 (1).

При някои заболявания се наблюдава намаляване на аглутиниращата способност на еритроцитите, особено група А(Р).

При състояния на имунна недостатъчност при възрастните хора се наблюдава намаляване на нивото на груповите аглутинини.

Във всички случаи на получаване на съмнителен резултат, определянето на кръвната група трябва да се повтори, като се използва метод на напречно сечение, като се използват серуми с по-висока активност.

18. Антигени на Rh системата. Rh системни групи. Клинично значение. Методи за определяне на Rh антигени и възможни грешки.

Rh антигените са вторият по важност в трансфузионната практика след кръвните групи ABO , По време на периода на активно въвеждане на кръвопреливания в клиниката, броят на посттрансфузионните усложнения след многократни трансфузии на кръв, съвместима с ABO антигени, значително се е увеличил. Системата Rh включва шест антигена, за обозначаване на които две номенклатури се използват паралелно: Wiener (Rh 0, rh", rh", Hr 0, hr", hr"); Фишер и Райс (D, C, E, d, c, e).

Rh 0 - D, rh" - C, rh" - E, Hr 0 - d, hr" - c, hr" - e.

Тъй като Rho(D) антигенът е най-активният в тази система, той се нарича Rh фактор. В зависимост от наличието или отсъствието на този фактор хората се разделят на Rh-положителни (Rh+) и Rh-отрицателни (Rh-). Това разделение се приема само по отношение на получателите. Антигените rh"(C) и rh"(E) са по-малко активни от Rho(D), но антитела към тях могат да бъдат произведени и при хора, които не съдържат антигени C и E в техните червени кръвни клетки. Следователно изискванията към червените кръвни клетки от Rh отрицателни донори са по-строги. Червените кръвни клетки не трябва да съдържат не само антиген D, но и С и Е. Антигените Hro(d), hr"(c), hr"(e) се характеризират с ниска активност, въпреки че hr"(c) антителата могат да причинят изоимунологични конфликти 1-3% от Rh-положителните индивиди имат слаб вариант на D - D антигена в техните еритроцити, което определя наличието на малка, съмнителна аглутинация при определяне на Rh фактора. В тези случаи Rh факторът на кръвта на реципиента или на бременната жена се обозначава като Rh отрицателен (Rh-), а Rh факторът на кръвта на донора се обозначава като Rh положителен (Rh+). Не се допуска преливане на кръв с антиген D на Rh-отрицателни реципиенти. Rh антигените се образуват на 8-10 седмица от ембриогенезата и тяхната антигенност може дори да надвишава активността на антигените при възрастни. Системата Rh, за разлика от системата ABO, няма естествени антитела. Анти-резус антитела възникват само след имунизация на Rh-отрицателен организъм в резултат на кръвопреливане на Rh-положителна кръв или бременност с Rh-положителен плод. В тялото на сенсибилизирани индивиди антителата срещу Rh антигените се запазват в продължение на няколко години, понякога през целия живот. В повечето случаи титърът на антирезусните антитела постепенно намалява, но отново се увеличава рязко, когато Rh-положителната кръв отново навлезе в тялото. Rh антителата се различават по специфичност (анти-D, анти-III C и т.н.) и по серологични свойства (пълни и непълни). Пълните антитела причиняват аглутинация на червени кръвни клетки в солена среда при стайна температура. За да възникне аглутинация под въздействието на непълни антитела, са необходими специални условия: повишена температура, колоидна среда (желатин, суроватъчен протеин). Рано се синтезират пълни антитела (IgM). имунна реакцияи скоро изчезват от кръвта. Непълните антитела (IgG, IgA) се появяват по-късно, синтезират се дълго време и причиняват развитие на хемолитична болест при новородени, тъй като преминават през плацентата и увреждат клетките на плода.

Определяне на Rh кръв

Методът за определяне на Rh фактора зависи от формата на Rh антителата в стандартния серум и метода на неговото приготвяне. Антирезусният серум е придружен от придружаващи инструкции, описващи метода, за който е предназначена тази серия серум.

За всяко изследване трябва да се постави контрола за проверка на специфичността и активността на антирезус серум. За контрол се използват стандартни Rh-положителни еритроцити от група 0(1) или същата група като изследваната кръв, а стандартните Rh-отрицателни еритроцити трябва да бъдат от същата група като изследваната кръв.

При определяне на Rh статуса чрез две серии стандартни серуми в случаите, когато те се използват по различни методи, резултатът се взема предвид като верен, ако съвпада и в двете серии изследвания след проверка на контролни проби, потвърждаващи специфичността и активността на всяка серия анти -Резус серум, т.е. при липса на аглутинация със стандартни Rh-отрицателни еритроцити от същата група и наличие на аглутинация със стандартни Rh-положителни еритроцити от същата група или група 0(1) и в контролни проби без анти-резус серум ( реагент). Ако при определяне на Rh статуса се наблюдава слаба или съмнителна реакция, тогава кръвта на лицето трябва да се изследва отново със същата и друга серия анти-резус серум и е препоръчително да се включи серум, съдържащ пълни антитела. Ако всички серии от серуми, съдържащи непълни антитела, също дават слаба или съмнителна реакция и реакцията с пълни антитела е отрицателна, това означава, че червените кръвни клетки съдържат слаб тип резус антиген, така нареченият фактор D u. В тези случаи Rh-типът на кръвта на пациента или бременната жена се обозначава като Rh-отрицателен (Rh-), а Rh-типът на кръвта на донора като Rh-положителен (Rh+), като по този начин се предотвратява преливането на кръвта му. на Rh-отрицателни реципиенти.

Определянето на Rh фактора може да се извърши и чрез следните методи.

Определяне на Rh фактор Rh 0 (D) чрез реакция на конглутинация с помощта на желатин (в епруветка, загрята до 46-48 ° C).

Определяне на Rh фактор Rho(D) чрез реакция на конглутинация в серумна среда върху нагрята плоскост.

Определяне на Rh фактор Rh 0 (D) чрез реакция на аглутинация във физиологична среда в малки епруветки. Реакцията на аглутинация в солена среда е подходяща само за работа със серум, съдържащ пълни Rh антитела.

Определяне на Rh фактор Rh 0 (D) с помощта на моноклонални антитела.

Определяне на Rh фактор Rho(D) с помощта на косвена пробаКумбс.

19 Анемия. Класификация и кратко описание на. Етиология и патогенеза на анемията.Анемията (от гръцки anemia - липса на кръв) е голяма група от заболявания, които се характеризират с намаляване на количеството хемоглобин или хемоглобин и червени кръвни клетки в единица обем кръв. Анемията е различна по етиология, механизми на развитие, клинична и хематологична картина, така че има много различни класификации, но не са достатъчно перфектни. L. I. Idelson предложи работна класификация на анемията за клиницисти: 1) остра постхеморагична анемия; 2) желязодефицитна анемия; 3) анемия, свързана с нарушен синтез или използване на порфирини (сидеробластична); 4) анемия, свързана с нарушена синтеза на ДНК и РНК (мегалобластна); 5) хемолитична анемия; 6) анемия, свързана с инхибиране на пролиферацията на клетки от костен мозък (хипопластична, апластична); 7) анемия, свързана с заместване на хематопоетичен костен мозък туморен процес(метапластични).

Анемията може да бъде както самостоятелно заболяване, така и съпътстващ симптом или усложнение на определени вътрешни заболявания, инфекциозни и онкологични заболявания. Има многофакторни анемии, т.е. от смесен произход, например: хемолитична анемия с дефицит на желязо, апластична анемия с хемолитичен компонент и др.

Зависи от:

1) стойностите на цветния индикатор разграничават анемията:

Нормохромен (цветов индекс 0,9-1,1);

Хипохромен (цветен индекс по-малък от 0,85);

Хиперхромен (цветен индекс над 1,15);

2) средният диаметър на червените кръвни клетки:

Нормоцитен (среден диаметър на еритроцитите 7,2-7,5 µm)

Микроцитен (средният диаметър на червените кръвни клетки е по-малък от 6,5 микрона),

Макроцитни (средният диаметър на червените кръвни клетки е повече от 8,0 микрона),

Мегалоцитен (средният диаметър на еритроцитите е повече от 12 микрона);

3) средният обем на еритроцитите във фемтолитри (fl, 1 fl е равен на 1 микрон 3):

Нормоцитен (среден обем на еритроцитите 87±5 fL);

Микроцити (среден обем на червените кръвни клетки под 80 fL);

Макроцитна (средният обем на червените кръвни клетки е повече от 95 fL);

4) нивото на ретикулоцитите в периферната кръв.

Регенеративна (брой ретикулоцити 0,5-5%);

Хиперрегенеративна (броят на ретикулоцитите е повече от 5%);

Хипо- и арегенеративни (броят на ретикулоцитите е намален или липсва, въпреки тежката анемия).

Нивото на ретикулоцитите е показател за регенеративната функция на костния мозък по отношение на еритропоезата.

Нормохромните анемии включват остра постхеморагична (в първите дни след загуба на кръв), хипо- и апластична, несфероцитна хемолитична, автоимунна хемолитична, метапластична (с левкемия, миелом и др.), Както и анемия, която се развива с ендокринни нарушения (хипофункция на надбъбречните жлези), бъбречни заболявания, хронични инфекции.

Хипохромните анемии включват желязодефицитна, сидеробластна, някои миелотоксични и хемолитична (таласемия).

В12-(фолат)-дефицит и някои хемолитични анемии са хиперхромни ( наследствена микросфероцитоза, ако микросфероцитите преобладават сред червените кръвни клетки в цитонамазката). Понякога анемията с дефицит на витамин B1 2 е нормохромна.

Нормоцитните включват остра постхеморагична, апластична, автоимунна хемолитична анемия и др.

Микроцитната анемия включва желязодефицитна и сидеробластна анемия, макроцитната анемия включва анемия с дефицит на вигамин В12 (фолат) и др.

Регенеративните анемии включват постхеморагична анемия; хиперрегенеративна - хемолитична анемия, особено състоянието след хемолитична криза; хипо- и арегенеративни - хипопластична, апластична анемия.

Костният мозък реагира на развитието на дефицит на желязо, хемолитична анемия с дразнене и хиперплазия на червени кълнове. При хипопластична анемия се наблюдава прогресивно намаляване на еритропоезата до пълното й изчерпване.

20.Лабораторна диагностиканаситени и ненаситени с желязо анемии. Желязодефицитна анемия. Видове дефицит на желязо. Лабораторни изследвания, отразяващи дефицита на желязо в организма. Картина на периферна кръв и костен мозък при IDA. Лабораторна диагностика на сидеробластна анемия. Метаболизъм и роля на желязото в организма

Желязото има голямо значениеза тялото, е част от хемоглобина, миоглобина, дихателните ензими. Разпределя се между дълготрайни активи.

Фонд за хемоглобин. Желязото в хемоглобина представлява 60-65% от общото съдържание на желязо в организма.

Спешен фонд. Това е желязото на феритин и хемосидерин, които се отлагат в черния дроб, далака, костния мозък и мускулите. Съставлява 30-40% от нивото на желязото в организма. Феритинът е водоразтворим комплекс от фери желязо и протеин апоферитин, съдържащ 20% желязо. Това е лабилна част от железния резервен фонд. При необходимост лесно се използва за нуждите на еритропоезата. Хемосидеринът е водонеразтворим протеин, подобен по състав на феритина, но съдържа голямо количествожелязо - 25-30%. Това е стабилна, твърдо фиксирана част от резервите на желязо в тялото.

Транспортният фонд е представен от желязо, свързано с транспортния протеин трансферин. Съставлява 1% от съдържанието на желязо в тялото.

Тъканният фонд е представен от желязо, желязосъдържащи ензими (цитохроми, пероксидаза и др.), Миоглобин. Съставлява 1% от съдържанието на желязо в тялото.

Общото съдържание на желязо в организма на възрастните е 4-5 г. Постъпва в организма с храната. Съдържа се в продукти от животински и растителен произход (месо, особено говеждо, черен дроб, яйца, бобови растения, ябълки, сушени кайсии и др.). Желязото се усвоява много по-добре от животинските продукти, отколкото от растителните, тъй като се съдържа в тях под формата на хем. Така 20-25% от съдържащото се в тях желязо се усвоява от месото, 11% от рибата и 3-5% от растителните продукти. Аскорбиновата киселина и органичните киселини (лимонена, ябълчена и др.) насърчават усвояването на желязото; танинът инхибира усвояването, високо съдържаниемазнини в диетата. Усвояването на желязо от хранителни продуктиограничен. На ден се абсорбират 2-2,5 mg желязо, за кратко време след тежко кървене могат да се абсорбират до 3 mg желязо. Основното количество желязо се абсорбира в дванадесетопръстника и в началната част на йеюнума. Малко количество желязо може да се абсорбира във всички части на тънките черва.

Усвояването на желязото протича на два етапа: 1) чревната лигавица улавя желязото, постъпило с храната; 2) желязото от чревната лигавица преминава в кръвта, зарежда се в трансферин и се доставя до местата на употреба и депото. Трансферинът също така пренася желязото от неговите фондове и клетки на фагоцитната мононуклеарна система, в която се извършва разрушаването на червените кръвни клетки, в костния мозък, където частично се използва за синтеза на хемоглобин и частично се депозира под формата на железни резерви, както и до други места за съхранение на желязо. Обикновено 1/3 от трансферина е свързан с желязото. Нарича се свързан трансферин или серумно желязо. Нормалните серумни нива на желязо при мъжете и жените са съответно 13-30 и 12-25 µmol/l. Частта от трансферин, която не е свързана с желязото, се нарича свободен трансферин или ненаситен, латентен серумен желязосвързващ капацитет. Максималното количество желязо, което трансферинът би могъл да прикрепи преди неговото насищане, се определя като общ желязосвързващ капацитет на серума (TIBC) (обикновено 30-85 µmol/l). Разликата между стойностите на TIBC и серумното желязо отразява латентния капацитет за свързване на желязо, а съотношението на серумното желязо към TIBC, изразено като процент, отразява процента на насищане на трансферин с желязо (нормално 16-50%). За да се прецени количеството железни резерви в организма, се извършва следното:

Изследване на серумните нива на феритин с помощта на радиоимунологични методи;

Десферален тест. Десферал (десфероксамин) е комплексон, който след въвеждане в тялото селективно се свързва с резервите от желязо, т.е. феритиново желязо, и го отстранява с урината. На пациента се инжектират интрамускулно 500 mg десферал еднократно, събира се дневна урина и се определя съдържанието на желязо в нея. След приложение на десферал нормално се екскретират с урината от 0,8 до 1,2 mg желязо, докато при пациенти с желязодефицитна анемия или при наличие на скрит дефицит на желязо количеството желязо, екскретирано с урината, рязко намалява;

Преброяване на броя на сидеробластите в пункцията на костния мозък и сидероцитите в периферната кръв. Сидеробластите са нормобласти, т.е. ядрени клетки от червения ред, в цитоплазмата на които се откриват сини гранули от железни резерви - феритин. Обикновено 20-40% от нормобластите са сидеробласти. Сидероцитите са червени кръвни клетки, в които се намират феритинови гранули. Нормално в периферната кръв: до 1% сидероцити. Феритиновите гранули в сидеробластите и сидероцитите се откриват чрез специално оцветяване с пруско синьо.

Организмът се характеризира с физиологични загуби на желязо в урината, изпражненията, жлъчката, ексфолираните клетки на чревната лигавица, потта, както и при подстригване на косата и ноктите. Жените губят желязо с цикъла си.

развитие желязодефицитна анемияпредшествано от скрит (латентен) дефицит на желязо. Пациентите имат оплаквания и Клинични признаци, характерна за желязодефицитна пиемия, но по-слабо изразена (слабост, умерена бледност кожатаи видими лигавици, главоболие, сърцебиене, често перверзия на вкуса и обонянието, суха кожа, чупливи нокти и др.). Изследването все още не разкрива промени в съдържанието на хемоглобин, червени кръвни клетки и други показатели на периферната кръв. Но се откриват нарушения в метаболизма на желязото: серумното желязо намалява, общата и латентна желязо-свързваща способност на серума се увеличава, процентът на насищане с трансферин намалява и нивото на железните резерви намалява. Това е сидеропения без анемия. Скритият дефицит на желязо може да се развие във всяка възраст, като жените, юношите и децата са особено склонни да страдат от него. Ако скритият железен дефицит не се компенсира, а се задълбочи, се развива желязодефицитна анемия.

Въпреки че всички полиморфизъм- резултат от разлики в ДНК последователността, някои полиморфни локуси са изследвани чрез тестване за промени в протеините, кодирани от тези алели, вместо чрез изследване на разликите в ДНК последователността на самите алели. Смята се, че всеки индивид вероятно е хетерозиготен за алели, дефиниращи структурно различни полипептиди при приблизително 20% от всички локуси; когато се сравняват индивиди от различни етнически групи, се открива полиморфизъм в още по-голяма част от протеините.

По този начин, в рамките на човешки видИма поразителна степен на биохимична индивидуалност в характеристиките на ензимите и другите генни продукти. Освен това, тъй като продуктите на много биохимични пътища си взаимодействат, е правдоподобно да се предположи, че всеки индивид, независимо от здравословното си състояние, има уникални, генетично определени биохимични характеристики и по този начин реагира уникално на околната среда, диетата и фармакологичните влияния.

Това е понятието химикал индивидуалност, изложено за първи път преди век от забележителния британски лекар Арчибалд Гарод, се оказа правилно.

Тук ще обсъдим няколко полиморфизмиимайки медицинско значение: кръвни групи ABO и Rh фактор Rh (важен при определяне на съвместимостта при кръвопреливания) и MHC (играе важна роля при трансплантация на органи и тъкани). Изучаването на промени в протеините, а не в ДНК, която ги кодира, има реални ползи; в края на краищата, различните протеинови продукти на различни полиморфни алели често са отговорни за различни фенотипове и следователно определят как генетичните промени в локуса влияят на взаимодействията организъм-среда.

Кръвни групи и техните полиморфизми

Първите примери са генетични предварително определени протеинови променитака наречените кръвногрупови антигени са открити в червените кръвни клетки. Известен е голям брой полиморфизми в компонентите на човешката кръв, особено в ABO и Rh антигените на еритроцитите. По-специално, системите ABO и Rh са важни при кръвопреливане, трансплантация на тъкани и органи и хемолитична болест на новороденото.

АВО кръвногрупова система

Човек кръвмогат да принадлежат към една от четирите групи, според наличието на повърхността на червените кръвни клетки на два антигена, А и В, и наличието в плазмата на две съответни антитела, анти-А и анти-В. Има четири основни фенотипа: 0, A, B и AB. Хората с група А имат антиген А в своите червени кръвни клетки, тези с група В имат антиген В, тези с група АВ имат антигени А и В и накрая тези с група 0 нямат никакъв антиген.

Една от характеристиките AVO групине се отнася за други кръвногрупови системи - това е реципрочна връзка между наличието на антигени в червените кръвни клетки и антитела в серума. Когато на червените кръвни клетки липсва А антиген, серумът съдържа анти-А антитела; когато B антигенът липсва, серумът съдържа анти-B антитела. Причината за реципрочната връзка е неизвестна, но се смята, че образуването на анти-А и анти-В антитела е отговор на присъствието на А- и В-подобни антигени в околната среда (например в бактерии).

Те се определят от локус на хромозома 9. Алелите A, B и 0 в този локус са класически пример за мултиалелизъм, когато три алела, два от които (A и B) се унаследяват като кодоминантни, а третият (0) като рецесивен белег, определя четири фенотипа. Антигените А и В се определят от действието на алелите А и В върху повърхностния гликопротеин на еритроцитите, наречен антиген Н.

Специфичността на антигените се определя от крайните въглехидрати, добавени към субстрата H. Алелът B кодира гликозилтрансфераза, която преференциално разпознава захарта D-галактоза и я добавя към края на олигозахаридната верига, съдържаща се в H антигена, като по този начин създава B Алелът А кодира малко по-различна форма на ензима, който разпознава и добавя N-ацетилгалактозамин към субстрата вместо D-галактоза, като по този начин създава антиген А. Третият алел, 0, кодира мутантна версия на трансферазата, която няма трансферазна активност и не засяга субстрата H.

Молекулни разлики в идентифицирания ген гликозилтрансферази, отговорен за алели A, B и 0. Последователност от четири различни нуклеотида, която се различава между алели A и B, води до аминокиселинни промени, които променят специфичността на гликозилтрансферазата. Алел 0 има делеция на един нуклеотид в кодиращия участък на ABO гена, причинявайки мутация на рамката и инактивираща трансферазна активност при хора с група 0. След като ДНК последователностите са известни, може да се направи определяне на груповата принадлежност в ABO системата директно на нивото на генотипа, а не на фенотипа, особено когато има технически затруднения при серологичния анализ, което често се случва в съдебната практика или при установяване на бащинство.

Видеото показва техниката за определяне на кръвна група с помощта на стандартни серуми:

Основно медицинско значение AVO системи- при кръвопреливане и трансплантация на тъкани или органи. Системата за кръвни групи ABO има съвместими и несъвместими комбинации. Съвместима комбинация е, когато червените кръвни клетки на донора не носят А или В антиген, съответстващ на антитялото в серума на реципиента. Въпреки че теоретично има "универсални" донори (група 0) и "универсални" реципиенти (група AB), на пациента се прелива кръв от неговата собствена ABO група, освен в спешни случаи.

Постоянно присъствие анти-АИ анти-Вантителата обясняват неуспеха на много ранни опити за кръвопреливане, тъй като тези антитела могат да причинят бързо унищожаване на ABO-несъвместими клетки. При трансплантация на тъкани и органи успешното присаждане изисква съвместимост на донора и реципиента според ABO и HLA групите (описани по-късно).

Rh кръвногрупова система

Според клиничните Rh системна стойностсравнима със системата ABO поради нейната роля в развитието на хемолитична болест на новороденото и при несъвместимост с кръвопреливания. Името Rh идва от маймуните резус, използвани в експериментите, довели до откриването на системата. Просто казано, населението е разделено на Rh-положителни индивиди, които експресират в своите еритроцити Rh D антигена, полипептид, кодиран от гена (RHD) на хромозома 1, и Rh-отрицателни индивиди, които не експресират този антиген. Отрицателният Rh фенотип обикновено се причинява от хомозиготност за нефункционален алел на RHD гена. Честотата на Rh-отрицателните индивиди варира значително сред различните етнически групи. Например, 17% от белите и 7% от афроамериканците са Rh отрицателни, в сравнение със само 0,5% от японците.

Хемолитична болест на новородените и кръвни групи

Основното клинично значение на системата Rh- че Rh-отрицателните индивиди могат лесно да образуват анти-Rh антитела след среща с Rh-положителни червени кръвни клетки. Това се превръща в проблем, когато Rh-отрицателна майка носи Rh-положителен плод. Обикновено по време на бременност малки количества фетална кръв преминават през плацентарната бариера и навлизат в кръвния поток на майката. Ако майката е Rh отрицателна, а плодът е Rh положителен, майката образува антитела, които се връщат към плода и увреждат неговите червени кръвни клетки, причинявайки хемолитична болест на новороденото със сериозни последици.

U Rh-отрицателни бременни женирискът от имунизация с Rh-положителни фетални еритроцити може да бъде сведен до минимум чрез прилагане на анти-резус имуноглобулин на 28-32 гестационна седмица и допълнително малко след раждането. Човешкият антирезус имуноглобулин премахва резус-положителните фетални клетки от кръвообращението на майката, преди те да я сенсибилизират. Анти-резус имуноглобулин се прилага и след спонтанен аборт, аборт или инвазивни процедури като IVS или амниоцентеза, в случаите, когато Rh-положителни фетални клетки навлязат в кръвния поток на майката. Откриването на Rh системата и нейната роля в развитието на хемолитична болест на новороденото е важен принос на генетиката в медицината.